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作者：汪怡临扬州大学

学位级别：硕士

原始生殖细胞(primordial germ cell,PGCs)作为配子的祖先细胞,是生殖细胞发育过程中必不可少的。研究PGCs的发生和分化机理对动物种质资源保存、创新利用以及基因修饰鸡的生产等领域具有重要理论和实践意义。PGCs的发生受到许多因素的... 详细信息

原始生殖细胞(primordial germ cell,PGCs)作为配子的祖先细胞,是生殖细胞发育过程中必不可少的。研究PGCs的发生和分化机理对动物种质资源保存、创新利用以及基因修饰鸡的生产等领域具有重要理论和实践意义。PGCs的发生受到许多因素的影响。目前,研究者们已经发现一些关键性的基因、信号通路、生长因子和表观遗传修饰因素对PGCs的发生起重要调控作用。尽管这些因素对于PGCs形成起到了一定的促进作用,但体外诱导PGCs的生成效率并没有得到提高。因此,亟需从新的领域对PGCs的生成机制进行创新性地探究,深入了解和认识PGCs的形成过程,以期获取能够满足生产研究所需的大量PGCs细胞。随着测序技术和生物信息分析技术的发展,长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)在生殖细胞分化与胚胎发育过程中的作用逐渐受到重视。研究lncRNA对PGCs发生的影响及机制,能够为提高PGCs体外生成效率提供新的研究策略。本研究基于前期单细胞高通量测序结果筛选得到鸡PGCs特异表达lncRNA-M1ANCR,利用RNA干扰技术,以家鸡为研究对象,从体内和体外两个水平探究了 lncRNA-M1ANCR在PGCs发生过程中的功能和机制,为有效提高PGCs效率提供理论依据和参考。研究结果如下:(1)lncRNA-M1ANCR的全长扩增,细胞定位与编码能力鉴定:基于前期高通量测序筛选得到PGCs特异性表达lncRNA,命名为lncRNA-M1ANCR,通过RACE实验扩增获得 lncRNA-M1ANCR 全长(共计 1115bp),qRT-PCR 验证了 lncRNA 在 PGCs 中特异性高表达(ESCs:1.021±0.231,PGCs:5.131±1.23,SSCs:1.825±0.828),与转录组测序(ESCs:1.143±0.350,PGCs:37.131±1.053,SSCs:6.825±0.923)结果一致,细胞定位监测发现lncRNA-M1ANCR定位于PGCs细胞质中(细胞核:0.773±0.051,细胞质:3.395±0.583);生物信息学预测发现lncRNA-M1ANCR的4bp-115bp为开放阅读框序列,构建原核融合表达载体发现该序列在BL菌种中不表达蛋白,表明明lncRNA-M1ANCR不存在编码小肽能力。(2)体内外研究lncRNA-M1ANCR在PGCs形成过程中的功能:根据lncRNA-M1ANCR全长序列,设计三个shRNA靶位点,连入pGMLV-SC5干扰载体,转染DF-1细胞后通过定量检测发现3号靶位点的干扰效率(67.16%±2.0%)最高且显著高于对照组(P<0.01);同时,克隆lncRNA-M1ANCR全长,构建pcDNA-M1ANCR过表达载体;然后,将lncRNA-M1ANCR慢病毒干扰载体与过表达载体分别转染鸡ESCs,在RA诱导条件下,观察细胞分化形态的变化,结果发现,干扰lncRNA后,类PGCs形成数量(3±1/400×视野)较RA单独诱导组(10±2个/400×视野)和过表达组(12±2个/400×视野)显著减少;进一步采用qRT-PCR检测PGCs细胞特异性标记基因Cvh和C-kit的表达水平发现,干扰组的表达量(CvA:1.029±0.062,C-kit:1.154±0.009)显著低于过表达组(Cvh:1.672±0.123,C-kit:2.232±0.029)和诱导组(CvA:1.232±0.234,C-kit:1.561±0.017)(P<0.01),而全能性基因Nanog的表达(Nanog:1.029±0.024)则显著高于过表达组(Nanog:0.918±0.038)与诱导组(Nanog:0.984±0.033)(P<0.01);间接免疫荧光检测结果表明,干扰组Cvh的表达显著低于RA诱导组和过表达组;流式细胞检测发现,干扰组诱导4d后产生的类PGCs细胞(3.96%±0.32%)显著少于RA诱导组(9.67%±0.24%)和过表达组(12.1%±0.46%)(P<0.01);体内实验中,将干扰载体与过表达载体通过血管注射整合进入鸡胚后,检测生殖标记基因在PGCs的表达情况,发现均出现显著性下降(Cvh:2.631±0.208,C-kit:3.028±0.23)(P<0.01),同时通过石蜡切片观察PGCs细胞在生殖嵴的数量,发现干扰组PGCs的形成明显减少(15±0.57个);为进一步说明lncRNA对PGCs形成的影响,流式细胞分选仪检测干扰lncRNA后PGCs的形成被抑制(4.0%±1.1%),与体外诱导结果一致。结果表明,lncRNA-M1ANCR对鸡ESCs向PGCs的分化过程具有正向调控作用。(3)lncRNA-M1ANCR

