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猪肠病毒G(EV-G)荧光定量PCR检测方法的建立与四川地区分子流行病学调查

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微生物学通报 2022年第11期49卷 4809-4820页

作者：肖黛张路文李施倩俞恩波曹三杰黄小波四川农业大学动物医学院猪病研究中心四川成都611130 农业农村部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测实验站四川成都611130

【背景】猪肠病毒G(EnterovirusG,EV-G)在猪群中普遍存在,可引起猪的皮肤损伤、肌肉麻痹、肺炎、发热、腹泻等,也存在无症状感染。【目的】建立检测EV-G的荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)方法并开展四川地区分子流行... 详细信息

【背景】猪肠病毒G(EnterovirusG,EV-G)在猪群中普遍存在,可引起猪的皮肤损伤、肌肉麻痹、肺炎、发热、腹泻等,也存在无症状感染。【目的】建立检测EV-G的荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)方法并开展四川地区分子流行病学调查。【方法】根据EV-G的5’UTR基因保守序列设计特异性引物,建立可检测EV-G各基因型的RT-qPCR,并评估其灵敏性、特异性和重复性,开展四川地区EV-G的流行调查。【结果】标准品在1.89×102-1.89×10^(8)copies/μL浓度范围内线性关系良好;在特异性试验中,其他9种猪病毒(猪德尔塔冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒、日本乙型脑炎病毒、猪萨佩罗病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒、猪伪狂犬病病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒)检测均为阴性;最低检测浓度为1.89×10^(1) copies/μL;组内和组间变异系数分别小于1%和2%。检测2013-2021年四川省431份猪腹泻样品,EV-G总体阳性率为31.1%,表明该病毒在四川地区的感染较普遍。随机选取9份四川的EV-G阳性样品扩增VP1基因并测序分析,发现四川EV-G流行的基因型包括G1、G3、G4和G9,但以EV-G1为优势基因型。【结论】本研究建立了一种检测EV-G各基因型的RT-qPCR方法,并初步掌握了四川EV-G的流行现状,为后续深入开展该病毒的研究奠定了基础。

关键词：猪肠病毒G 荧光定量PCR 建立流行病学调查

不同动物源性细胞系对猪丁型冠状病毒的易感性

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微生物学报 2022年第2期62卷 672-685页

作者：瞿欢胡靖飞李施倩肖黛张路文付嘉钰赵玉佳陈汭文翼平伍锐赵勤颜其贵文心田曹三杰黄小波四川农业大学动物医学院猪病研究中心四川成都611130 农业农村部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测实验站四川成都611130 四川农业大学国家级动物类实验教学示范中心四川成都611130

【目的】探究猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)能否在不同动物源性细胞系中感染和增殖。【方法】本研究将PDCoV四川分离株CHN-SC2015接种来自仓鼠、家禽、猴、人和猪的12种细胞系,将病毒在每种细胞系中盲传至少5代并通... 详细信息

【目的】探究猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)能否在不同动物源性细胞系中感染和增殖。【方法】本研究将PDCoV四川分离株CHN-SC2015接种来自仓鼠、家禽、猴、人和猪的12种细胞系,将病毒在每种细胞系中盲传至少5代并通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、间接免疫荧光试验(IFA)和测序鉴定。【结果】PDCoV在Vero、PAM、PK15、ST和LLC-PK1细胞中的P1表现出明显的细胞病变效应(CPE),且在PAM、PK15、ST和LLC-PK1细胞上有不同程度的增殖,但在Vero和PAM细胞的后续传代中CPE逐渐消失;除3种易感细胞外(PK15、LLC-PK1和ST),病毒拷贝数随着传代次数的增加而逐渐降低,而在DEF、Marc-145、HEK-293、ZYM-SIEC02和PAM细胞的P4或P5中不能检测到PDCoV;PCR结果显示,只有在CEF和Vero细胞的P5中还能检测到PDCoV;IFA的结果表明,PDCoV可以感染除BHK-21和ZYM-SIEC02以外的大多数细胞,在PK15、LLC-PK1和ST细胞的P1、P3和P9均可以观察到特异性免疫荧光,因此仅3种细胞系(PK15、LLC-PK1和ST)适合病毒的连续传代,在P9病毒滴度分别可达10^(7.11)、10^(7.00)和10^(7.37) TCID_(50)/mL;在不同的细胞系中传代后,PDCoV的S基因序列累计有14个核苷酸和相应的12个氨基酸突变。【结论】本研究表明,PDCoV可在体外感染多种细胞,提示其可能存在跨种传播潜力。

