不同动物源性细胞系对猪丁型冠状病毒的易感性

作     者：瞿欢 胡靖飞 李施倩 肖黛 张路文 付嘉钰 赵玉佳 陈汭 文翼平 伍锐 赵勤 颜其贵 文心田 曹三杰 黄小波 QU Huan;HU Jingfei;LI Shiqian;XIAO Dai;ZHANG Luwen;FU Jiayu;ZHAO Yujia;CHEN Rui;WEN Yiping;WU Rui;ZHAO Qin;YAN Qigui;WEN Xintian;CAO Sanjie;HUANG Xiaobo

作者机构：四川农业大学动物医学院猪病研究中心四川成都611130 农业农村部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测实验站四川成都611130 四川农业大学国家级动物类实验教学示范中心四川成都611130 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2022年第62卷第2期

页      面：672-685页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：四川省国际科技创新合作项目(2021YFH0153) 四川省科技计划(2020YFS0011) 

主　　题：猪δ冠状病毒 细胞系 易感性 感染 跨物种传播 

摘      要：【目的】探究猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)能否在不同动物源性细胞系中感染和增殖。【方法】本研究将PDCoV四川分离株CHN-SC2015接种来自仓鼠、家禽、猴、人和猪的12种细胞系,将病毒在每种细胞系中盲传至少5代并通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、间接免疫荧光试验(IFA)和测序鉴定。【结果】PDCoV在Vero、PAM、PK15、ST和LLC-PK1细胞中的P1表现出明显的细胞病变效应(CPE),且在PAM、PK15、ST和LLC-PK1细胞上有不同程度的增殖,但在Vero和PAM细胞的后续传代中CPE逐渐消失;除3种易感细胞外(PK15、LLC-PK1和ST),病毒拷贝数随着传代次数的增加而逐渐降低,而在DEF、Marc-145、HEK-293、ZYM-SIEC02和PAM细胞的P4或P5中不能检测到PDCoV;PCR结果显示,只有在CEF和Vero细胞的P5中还能检测到PDCoV;IFA的结果表明,PDCoV可以感染除BHK-21和ZYM-SIEC02以外的大多数细胞,在PK15、LLC-PK1和ST细胞的P1、P3和P9均可以观察到特异性免疫荧光,因此仅3种细胞系(PK15、LLC-PK1和ST)适合病毒的连续传代,在P9病毒滴度分别可达10^(7.11)、10^(7.00)和10^(7.37) TCID_(50)/mL;在不同的细胞系中传代后,PDCoV的S基因序列累计有14个核苷酸和相应的12个氨基酸突变。【结论】本研究表明,PDCoV可在体外感染多种细胞,提示其可能存在跨种传播潜力。