关键词：鸡 lncRNA-M1ANCR 原始生殖细胞 ceRNA MAPK信号 ILF3蛋白

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睾丸注射Mx-NA双基因制备抗病转基因鸡的研究

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中国家禽 2014年第14期36卷 8-12页

作者：靳锴汪怡临左其生李东张蕾傅德智王颖洁张亚妮李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009

本研究利用精原干细胞介导法体内转染重组载体pVITRO2-Mx-NA以生产抗病转基因鸡。采用睾丸注射法将脂质体包裹的线性化质粒通过随机打点注射入公鸡睾丸,采集25、50、60、70d后试验公鸡的精液,提取基因组DNA,采用常规PCR检测外源Mx-NA联... 详细信息

本研究利用精原干细胞介导法体内转染重组载体pVITRO2-Mx-NA以生产抗病转基因鸡。采用睾丸注射法将脂质体包裹的线性化质粒通过随机打点注射入公鸡睾丸,采集25、50、60、70d后试验公鸡的精液,提取基因组DNA,采用常规PCR检测外源Mx-NA联合基因的整合;转染后60d采集阳性公鸡精液人工授精母鸡,采用PCR和Western blot方法检测后代血液中外源NA-Mx联合基因的表达情况。结果表明:PCR检测证实外源Mx-NA联合基因已在精子基因组中表达,精液PCR阳性率为33.33%(2/6),且能通过体外受精在后代中检测到,后代PCR检测的阳性率为31.43%(11∕35),Western blot检测F1代阳性率为28.6%(10/35)。以上结果证明外源Mx-NA基因能稳定整合到鸡的基因组中,表明睾丸注射法是一种操作简单、有效的制备抗病转基因鸡的方法。

关键词：睾丸注射法 Mx-NA联合基因转基因鸡

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睾酮诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的研究

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中国家禽 2015年第11期37卷 12-18页

作者：张晨蒋一秀王颖洁赵瑞丰王曼张文慧靳锴汪怡临张亚妮李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

试验旨在探讨睾酮对鸡胚胎干细胞(ESCs)向雄性生殖细胞分化过程中的诱导作用效果。首先对睾酮的适宜诱导浓度进行筛选,再联合支持细胞和维甲酸(RA)对传至2代的ESCs进行诱导,通过形态学观察、实时荧光定量PCR及免疫细胞化学对诱导结果进... 详细信息

试验旨在探讨睾酮对鸡胚胎干细胞(ESCs)向雄性生殖细胞分化过程中的诱导作用效果。首先对睾酮的适宜诱导浓度进行筛选,再联合支持细胞和维甲酸(RA)对传至2代的ESCs进行诱导,通过形态学观察、实时荧光定量PCR及免疫细胞化学对诱导结果进行检测。结果表明:单独使用睾酮诱导,未出现精原干细胞(SSCs)样细胞;睾酮与支持细胞联合诱导时,在第6天有少许类胚体出现,至第12天,有少量SSCs样细胞;睾酮联合支持细胞和RA诱导过程中,诱导第2天出现类胚体,诱导第12天后出现类SSCs样细胞。实时荧光定量PCR结果显示,睾酮+支持细胞组中,ESCs标记基因Nanog、Sox2表达量均呈持续下调趋势,Dazl、integrinβ1、Stra8表达量持续上调;睾酮+支持细胞+RA共同诱导组中,各标记基因与ESCs向生殖细胞分化过程中各基因表达的趋势一致,并且Dazl的表达量明显高于对照组。睾酮单独诱导不能使ESCs向雄性生殖细胞分化,但有促进支持细胞和RA诱导效果的作用,该结果为进一步研究雄性生殖细胞的形成和调控机制提供理论基础。

