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荷叶碱通过增强自噬缓解高NEFA引起的乳腺上皮细胞氧化损伤

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中国兽医学报 2022年

作者：邵琦杜希良雷林李心慰官员吉林大学动物医学学院吉林大学动物科学学院

围产期高产奶牛能量负平衡（negative energy balance， NEB）易导致糖脂代谢紊乱疾病多发，如酮病，脂肪肝等，同时伴随着血液中非酯化脂肪酸（NEFA）升高和乳腺组织氧化损伤。荷叶碱（Nuciferine，NF）是荷叶的主要活性成分，而自噬...

围产期高产奶牛能量负平衡（negative energy balance， NEB）易导致糖脂代谢紊乱疾病多发，如酮病，脂肪肝等，同时伴随着血液中非酯化脂肪酸（NEFA）升高和乳腺组织氧化损伤。荷叶碱（Nuciferine，NF）是荷叶的主要活性成分，而自噬可以调节细胞的氧化状态，尚不清楚NF对高NEFA引起的乳腺组织氧化损伤的影响及自噬参与机制。因此本研究旨在探讨NF对高NEFA诱导的奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）的氧化损伤的改善作用及潜在机制。试验分为两个部分，试验一：采用体外培养的奶牛乳腺上皮细胞（BMECs），用0或者1.2 mM的NEFA处理 24 h，分别添加0，100，200 μmol/L的NF处理12 h，通过流式细胞仪和试剂盒检测氧化损伤指标的变化；同时采用Western blot检测NF处理的BMECs的细胞自噬蛋白p62和LC3-II的表达丰度，并结合qRT-PCR检测自噬相关蛋白5(ATG5)和自噬相关蛋白7(ATG7)的mRNA表达水平。结果显示，NF显著降低高NEFA诱导的活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）蓄积，同时提高谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）的活性；此外，NF处理显著增加BMECs的LC3-II表达丰度，降低p62的表达，并显著上调自噬基因ATG5和ATG7的mRNA水平。上述结果表明NF可以增强BMECs自噬，并能够缓解高NEFA引起的BMECs氧化应激。试验二：用1.2mM NEFA诱导BMECs氧化损伤，添加0或100 μmol/L的NF处理，同时添加氯喹（CQ，一种自噬抑制剂），检测LC3-II和p62蛋白的表达丰度、ATG5和ATG7基因的mRNA水平的表达以及氧化损伤指标的变化。结果显示，NF处理显著降低高NEFA诱导的自噬蛋白p62表达，增加LC3-II的蛋白表达和自噬基因ATG5和ATG7的mRNA水平；经CQ处理后ATG5和ATG7的mRNA水平表达无显著变化，p62和LC3-II蛋白表达均上调，MDA水平显著增加，CAT酶活显著下降。综上结果表明，NF可通过增强自噬缓解高NEFA引起的BMECs氧化损伤。

关键词：

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新课改背景下构建小学语文高效课堂的策略

中国校外教育 2019年第28期 132-132,125页

作者：杜希良临沂滨河实验学校

在新课改背景下,教师要想实现小学语文高效课堂构建的目标,必须创新教学理念,合理应用现代化信息技术,优化教学设计,丰富教学方式,丰富教学内容,降低学生理解和掌握语文知识的难度.同时,在教学时,教师应该根据自身对于课文的理解,把握... 详细信息

在新课改背景下,教师要想实现小学语文高效课堂构建的目标,必须创新教学理念,合理应用现代化信息技术,优化教学设计,丰富教学方式,丰富教学内容,降低学生理解和掌握语文知识的难度.同时,在教学时,教师应该根据自身对于课文的理解,把握教学重难点,合理分配课堂时间,通过设置层层渐进的问题,引导学生自主思考,解答问题,把握课文内容,并通过构建合理的评价机制,督促学生主动学习,激发其主观能动性,成为课堂的小主人.