关键词：猪δ冠状病毒细胞系易感性感染跨物种传播

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社会信用体系建设能促进企业专业化分工吗

当代财经 2024年第7期 152-164页

作者：李施宇上海财经大学会计学院上海200433

完善的社会信用体系是企业实现更高层次分工协作和加快全国统一大市场建设的制度基础。基于我国社会信用体系建设示范城市创建政策,考察了社会信用体系建设对企业专业化分工水平的影响。研究发现,社会信用体系建设能提高企业的专业化分... 详细信息

完善的社会信用体系是企业实现更高层次分工协作和加快全国统一大市场建设的制度基础。基于我国社会信用体系建设示范城市创建政策,考察了社会信用体系建设对企业专业化分工水平的影响。研究发现,社会信用体系建设能提高企业的专业化分工水平。机制检验表明,社会信用体系建设可以降低企业的搜寻成本、缔约成本和减少因交易对象违约而给企业带来的损失,因而社会信用体系建设可提高企业的专业化分工水平。异质性分析发现,在社会信任水平低地区的企业中和资产专用性高的企业中,社会信用体系建设对企业专业化分工水平的提高作用更明显;在产业链上下游企业之间的信息不对称程度高时,社会信用体系建设对企业专业化分工水平的提高作用也更明显。经济结果分析发现,社会信用体系建设提高了企业的专业化分工水平,从而提高了企业的创新能力和生产效率。为此,要进一步完善社会信用体系,构建覆盖全部信用主体的信用信息共享网络。

关键词：社会信用体系专业化分工搜寻成本缔约成本违约损失

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零价铁与静态磁场对电活性人工湿地废水净化及生物发电的协同效应

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零价铁与静态磁场对电活性人工湿地废水净化及生物发电的协同效应

作者：施倩楠山东师范大学

学位级别：硕士

人工湿地（Constructed Wetlands,CW）具有强大的水体净化功能,能够吸收、转化和净化湿地水体中的有毒有害物质。电活性人工湿地（Electroactive Constructed Wetlands,EW）能够在净化水体的同时,利用微生物将有机物中的化学能转化为电... 详细信息

人工湿地（Constructed Wetlands,CW）具有强大的水体净化功能,能够吸收、转化和净化湿地水体中的有毒有害物质。电活性人工湿地（Electroactive Constructed Wetlands,EW）能够在净化水体的同时,利用微生物将有机物中的化学能转化为电能,实现能源回收。但是因为电活性人工湿地存在反应缓慢、能源回收效率低等问题。本研究在电活性人工湿地的基础上加入了零价铁（Zero-valent Iron,ZVI）和静态磁场（Static Magnetic Field,SMF）,探究了零价铁和静态磁场作用下电活性人工湿地的产电性能变化,以及COD（Chemical Oxygen Demand,COD）、总氮（Total Nitrogen,TN）、氨氮（Ammonia Nitrogen,NH-N）、总磷（Total Phosphorus,TP）的去除效率。运用微生物宏基因组分析方法探究系统群落内微生物的种类和数量变化,辅助分析产电和有机物降解的机理。主要结论如下:（1）在EW中引入SMF可有效促进氧还原反应,降低内阻。SMF作用于微生物群落可以促进阳极EAB的富集和电子转移相关基因的表达,从而降低内部扩散阻力。近20天,EW-Z和EW-ZS系统电压均呈下降趋势。这是因为细胞膜表面的铁相关沉淀物降低了细胞与外界环境之间电子交换的效率。从阳极铁屑中释放的电子和铁离子可以促进生物发电。细胞膜表面的铁相关沉淀物降低了细胞与外界环境之间电子交换的效率。SMF可以通过提高微生物的酶活性和代谢效率来增强生物电化学反应,从而降低内阻。外磁场产生的洛伦兹力可以通过影响细胞电子在介质和导电毛上的传递效率,增加电子向电极转移的概率,从而增强微生物的电化学反应,因此,较少的EAB数量可以获得更大的生物电输出。（2）ZVI能显著提高NH-N的去除效率,SMF在此基础上加强了这种效应。微生物在TN的去除中发挥了重要作用。产品中的Fe（Ⅲ）能在电池表面形成致密的氧化膜,物理上阻断NO进入电池,降低脱氮效率。此外,阳极处的SMF可能会加速该涂层的形成速度。自由电子有沿磁感应线方向移动的倾向。ZVI和SMF对COD的去除率均有促进作用。ZVI可以作为催化剂提高COD去除效率。磁场可以干扰细胞膜两侧的电位差,从而增强细胞膜的渗透性,提高COD的去除效率。（3）细菌特异性增强,EAB数量显著增加。表明铁的引入对微生物进行了针对性筛选,导致与铁相关的功能微生物数量增加（即微生物特异性增强）,不适应铁的微生物数量减少（即微生物多样性减少）。此外,SMF有效避免了ZVI环境中微生物的过度筛选,保持了环境中微生物的多样性,有利于整个系统长期有效稳定运行。阴极的微生物指标低于阳极,这也证实了污染物的去除主要发生在阳极。阴极作为阳极的电子受体,与阳极形成一个体系,因此阴极和阳极α分异指数的数据趋势呈现相似的规律。微生物群落β多样性分化方向主要受阳极填料中ZVI的影响,SMF的影响较小。