关键词：鸡胚胎干细胞雄性生殖细胞分化睾酮

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不同注射部位和剂量对鸡胚发育的影响

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中国家禽 2014年第17期36卷 7-10页

作者：汪怡临靳锴蒋舒颖赵瑞丰左其生李东王颖洁张蕾张亚妮李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009

试验旨在探究不同注射部位和剂量对鸡胚孵化率及发育的影响,为鸡胚注射试验提供帮助和指导。以新鲜受精鸡蛋为材料,分别在鸡蛋的尖端、赤道面和钝端注射不同剂量的生理盐水,比较不同注射部位和剂量对种蛋孵化率的影响;分别在3个位置注... 详细信息

试验旨在探究不同注射部位和剂量对鸡胚孵化率及发育的影响,为鸡胚注射试验提供帮助和指导。以新鲜受精鸡蛋为材料,分别在鸡蛋的尖端、赤道面和钝端注射不同剂量的生理盐水,比较不同注射部位和剂量对种蛋孵化率的影响;分别在3个位置注射台盼蓝染液,观察记录鸡胚的发育情况。结果表明:不同注射部位对种蛋孵化率无显著性影响(P>0.05);种蛋孵化率随注射剂量的增加明显下降,注射100 μL剂量的种蛋孵化率明显高于其他剂量水平。不同注射位置和剂量的生理盐水对鸡胚发育的影响并不显著;台盼蓝注射后胚胎发育情况表明,在胚胎发育初期赤道面注射的扩散效果最好。

关键词：鸡胚注射剂量孵化率鸡胚发育

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CRISPR/Cas技术可有效介导家鸡基因敲除

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畜牧兽医学报 2016年第6期47卷 1266-1271页

作者：左其生王颖洁赵瑞丰程少泽汪怡临靳锴王飞纪艳芹路镇宇张文慧张亚妮李碧春扬州大学动物科学与技术学院扬州225009

本研究旨在家鸡上建立一种高效、稳定的基因组定点编辑技术体系,实现目的基因定点敲除,为后续家鸡基因编辑提供操作依据。基于NCBI数据库提供的CDS序列克隆C2EIP(chr2,Expression In PGC)基因全长,并根据基因序列中APM的位置设计特异性g... 详细信息

本研究旨在家鸡上建立一种高效、稳定的基因组定点编辑技术体系,实现目的基因定点敲除,为后续家鸡基因编辑提供操作依据。基于NCBI数据库提供的CDS序列克隆C2EIP(chr2,Expression In PGC)基因全长,并根据基因序列中APM的位置设计特异性gRNA1、gRNA2和gRNA3,并构建cas9/gRNA载体;将设计好的cas9/gRNA转染状态良好的DF-1,利用Luciferase SSA重组检测法、T7E1酶切法以及TA克隆测序法检测gRNA在DF-1细胞中基因的敲除效率。Luciferase SSA重组检测结果表明,只有cas9/gRNA3载体具有基因敲除活性,荧光活性比对照组高两倍,T7E1酶切结果显示cas9/gRNA3基因的敲除活性为27%,TA克隆测序结果表明,30个测序菌液中有8个菌液出现不同数目的碱基缺失或增加,初步估计基因敲除效率为26%。通过本研究在家鸡中初步建立了cas9介导的基因敲除技术,该技术能够稳定的在鸡的细胞DF-1上介导基因敲除。

关键词： CRISPR/Cas 基因敲除鸡

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如皋黄鸡功能未知基因C1EIP表达载体的构建及其抗小鼠血清制备

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中国兽医学报 2017年第6期37卷 1161-1166页

作者：李东王飞纪艳芹汪怡临王曼张晨王颖洁何娜娜靳锴路镇宇程少泽张亚妮李碧春扬州大学动物科学技术学院江苏扬州225009

为了深入研究鸡胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)向雄性生殖细胞分化过程,基于RNA-Seq基础,筛选出功能未知且差异极其显著的关键基因C1EIP,PCR克隆得到其编码区全长序列409bp,构建其真核表达载体pcDNA3.0-C1EIP和pEGFP-C1EIP,实现C1... 详细信息