关键词：新课改小学语文高效课堂

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当前养猪生产中药物使用现状及其应对措施

中国猪业 2012年第11期 63-65页

作者：杜希良王鹏张建海山西农业大学动物科技学院

兽药在养猪业的大量使用,使猪肉产品中药物残留量大大增加,对猪肉的品质和人类的健康构成潜在威胁。本文主要分析了当前养猪业的药物使用现状与危害,并有针对性地提出控制措施。

关键词：养猪业药物使用现状药物残留应对措施

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经络磁场疗法机制初探

新中医 1977年第2期 33-35页

作者：林中鹏高英奇杜希良冶金工业部有色金属研究院

经络磁场疗法(简称“磁疗”)就是以经络学说为依据,用磁场代替针刺,作用于患者体表某些特定的经络穴位(或“以痛为俞”)

关键词：经络实质疼痛穴位磁疗

围产期酮病奶牛与健康奶牛相关氧化状态分析比较

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中国畜牧兽医文摘 2017年第3期33卷 65-66页

作者：杨丹王哲李心慰杜希良吉林大学动物医学学院吉林长春130062 天津市动物疫病预防控制中心天津300402

奶牛酮病是处于围产期奶牛机体内碳水化合物以及脂肪无法正常代谢并使能量达到负平衡状态逐渐演变而成的营养代谢失调性常见多发病,本文通过相关实验对酮病奶牛与健康奶牛氧化状态进行分析比较,为深入研究氧化应激的相关性奠定基础。

关键词：围产期酮病奶牛健康奶牛氧化状态

能量补充剂对酮病奶牛肝脏代谢和肝损伤的影响

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吉林农业大学学报 2024年第1期46卷 161-167页

作者：李伟房志愿陈喜莹杜希良刘国文李心慰吉林大学动物医学学院长春130062

将杜仲粉、过瘤胃葡萄糖等12种成分按照一定比例混合后,制成能量补充剂,选择6头围产期健康奶牛与30头围产期酮病奶牛分别进行能量补充剂毒性试验与酮病治疗效果评价试验。结果表明:健康围产期奶牛连续灌服7 d能量补充剂不会对奶牛肝肾... 详细信息

将杜仲粉、过瘤胃葡萄糖等12种成分按照一定比例混合后,制成能量补充剂,选择6头围产期健康奶牛与30头围产期酮病奶牛分别进行能量补充剂毒性试验与酮病治疗效果评价试验。结果表明:健康围产期奶牛连续灌服7 d能量补充剂不会对奶牛肝肾功能造成损伤。酮病奶牛连续灌服能量补充剂3 d后,显著降低血液β-羟丁酸、游离脂肪酸浓度,同时显著提高血糖浓度;灌服能量补充剂能显著增加酮病奶牛血液过氧化物酶体标志酶过氧化氢酶以及谷胱甘肽过氧化物酶活性,显著降低氧化应激标志物丙二醛含量;此外,血液炎性细胞因子IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α含量以及肝损伤指示酶丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶的含量及总胆红素和间接胆红素的含量显著降低;灌服能量补充剂能显著促进酮病奶牛肝脏AMPK的磷酸化和SIRT3的蛋白表达。综上,灌服能量补充剂有效缓解酮病的能量负平衡、氧化应激、炎性反应和肝损伤。

关键词：奶牛围产期能量负平衡酮病能量补充剂肝损伤

低钙血症奶牛血液代谢指标分析及诊断敏感指标筛选

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中国兽医学报 2022年第4期42卷 780-785页

作者：高昕星余昊史珍房志愿李心慰杜希良刘国文吉林大学动物医学学院吉林长春130062

为筛选除血钙浓度之外的能有效诊断和监测亚临床、临床低钙血症奶牛的潜在辅助指标,本试验选取健康奶牛、临床和亚临床低钙血症奶牛各20头,采血后分离收集血清,分别检测矿物元素(Ca、P、Mg、Na、K)、能量代谢(Glu、NEFA、BHBA、TG)、肝... 详细信息

为筛选除血钙浓度之外的能有效诊断和监测亚临床、临床低钙血症奶牛的潜在辅助指标,本试验选取健康奶牛、临床和亚临床低钙血症奶牛各20头,采血后分离收集血清,分别检测矿物元素(Ca、P、Mg、Na、K)、能量代谢(Glu、NEFA、BHBA、TG)、肝损伤(AST、ALT、ALP和GGT)和炎性反应(IL-1β、IL-6、IL-2、TNF-α、HP和SAA)等相关指标。结果显示,临床、亚临床低钙血症奶牛血液K、Mg、Na、Glu和IL-2的浓度与血钙浓度呈显著正相关,而P、NEFA、BHBA、IL-1β、IL-6、HP和SAA的浓度与血钙浓度呈显著负相关;临床、亚临床低钙血症奶牛血液TG与血钙浓度无显著相关性。结果表明,亚临床、临床低钙血症奶牛均存在不同程度的矿物元素失衡、能量代谢紊乱、肝损伤和系统性炎症,矿物元素(Mg、Na、K和P)浓度、能量代谢指标(Glu、NEFA和BHBA)状态和炎性因子(IL-1β、IL-2、IL-6、HP、SAA和TNF-α)可以作为联合敏感指标表征奶牛低钙血症,该研究为进一步寻找有效诊断和监测奶牛低钙血症的辅助指标提供数据支持。