关键词：电活性人工湿地零价铁静态磁场协同作用

中华美学精神中的儒家“中和”美学思想及其当代价值

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文艺争鸣 2024年第6期 113-116页

作者：王磊李施威高琦辽宁师范大学音乐学院

一、中华美学精神与儒家之“中和”(一)中华美学精神中华美学精神是对中国传统文化审美本质的高度概括,也是中国传统美学话语与审美意识、艺术实践的集中体现,更是中华民族以审美方式把握世界的鲜明标识。自习近平总书记在《在文艺工作... 详细信息

一、中华美学精神与儒家之“中和”(一)中华美学精神中华美学精神是对中国传统文化审美本质的高度概括,也是中国传统美学话语与审美意识、艺术实践的集中体现,更是中华民族以审美方式把握世界的鲜明标识。自习近平总书记在《在文艺工作座谈会上的讲话》中提出传承和弘扬中华美学精神的命题后,“中华美学精神”就成了学界研究热点之一。

关键词：中华美学精神中国传统美学审美方式《在文艺工作座谈会上的讲话》传承和弘扬美学思想审美意识当代价值

人氨基肽酶N在猪丁型冠状病毒感染HEK293细胞中的作用

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畜牧兽医学报 2022年第5期53卷 1587-1597页

作者：赵玉佳陈汭宋代丽张路文肖黛李施倩文翼平伍锐赵勤杜森焱颜其贵文心田曹三杰黄小波四川农业大学动物医学院猪病研究中心成都611130 农业农村部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测实验站成都611130 四川农业大学国家级动物类实验教学示范中心成都611130

以HEK293细胞为模型,探讨人氨基肽酶N(human aminopeptidase N,hAPN)在猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)入侵人源细胞中的作用。RT-qPCR/RT-PCR鉴定PDCoV在HEK293细胞上的增殖情况,再用CRISPR/Cas9技术构建敲除hAPN基因的HEK293细胞系,通过CCK-8试验验证敲除细胞和野生型细胞的细胞活性;用RT-qPCR和Western blot检测hAPN敲除和过表达对PDCoV复制的影响;进一步通过同源建模和分子对接预测PDCoV S蛋白和hAPN蛋白的结合位点。结果显示:PDCoV在感染HEK293细胞后12~36 h快速增殖,在36 h达到顶峰,在HEK293细胞上至少可传至2代;hAPN敲除细胞与野生型细胞的细胞活性无明显差异,细胞敲除hAPN可显著抑制PDCoV复制,细胞过表达hAPN可促进PDCoV复制;同源建模和分子对接表明,S1蛋白可与hAPN蛋白结构域II结合,主要是S1蛋白的受体结合基序1(receptor binding motif 1,RBM1)氨基酸残基TYR^(92)、THR^(51)、THR^(48)、PHE^(16)和MET^(14)通过氢键与hAPN蛋白的氨基酸残基PHE^(490)、GLN^(531)、ARG^(528)和SER^(529)结合。hAPN在PDCoV感染人源细胞中发挥重要作用,为深入研究PDCoV的细胞入侵和跨种传播机制提供了新的理论依据。