为了深入研究鸡胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)向雄性生殖细胞分化过程,基于RNA-Seq基础,筛选出功能未知且差异极其显著的关键基因C1EIP,PCR克隆得到其编码区全长序列409bp,构建其真核表达载体pcDNA3.0-C1EIP和pEGFP-C1EIP,实现C1EIP在真核细胞内的定位表达,并以PEI包裹pcDNA3.0-C1EIP后免疫小鼠制备抗血清。间接免疫荧光检测抗血清效价为1∶10,RT-PCR和Western blot证实C1EIP真核表达载体成功表达且抗血清效果良好,为C1EIP基因在ESCs向雄性生殖细胞分化过程中的功能研究奠定了基础。

关键词：如皋黄鸡 C1EIP 功能未知基因真核表达抗血清

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氮氧共掺杂g-C3N4/BiOCl异质结材料的制备及光催化降解盐酸四环素性能

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精细化工 2025年

作者：裴晓龙杨琦杨智临陕西省生态环境厅环境监测中心站中国地质大学(北京) 中国环境科学研究院

以双氰胺、草酸二水合物、五水合硝酸铋、氯化铵为主要原料，通过煅烧-溶剂热-煅烧法制备了氮氧共掺杂g-C3N4/BiOCl异质结材料Bi9O13.5Cl2-N/O/g-C3N4（NOBCN），将其用于光催化降解水体中盐酸四环素（TCH）。采用SEM、FTIR、EDS、XRD、... 详细信息

以双氰胺、草酸二水合物、五水合硝酸铋、氯化铵为主要原料，通过煅烧-溶剂热-煅烧法制备了氮氧共掺杂g-C3N4/BiOCl异质结材料Bi9O13.5Cl2-N/O/g-C3N4（NOBCN），将其用于光催化降解水体中盐酸四环素（TCH）。采用SEM、FTIR、EDS、XRD、XPS、BET对其进行了表征，考察了溶液pH、共存离子对NOBCN光催化降解TCH性能的影响，探究了N、O掺杂对NOBCN光催化性能提升的原因，推测了其机理。结果表明，料液比（g∶L，催化剂质量和TCH溶液体积之比，下同）为0.5∶1的NOBCN在120 min时对初始质量浓度为5.0 mg/L的TCH降解率为98.4%。在pH＝7或9时，NOBCN在120 min内对TCH的降解率可达100%。NOBCN以薄片花瓣的形式围绕成花朵形状，含氧官能团的增加提高了NOBCN的光催化降解TCH性能。NOBCN经5次循环使用后，TCH降解率仍可到79.6%，其具有出色的环境适应能力。羟基自由基和超氧自由基为NOBCN光催化降解TCH的活性物种。

关键词：盐酸四环素石墨氮化碳氯氧铋光催化异质结水处理技术

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美国智库对中国式现代化的话语建构——基于批判话语分析与LDA方法

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智库理论与实践 2025年

作者：王莉丽郑博临中国人民大学新闻学院

[目的/意义]加强对美国智库中国式现代化相关文本的批判性、战略性研究，有助于廓清美国精英舆论对中国式现代化的话语建构机制，针对性增进中国智库的国际传播效能，推进中国特色新型智库现代化建设，更好提升中国式现代化理论体系的... 详细信息

[目的/意义]加强对美国智库中国式现代化相关文本的批判性、战略性研究，有助于廓清美国精英舆论对中国式现代化的话语建构机制，针对性增进中国智库的国际传播效能，推进中国特色新型智库现代化建设，更好提升中国式现代化理论体系的国际话语权与国家文化软实力。[方法/过程] 本文以6家美国代表性智库涉及中国式现代化的文本为研究对象，借鉴LDA主题建模与批判话语分析框架，从概念隐喻、宏观主题、认知框架考察美国智库的话语建构模式，揭示话语背后的权力关系与意识形态。[结果/结论] 美国智库陷入国强必霸与零和博弈的现实主义意识形态漩涡，调用冷战、竞赛、转向等概念隐喻，赋予中国式现代化难以持续、缺乏制衡、一意孤行等负面意义；单一锚定军事与经济主题，强化军事威胁与经济崩溃的极端认知，消解中国式现代化“替代性方案”的话语主体性，使其被迫成为转嫁西方式现代化结构性矛盾的外部敌人。本文建议拆解还原权力关系，提升话语解构意识；聚合多元传播主体，重振经济“光明论”；摆脱认知依附，化认知空白为传播机遇。

关键词：中国式现代化智库话语建构意识形态

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和合与宋代民族共同体建构研究

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临沂大学学报 2025年第1期 71-82页

作者：王智临清华大学政治学系

两宋政权与非汉民族建立的辽、西夏、金等王朝并立共生，在各族群间并立、冲突、互鉴、融合的过程中，汉人以其文化与经济而非武力的优势表现出强大的内聚力，与契丹、党项、女真等民族融合，使“义若一家”的民族格局得以延续。宋王朝... 详细信息

