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pagC基因对鸡白痢沙门菌巨噬细胞内存活能力及致病力影响的初步研究

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pagC基因对鸡白痢沙门菌巨噬细胞内存活能力及致病力影响的初步研...

作者：李联悦南京农业大学

学位级别：硕士

沙门菌(Salmonella)是一种在自然界中分布广泛的病原菌,可导致人类和畜禽的多种疾病,其宿主谱十分广泛。鸡白痢(Pullorum Disease,PD)是由鸡白痢沙门菌(Salmonella Pullorum)引起的一种鸡的全身性疾病。临床表现为精神萎顿、腹泻、厌食... 详细信息

沙门菌(Salmonella)是一种在自然界中分布广泛的病原菌,可导致人类和畜禽的多种疾病,其宿主谱十分广泛。鸡白痢(Pullorum Disease,PD)是由鸡白痢沙门菌(Salmonella Pullorum)引起的一种鸡的全身性疾病。临床表现为精神萎顿、腹泻、厌食、产蛋下降等症状,2～3周龄以内雏鸡的病死率可达100%。感染该菌的成鸡可终身带菌,并且可经卵垂直传播。该菌对养禽业影响巨大,我国将净化种鸡场沙门菌病列入《国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020年)》。对鸡白痢沙门菌致病机理的研究,有助于实现我国防控鸡白痢的目标,具有十分重大的意义。沙门菌是一种兼性胞内寄生菌,其在巨噬细胞内的存活能力严重影响该菌在致病过程中的作用发挥,但该菌抗巨噬细胞清除的相关机制尚需深入研究。PhoP激活基因C(PhoP-activated gene C,pagC)编码的蛋白位于细胞膜上。pagC基因受到PhoP/PhoQ双组分系统调控,影响沙门菌在巨噬细胞内的存活能力。前期研究显示,pagC基因可促进鸡白痢沙门菌产生胞外囊泡(Outer Membrane Vesicles,OMVs),并进一步影响细菌生物被膜的形成。在此基础上,本研究以鸡巨噬细胞HD11作为细胞模型,研究pagC基因对鸡白痢沙门菌CVCC1800胞内存活能力及致病力的影响,并希望利用Tn-seq技术筛选鸡白痢沙门菌感染巨噬细胞过程相关的功能基因,为进一步阐明鸡白痢沙门菌的致病机理提供参考。1pagC基因对鸡白痢沙门菌在巨噬细胞内存活能力的影响本文对鸡白痢沙门菌CVCC1800在HD11细胞内的存活特性进行了初步研究。通过比较在37℃和42℃条件下CVCC1800株在HD11细胞内的存活情况,发现37℃条件下沙门菌胞内存活数显著高于42℃;通过对感染后不同时间点胞内沙门菌及对照组大肠杆菌计数发现,鸡白痢沙门菌可在HD11细胞内存活至少24h,而大肠杆菌在感染后20 h已被完全清除;HD11细胞感染鸡白痢沙门菌CVCC1800后,显微镜观察可见胞内巨大囊泡样结构。吞噬体内的酸性环境会刺激沙门菌激活PhoP/PhoQ双组份系统。PhoP 激活基因 C(PhoP-activated gene C,pagC)受 PhoP/PhoQ双组份系统调控,在鸡白痢沙门菌抗巨噬细胞清除过程中发挥作用。本文通过比较野生株、pagC基因缺失株及质粒回补株在巨噬细胞内的存活情况,发现细菌感染细胞20 h时pagC基因缺失株的细菌载量为2h时的5.42倍,而野生株及回补株的细菌载量为2 h时的1.89和1.81倍。以上研究初步证实pagC基因可抑制鸡白痢沙门菌在HD11细胞内的存活能力。2pagC基因对鸡白痢沙门菌CVCC1800致病力的影响前期工作表明鸡白痢沙门菌pagC基因缺失株在胞内的存活能力较野生株显著提高,pagC基因的这种特性可能会进一步影响鸡白痢沙门菌对雏鸡的致病力。本研究使用鸡白痢沙门菌CVCC1800野生株、pagC基因缺失株及回补株,通过灌胃及肌注的途径接种新生白羽肉鸡。攻毒120h内测量雏鸡体重并描绘体重曲线,结果表明,经肌注攻毒pagC基因缺失株会造成新生雏鸡体重减轻,而野生株较空白对照组差异不显著;死亡曲线也同样表明肌注pagC基因缺失株组雏鸡的死亡率为100%,而野生株组未观察到雏鸡死亡;病理切片显示肌注pagC基因缺失株组雏鸡盲肠病变更加严重,出现粘膜上皮脱落,炎性细胞浸润等现象;组织细菌载量测定结果表明,缺失株在雏鸡卵黄中的细菌载量为回补株组的10.41倍。本研究证实pagC基因可以降低细菌对雏鸡的致病力。3鸡白痢沙门菌pagC基因缺失株及野生株转座子突变体库的构建及筛选为了进一步研究CVCC1800株在巨噬细胞内存活机制,鉴定该菌与pagC相关的巨噬细胞内存活所需的基因,本研究使用mariner转座子通过接合转导的方式,分别以鸡白痢沙门菌CVCC1800野生株及pagC基因缺失株为亲本,构建了包含106个转座子突变体的Tn-seq突变体库。对CVCC1800野生株突变体库进行测序,分析结果表明转座子突变体库构建成功,且筛选到312个必需基因,为后续毒力基因筛选奠定了基础。另外分析还发现,在构建鸡白痢沙门菌CVCC1800转座子突变体库的过程中,质粒pSPI12上存在mariner转座子的插入热点,88%的插入均发生在该质粒上。该现象使文库的丰度降低,影响分析的准确性。后续的工作需先将该质粒从菌体中去除,才能获得高质量的文库,用于进一步对细菌在巨噬细胞内存活相关的毒力基因进行筛选分析。

