荷叶碱通过增强自噬缓解高NEFA引起的乳腺上皮细胞氧化损伤

作     者：邵琦 杜希良 雷林 李心慰 官员 

作者机构：吉林大学动物科学学院 吉林大学动物医学学院 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2022年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(32172927) 

摘      要：围产期高产奶牛能量负平衡（negative energy balance， NEB）易导致糖脂代谢紊乱疾病多发，如酮病，脂肪肝等，同时伴随着血液中非酯化脂肪酸（NEFA）升高和乳腺组织氧化损伤。荷叶碱（Nuciferine，NF）是荷叶的主要活性成分，而自噬可以调节细胞的氧化状态，尚不清楚NF对高NEFA引起的乳腺组织氧化损伤的影响及自噬参与机制。因此本研究旨在探讨NF对高NEFA诱导的奶牛乳腺上皮细胞（BMECs）的氧化损伤的改善作用及潜在机制。试验分为两个部分，试验一：采用体外培养的奶牛乳腺上皮细胞（BMECs），用0或者1.2 mM的NEFA处理 24 h，分别添加0，100，200 μmol/L的NF处理12 h，通过流式细胞仪和试剂盒检测氧化损伤指标的变化；同时采用Western blot检测NF处理的BMECs的细胞自噬蛋白p62和LC3-II的表达丰度，并结合qRT-PCR检测自噬相关蛋白5(ATG5)和自噬相关蛋白7(ATG7)的mRNA表达水平。结果显示，NF显著降低高NEFA诱导的活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）蓄积，同时提高谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）的活性；此外，NF处理显著增加BMECs的LC3-II表达丰度，降低p62的表达，并显著上调自噬基因ATG5和ATG7的mRNA水平。上述结果表明NF可以增强BMECs自噬，并能够缓解高NEFA引起的BMECs氧化应激。试验二：用1.2mM NEFA诱导BMECs氧化损伤，添加0或100 μmol/L的NF处理，同时添加氯喹（CQ，一种自噬抑制剂），检测LC3-II和p62蛋白的表达丰度、ATG5和ATG7基因的mRNA水平的表达以及氧化损伤指标的变化。结果显示，NF处理显著降低高NEFA诱导的自噬蛋白p62表达，增加LC3-II的蛋白表达和自噬基因ATG5和ATG7的mRNA水平；经CQ处理后ATG5和ATG7的mRNA水平表达无显著变化，p62和LC3-II蛋白表达均上调，MDA水平显著增加，CAT酶活显著下降。综上结果表明，NF可通过增强自噬缓解高NEFA引起的BMECs氧化损伤。