睾丸注射Mx-NA双基因制备抗病转基因鸡的研究

作     者：靳锴 汪怡临 左其生 李东 张蕾 傅德智 王颖洁 张亚妮 李碧春 

作者机构：扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 

出 版 物：《中国家禽》 (China Poultry)

年 卷 期：2014年第36卷第14期

页      面：8-12页

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

基　　金：国家自然科学基金(31272429 31301959) 江苏省高校自然科学重大基础研究项目(08KJA230001) 江苏省六大人才高峰基金 

主　　题：睾丸注射法 Mx-NA联合基因 转基因鸡 

摘      要：本研究利用精原干细胞介导法体内转染重组载体pVITRO2-Mx-NA以生产抗病转基因鸡。采用睾丸注射法将脂质体包裹的线性化质粒通过随机打点注射入公鸡睾丸,采集25、50、60、70d后试验公鸡的精液,提取基因组DNA,采用常规PCR检测外源Mx-NA联合基因的整合;转染后60d采集阳性公鸡精液人工授精母鸡,采用PCR和Western blot方法检测后代血液中外源NA-Mx联合基因的表达情况。结果表明:PCR检测证实外源Mx-NA联合基因已在精子基因组中表达,精液PCR阳性率为33.33%(2/6),且能通过体外受精在后代中检测到,后代PCR检测的阳性率为31.43%(11∕35),Western blot检测F1代阳性率为28.6%(10/35)。以上结果证明外源Mx-NA基因能稳定整合到鸡的基因组中,表明睾丸注射法是一种操作简单、有效的制备抗病转基因鸡的方法。