关键词：鸡白痢沙门菌巨噬细胞 phoP激活基因C 转座子测序

鸡白痢沙门菌pagC缺失株的构建及菌蜕制备

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畜牧与兽医 2019年第6期51卷 86-91页

作者：路佳兴李联悦潘飞马喆南京农业大学动物医学院

为了开发具有鉴别诊断功能的鸡白痢沙门菌疫苗,通过λ-Red同源重组敲除鸡白痢沙门菌CVCC1800的pagC基因,成功获得ΔpagC菌株;合成细胞穿透肽(cell penetrating peptide,CPP)制备菌蜕并对处理条件进行了优化。结果显示:作用浓度为50μmol... 详细信息

为了开发具有鉴别诊断功能的鸡白痢沙门菌疫苗,通过λ-Red同源重组敲除鸡白痢沙门菌CVCC1800的pagC基因,成功获得ΔpagC菌株;合成细胞穿透肽(cell penetrating peptide,CPP)制备菌蜕并对处理条件进行了优化。结果显示:作用浓度为50μmol/L,ΔpagC菌液OD600 nm=0.4左右时CPP灭活效果最好。本研究制备的基于ΔpagC鸡白痢沙门菌菌蜕,在保留抗原性的同时为鉴别诊断提供了靶点,为后续开发针对鸡白痢沙门菌的鉴别诊断菌蜕疫苗奠定了基础。

关键词：鸡白痢沙门菌菌蜕细胞穿透肽 pagC缺失

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功能梯度石墨烯片增强复合材料梁的热后屈曲

计算力学学报 2024年

作者：吕颖张静李联和内蒙古师范大学数学科学学院无穷维哈密顿系统及其算法应用教育部重点实验室内蒙古应用数学中心

研究了固支边界条件下，非线性弹性基础上功能梯度石墨烯片增强复合材料(graphene platelets reinforced composite，简称GPLRC)梁在轴向力和温度场共同作用下的热后屈曲问题。基于Hamilton原理，采用一阶剪切变形梁理论和冯卡门非线性... 详细信息

研究了固支边界条件下，非线性弹性基础上功能梯度石墨烯片增强复合材料(graphene platelets reinforced composite，简称GPLRC)梁在轴向力和温度场共同作用下的热后屈曲问题。基于Hamilton原理，采用一阶剪切变形梁理论和冯卡门非线性应变位移关系，建立了梁的非线性控制方程，并将3个方程简化为2个关于挠度和转角的非线性方程，利用二次摄动技术化为一系列的摄动方程，逐阶求出渐进解，得到两端固支边界条件下热后屈曲温度的表达式。通过参数分析，探究了石墨烯片(graphene platelets，简称GPLs)的分布模式、几何形状、重量分数，以及弹性基础刚度参数、轴向力对热后屈曲温度的影响。计算结果表明：轴向拉力增大、弹性基础刚度增大、在靠近顶部和底部的位置添加更多的GPL都会提高热后屈曲的性能；非线性Winkler弹性基础会改变热后屈曲平衡路径。

