猪肠病毒G(EV-G)荧光定量PCR检测方法的建立与四川地区分子流行病学调查

作     者：肖黛 张路文 李施倩 俞恩波 曹三杰 黄小波 XIAO Dai;ZHANG Luwen;LI Shiqian;YU Enbo;CAO Sanjie;HUANG Xiaobo

作者机构：四川农业大学动物医学院猪病研究中心四川成都611130 农业农村部兽用药物与兽医诊断技术四川科学观测实验站四川成都611130 

出 版 物：《微生物学通报》 (Microbiology China)

年 卷 期：2022年第49卷第11期

页      面：4809-4820页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：四川省“十四五”川猪重大科技专项(2021ZDZX0010) 

主　　题：猪肠病毒G 荧光定量PCR 建立 流行病学 调查 

摘      要：【背景】猪肠病毒G(EnterovirusG,EV-G)在猪群中普遍存在,可引起猪的皮肤损伤、肌肉麻痹、肺炎、发热、腹泻等,也存在无症状感染。【目的】建立检测EV-G的荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)方法并开展四川地区分子流行病学调查。【方法】根据EV-G的5’UTR基因保守序列设计特异性引物,建立可检测EV-G各基因型的RT-qPCR,并评估其灵敏性、特异性和重复性,开展四川地区EV-G的流行调查。【结果】标准品在1.89×102-1.89×10^(8)copies/μL浓度范围内线性关系良好;在特异性试验中,其他9种猪病毒(猪德尔塔冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒、日本乙型脑炎病毒、猪萨佩罗病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒、猪伪狂犬病病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒)检测均为阴性;最低检测浓度为1.89×10^(1) copies/μL;组内和组间变异系数分别小于1%和2%。检测2013-2021年四川省431份猪腹泻样品,EV-G总体阳性率为31.1%,表明该病毒在四川地区的感染较普遍。随机选取9份四川的EV-G阳性样品扩增VP1基因并测序分析,发现四川EV-G流行的基因型包括G1、G3、G4和G9,但以EV-G1为优势基因型。【结论】本研究建立了一种检测EV-G各基因型的RT-qPCR方法,并初步掌握了四川EV-G的流行现状,为后续深入开展该病毒的研究奠定了基础。