关键词：围产期奶牛低钙血症诊断监测

非酯化脂肪酸对原代培养犊牛肝细胞胰岛素信号通路的影响

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中国兽医学报 2016年第3期36卷 508-512页

作者：杜希良王亚洲杨宇宸赵志波刘欢张世奇王哲李心慰刘国文吉林大学动物医学学院吉林长春130062

旨在探讨非酯化脂肪酸(nonestesterified fatty acids,NEFAs)对体外原代培养犊牛肝细胞胰岛素信号通路的影响及SIRT1在其中的调控作用。选择培养48h的原代犊牛肝细胞,添加不同浓度的NEFAs(0、0.6、1.2、1.8mmol/L),继续培养12h,胰岛素... 详细信息

旨在探讨非酯化脂肪酸(nonestesterified fatty acids,NEFAs)对体外原代培养犊牛肝细胞胰岛素信号通路的影响及SIRT1在其中的调控作用。选择培养48h的原代犊牛肝细胞,添加不同浓度的NEFAs(0、0.6、1.2、1.8mmol/L),继续培养12h,胰岛素处理组在收样前用100nmol/L胰岛素处理30min,每个浓度3个重复。另外选取已培养48h的细胞,用SIRT1抑制剂Nicotinamide(10mmol/L)处理12h,胰岛素处理组在收样前用100 mmol/L胰岛素处理30min。运用免疫印迹Western blot方法,检测NEFAs和Nicotinamide对肝细胞胰岛素信号通路关键蛋白IR和Akt的磷酸化水平及SIRT1蛋白表达水平的影响。结果显示,与对照组相比,1.2、1.8 mmol/L NEFAs组胰岛素刺激的IR磷酸化水平显著降低(P<0.01),而Akt的磷酸化程度在NEFAs浓度为0.6 mmol/L时即显著降低(P<0.01),同时,SIRT1的蛋白表达水平在NEFAs为1.2、1.8mmol/L显著降低(P<0.01);添加SIRT1抑制剂显著降低SIRT1的蛋白表达水平(P<0.01),同时胰岛素刺激的Akt磷酸化水平也显著降低(P<0.01)。结果表明,高浓度的NEFAs可以损伤体外原代培养肝细胞的胰岛素信号通路,SIRT1在NEFAs损伤的胰岛素信号通路中发挥重要作用。

关键词： NEFAs SIRT1 胰岛素信号通路肝细胞犊牛

NEFA对体外培养奶牛中性粒细胞TLR2/4介导的炎症信号通路的影响

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中国兽医学报 2015年第4期35卷 626-630页

作者：张玉明雷林蒋兴华杜希良高文文邓清华王哲李心慰刘国文吉林大学动物医学学院吉林长春130062

分离培养奶牛中性粒细胞(PMN),添加不同浓度的非酯化脂肪酸(NFEA),作用浓度分别为0.125、0.25、0.5、1和2mmol/L。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测炎性通路相关分子基因表达水平,采用ELISA检测炎性因子含量。结果显示,与对照组相比,T... 详细信息

分离培养奶牛中性粒细胞(PMN),添加不同浓度的非酯化脂肪酸(NFEA),作用浓度分别为0.125、0.25、0.5、1和2mmol/L。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测炎性通路相关分子基因表达水平,采用ELISA检测炎性因子含量。结果显示,与对照组相比,Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)和核转录因子NF-κBp65的mRNA表达水平逐渐增加,且0.5、1和2mmol/L NEFA处理组显著高于对照组(P<0.05,P<0.01);炎性细胞因子白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量也随着NEFA作用浓度的增加而增加,并且0.5、1和2mmol/L NEFA处理组显著高于对照组(P<0.05,P<0.01)。这些结果表明高浓度NEFA(≥0.5mmol/L)可以激活中性粒细胞TLR2/4介导的炎症信号通路,显著增加IL-1β、IL-6和TNF-α的合成和释放,造成中性粒细胞的炎性损伤,进而影响奶牛免疫机能。

关键词：非酯化脂肪酸中性粒细胞奶牛炎性因子