关键词：热后屈曲二次摄动法石墨烯片功能梯度材料

《2023欧洲心脏病学会糖尿病患者心血管疾病管理指南》推荐要点

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中华高血压杂志（中英文） 2024年第4期32卷 310-314页

作者：占平云李联敬福建省南安市海都医院心血管内科福建南安362342 福建省南安市海都医院内三科福建南安362342

据国际糖尿病联盟(International Diabetes Federation,IDF)统计,2021年全球糖尿病成人患者已有约5.37亿,另有研究提示约1/3的糖尿病患者心血管疾病未被诊断[2],死亡风险极高。2023年8月25日,第71届欧洲心脏病学会(European Society of ... 详细信息

据国际糖尿病联盟(International Diabetes Federation,IDF)统计,2021年全球糖尿病成人患者已有约5.37亿,另有研究提示约1/3的糖尿病患者心血管疾病未被诊断[2],死亡风险极高。2023年8月25日,第71届欧洲心脏病学会(European Society of Cardiology,ESC)年会于荷兰阿姆斯特丹盛大召开,重磅公布了《2023ESC糖尿病患者心血管疾病管理指南》[3](《指南》),《欧洲心脏杂志》(European Heart Journal)在线发布。

关键词：欧洲心脏病学会心血管疾病成人患者管理指南死亡风险国际糖尿病联盟心脏杂志糖尿病患者

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光纤陀螺热致漂移分析及算法补偿技术研究

光学学报 2024年第2期44卷 127-134页

作者：冷悦钟胜华中科技大学人工智能与自动化学院湖北武汉430074 多谱信息智能处理技术全国重点实验室湖北武汉430074 华中光电技术研究所武汉光电国家研究中心湖北武汉430223

通过对光纤陀螺温度漂移的剖析推导,分析了温度扰动引起陀螺漂移误差的深层次原因,并结合过程相关性理论,对各个温度项影响因子与光纤陀螺实际输出相关性进行验证分析,提出一种同时考虑温度、温变速率、温度梯度以及三者乘积耦合项的算... 详细信息

通过对光纤陀螺温度漂移的剖析推导,分析了温度扰动引起陀螺漂移误差的深层次原因,并结合过程相关性理论,对各个温度项影响因子与光纤陀螺实际输出相关性进行验证分析,提出一种同时考虑温度、温变速率、温度梯度以及三者乘积耦合项的算法补偿模型。对该模型的补偿效果进行离线补偿验证,结果表明,采用该算法补偿模型能明显抑制光纤陀螺的变温零漂。为了进一步验证该模型的有效性,把离线获得的补偿参数载入陀螺存储器,经过多样本实验测试,补偿后可有效提高光纤陀螺的全变温零偏稳定性,验证了该补偿算法在工程上的可实施性和推广价值。

关键词：光纤光学光纤陀螺 Shupe效应光纤环圈温变速率补偿算法

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微波法制备碳纳米材料的机理及进展

材料导报 2024年第3期38卷 1-6页

作者：王加悦周涵上海交通大学材料科学与工程学院金属基复合材料国家重点实验室上海200240

微波法具有加热快速、易于控制、反应均匀等优点,是制备功能性碳纳米材料的重要技术。其制备原理是基于碳基材料优异的本征介电性能,碳基材料与微波电磁场相互作用产生介电损耗,快速形成局部高能场,实现高速制备。本文首先简要介绍了微... 详细信息

微波法具有加热快速、易于控制、反应均匀等优点,是制备功能性碳纳米材料的重要技术。其制备原理是基于碳基材料优异的本征介电性能,碳基材料与微波电磁场相互作用产生介电损耗,快速形成局部高能场,实现高速制备。本文首先简要介绍了微波与物质的相互作用机理,然后分别从微波在制备过程中的作用、关键实验参数以及微波制备的碳材料的特征等方面详细介绍了微波作为能量输入制备一维碳纳米管、二维石墨烯以及三维纳米多孔碳的优势,最后对宏量快速制备多功能和高性能碳纳米材料的发展进行了展望。