关键词：猪丁型冠状病毒氨基肽酶N HEK293细胞复制

“科教+产教”双驱动下大学生创新能力培养体系构建——以高职国际贸易专业为例

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知识经济 2024年第18期682卷 222-224页

作者：李施漯河职业技术学院河南漯河462000

“科教+产教”双驱动促进了高职院校人才培养体系变革,对于培养复合型、高素质人才具有重要意义。高职院校国际贸易专业作为高端国际贸易人才培养的重要专业,应积极顺应国家“科教+产教”双驱动战略,重构人才培养框架,不断提升学生创新... 详细信息

“科教+产教”双驱动促进了高职院校人才培养体系变革,对于培养复合型、高素质人才具有重要意义。高职院校国际贸易专业作为高端国际贸易人才培养的重要专业,应积极顺应国家“科教+产教”双驱动战略,重构人才培养框架,不断提升学生创新能力。为深入探讨高职院校国际贸易专业大学生创新能力培养现状与路径,以“科教+产教”双驱动为背景,厘清两者之间的逻辑关联,对创新能力培养中面临的问题进行总结,提出要以创新意识培养为基础,改革课程体系;以创新思维激发为载体,调整育人方式;以创新转化力培养为重点,搭建转化平台。

关键词： “科教+产教” 国际贸易创新能力

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加强绩效管理,促进基层医疗机构发展

中国经贸 2024年第3期 217-219页

作者：施倩南京市建邺区兴隆社区卫生服务中心

基层医疗机构是医疗卫生服务体系的重要组成部分,为居民提供公共卫生服务和基本医疗服务,运行良好的基层医疗机构能给社区居民带来实实在在的幸福感和获得感。经过三年的新冠疫情,财政投入减少,同时基层医疗机构由于长期管理松散等原因... 详细信息

基层医疗机构是医疗卫生服务体系的重要组成部分,为居民提供公共卫生服务和基本医疗服务,运行良好的基层医疗机构能给社区居民带来实实在在的幸福感和获得感。经过三年的新冠疫情,财政投入减少,同时基层医疗机构由于长期管理松散等原因存在绩效考核制度缺失、绩效考核方案不合理、绩效考核管理缺乏经验等问题,基层医疗机构需要通过建立和持续改善绩效管理等内部控制方式,提高基层医疗机构的服务质量、服务水平、服务效率,提升管理水平,增加业务收入,减轻财政负担,留住更多的优秀人才,最终使居民得到更方便可及的优质医疗卫生服务。

关键词：绩效考核管理基层医疗机构公共卫生服务绩效考核制度持续改善财政投入绩效管理基本医疗服务

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假酶在植物生长发育和逆境胁迫中的作用

农业生物技术学报 2024年第3期32卷 679-690页

作者：李施祺朱祝军茹磊浙江农林大学园艺科学学院农业农村部亚热带果品蔬菜质量安全控制重点实验室/浙江省山区农业高效绿色生产协同创新中心

假酶(pseudoenzyme)是一类没有催化活性的蛋白，其氨基酸序列与具有正常功能的酶家族相似，但因已被证实或预测的保守催化氨基酸的突变，从而缺乏催化活性。但假酶可能促进或抑制活性酶的活性、竞争活性酶的底物、调节信号通路，或者作... 详细信息

假酶(pseudoenzyme)是一类没有催化活性的蛋白，其氨基酸序列与具有正常功能的酶家族相似，但因已被证实或预测的保守催化氨基酸的突变，从而缺乏催化活性。但假酶可能促进或抑制活性酶的活性、竞争活性酶的底物、调节信号通路，或者作为蛋白骨架形成蛋白复合体等。假酶在医学领域中研究较多，在植物领域中的研究尚显匮乏。最近的研究表明，假酶在植物生长发育和逆境胁迫响应方面发挥重要作用。本文从假酶的定义、鉴定方法和进化过程，以及假酶在植物中的生物学作用等方面介绍假酶，并讨论了假酶在植物发育调控中的潜在作用。本综述为利用假酶调控植物生长发育提供新的思路。

关键词：酶假酶假磷酸酶假激酶