两宋政权与非汉民族建立的辽、西夏、金等王朝并立共生，在各族群间并立、冲突、互鉴、融合的过程中，汉人以其文化与经济而非武力的优势表现出强大的内聚力，与契丹、党项、女真等民族融合，使“义若一家”的民族格局得以延续。宋王朝政治、军事上的弱势，不代表其在民族融合中的无为。北宋一直占据着中华文化的核心区域，并持续经营西北，颇多建树，契丹、女真政权在看到并吞大宋无望的前景后，更愿意加强与汉人政权的经济文化交往，为边地人民接触、认识、接受、认同中华文化提供了宽广舞台。南宋占有的半壁江山之西南区域民族成分复杂，为赵宋政权推进民族共同体建设留下了广阔空间。赵宋王朝在云贵川等地的经营，促进了当地人民对中华文化的认同意识，无数散落在大山中的人民从此集合在“中国人”的旗帜下，为嗣后中华民族的形成、多民族统一国家的进一步发展发挥了无可或缺的推动作用。

关键词：和合民族共同体文化认同

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基于改进YOLOv8m-PSC的露天煤矿危险驾驶行为检测系统

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煤炭学报 2025年

作者：马力雷尧常治国井宇航刘浩强李学斌马宁马龙李临林西安科技大学能源学院新疆工程学院新疆煤炭资源绿色开采教育部重点实验室国家能源集团神延煤炭有限责任公司

露天煤矿环境复杂多变，安全生产面临诸多挑战，其中危险驾驶行为是威胁矿区安全生产的重要因素之一。矿区内重型机械和运输车辆频繁作业，由于道路条件复杂、作业环境恶劣，驾驶员一旦出现疏忽或违规操作，极易引发重大事故，造成严重... 详细信息

露天煤矿环境复杂多变，安全生产面临诸多挑战，其中危险驾驶行为是威胁矿区安全生产的重要因素之一。矿区内重型机械和运输车辆频繁作业，由于道路条件复杂、作业环境恶劣，驾驶员一旦出现疏忽或违规操作，极易引发重大事故，造成严重的人员伤亡和经济损失。目前，矿区通常采用人工巡检和车载视频回放检查等传统安全监控手段，但这些方法存在效率低、实时性差，耗费大量人力且有监控盲区等缺点，难以有效应对由于危险驾驶行为而导致的事故风险。随着深度学习和计算机视觉技术的迅速发展，利用先进技术手段提升矿区危险驾驶行为检测效率成为重要方向。相比传统手段，智能检测系统能够实现对危险行为的实时检测和预警，不仅提高了监控覆盖率，还有效减少了人力资源的投入。因此，设计并开发适用于露天煤矿环境的危险驾驶行为检测系统，不仅是当前矿区安全管理的迫切需求，也是推动矿山智能化发展的重要方向。本文在现有YOLOv8m模型的基础上，针对现有模型的参数量大、计算量高及夜晚车内光线较差导致检测精度低等问题，开展了面向露天煤矿危险驾驶行为检测方法研究，运用对比实验、消融实验及理论分析等方法，提出了一种结合部分卷积、自注意力机制及通道混洗的目标检测改进模型YOLOv8m-PSC。在此基础上，设计并实现了基于改进模型的危险驾驶行为检测系统。系统通过PySide6构建直观简便的图形用户界面，能够快速部署到实际生产环境中，弥补了传统监控手段的不足，对露天矿危险驾驶行为进行快速且准确的监控。实验结果表明，改进后的模型在性能上有显着提升：危险驾驶行为的平均检测精度达到83.7%，参数量减少了40.2%，浮点计算量下降了62.6%，推理速度提升了10.7%，均较原模型有显着提高，实现了在露天矿复杂场景下对疲劳驾驶、分心驾驶等危险驾驶行为高效、实时的检测。改进模型的提出不仅在技术上实现了目标检测模型的进一步优化，也为危险驾驶行为的实时检测提供了理论和实践的参考。此外，系统开发流程中引入了图形界面设计思路，为智慧矿山建设中的人机交互系统设计提供了创新性方案。

关键词：危险驾驶行为部分卷积自注意力机制 YOLOv8m-PSC PySide6

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