关键词：微波法碳纳米材料碳纳米管石墨烯多孔碳

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仿生纤维增强复合材料层压板的自由振动

工程力学 2024年

作者：武金炎吕颖张静李联和内蒙古师范大学数学科学学院内蒙古应用数学中心无穷维哈密顿系统及其算法应用教育部重点实验室

基于Hamilton原理和一阶剪切变形板理论，获得了Winkler-Pasternak弹性基础上仿生纤维增强复合材料层压板的自由振动控制方程。在四边固支和四边简支的边界条件下，利用微分求积法研究了仿生纤维增强复合材料层压板的无量纲固有频率，... 详细信息

基于Hamilton原理和一阶剪切变形板理论，获得了Winkler-Pasternak弹性基础上仿生纤维增强复合材料层压板的自由振动控制方程。在四边固支和四边简支的边界条件下，利用微分求积法研究了仿生纤维增强复合材料层压板的无量纲固有频率，讨论了叠层结构、边界条件、宽厚比、无量纲弹性基础刚度以及轴向载荷比对仿生纤维增强复合材料层压板无量纲固有频率的影响。结果表明，固有频率随Winkler弹性基础刚度、Pasternak弹性基础刚度、板宽厚比的增大而增大，随轴向载荷比的增大而减小。

关键词：仿生结构自由振动微分求积法弹性基础固有频率

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一株沙门菌噬菌体的分离及其生物学特性

畜牧与兽医 2017年第6期49卷 138-143页

作者：杨心怡李联悦马喆范红结南京农业大学动物医学院江苏南京210095

应用双层平板噬菌斑试验,从养殖场粪便、污水中分离到85株能裂解沙门菌的噬菌体,并筛选到1株裂解性强、噬菌谱广的噬菌体SQC73。随后测定了其酸碱耐受性、热稳定性、最佳感染复数和一步生长曲线。结果表明,SQC73酸碱耐受性和热稳定性良... 详细信息

应用双层平板噬菌斑试验,从养殖场粪便、污水中分离到85株能裂解沙门菌的噬菌体,并筛选到1株裂解性强、噬菌谱广的噬菌体SQC73。随后测定了其酸碱耐受性、热稳定性、最佳感染复数和一步生长曲线。结果表明,SQC73酸碱耐受性和热稳定性良好,最佳感染复数为100∶1,潜伏期为20 min,暴发期为70 min,平均裂解量为25.3;灭菌效果试验显示SQC73可以有效消灭平板上99%以上的沙门菌,模拟污染试验表明可以有效消灭96%以上的沙门菌,具有作为环境灭菌剂的潜力。

关键词：沙门菌噬菌体分离生物学特性

基于聚类和AdaBoost的ADS⁃B数据质量综合评估方法

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航空学报 2024年第13期45卷 381-392页

作者：张召悦阳颖中国民航大学空中交通管理学院天津300300

为更好地发挥ADS-B数据应用价值,针对ADS-B数据质量评估过程中传统方法无法客观准确得到质量等级的问题,在分析行业应用、发射设备性能、数据安全等方面对ADS-B数据质量需求的基础上,构建了ADS-B数据质量评估指标体系,提出了基于集成学... 详细信息

为更好地发挥ADS-B数据应用价值,针对ADS-B数据质量评估过程中传统方法无法客观准确得到质量等级的问题,在分析行业应用、发射设备性能、数据安全等方面对ADS-B数据质量需求的基础上,构建了ADS-B数据质量评估指标体系,提出了基于集成学习自适应提升算法(AdaBoost)的新型数据质量评估方法。该方法通过K-means聚类确定最佳质量等级类别,结合熵权法和双基点法(TOPSIS)打分确定数据标签,并采用AdaBoost算法对评估模型进行了训练和优化。以天津机场数据为例,实验得出ADS-B数据质量的最佳等级划分为5级,得到的数据质量评估模型准确率高达98.5%,验证了该方法可以有效避免主观因素对评估结果的影响,并得到最优的质量等级划分,能够提高评估结果的稳定性和精确度。

关键词： ADS-B数据质量 K-means聚类熵权法双基点法 TOPSIS 自适应提升算法