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“劳动代理”在社会主义劳动力市场发育过程中的作用

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中国劳动 2000年第8期 19-20页

作者：方光明安徽省安庆市劳动就业管理局

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论邓小平对我国外交路线的理论贡献

浙江大学学报（社会科学版） 1994年第4期24卷 1-10页

作者：方光明白水

本文根据理论与历史相结合的原则，探讨了十一届三中全会后，邓小平对我国外交路线的调整和对我国国际战略的理论贡献．文章的第一部分阐述了邓小平对发展变化了的国际形势和时代特征所作的新分析和新论断，丰富和发展了马克思主义毛泽... 详细信息

本文根据理论与历史相结合的原则，探讨了十一届三中全会后，邓小平对我国外交路线的调整和对我国国际战略的理论贡献．文章的第一部分阐述了邓小平对发展变化了的国际形势和时代特征所作的新分析和新论断，丰富和发展了马克思主义毛泽东思想关于时代问题的理论．第二部分阐述了邓小平提出的实行不结盟的完全独立自主的全方位的国际战略方针，以及抓住有利时机，立足本国，集中力量把我国社会主义现代化建设搞好的决策．第三部分探讨了邓小平对世界如何走向和平与发展所提示的新思路、新方法、新途径和新策略．邓小平的国际战略思想，是建设有中国特色社会主义理论的重要组成部分．沿着邓小平的大思路，把我国建设好，为中国和世界作出更大的贡献，是历史赋予我们的最重要的责任．

关键词：邓小平毛泽东思想外交路线马克思主义国际战略思想建设有中国特色社会主义理论国际形势五项原则和平与发展理论贡献

利用CRISPR/Cas9技术构建ApoE基因敲除的金黄仓鼠高脂血症模型

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利用CRISPR/Cas9技术构建ApoE基因敲除的金黄仓鼠高脂血症模型

作者：方光明郑州大学

学位级别：硕士

目的:高脂血症是一种由基因和环境因素共同引起的代谢性疾病,其主要危害是易引发动脉粥样硬化病变,由此导致的慢性心脑血管疾病已经是威胁人类健康的重要疾病之一。合适的动物模型是研究疾病的重要工具,本文主要是利用CRISPR/Cas9技术... 详细信息

目的:高脂血症是一种由基因和环境因素共同引起的代谢性疾病,其主要危害是易引发动脉粥样硬化病变,由此导致的慢性心脑血管疾病已经是威胁人类健康的重要疾病之一。合适的动物模型是研究疾病的重要工具,本文主要是利用CRISPR/Cas9技术来建立ApoE基因敲除的新型金黄仓鼠高脂血症模型,并鉴定其表型。方法:载脂蛋白E(ApoE)是参与脂质代谢的一个关键基因。本实验利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,设计了2对靶向金黄仓鼠ApoE基因第4个外显子的sg RNA(sg RNA 1,sg RNA2)。通过酶切和连接反应把合成的sg RNA序列连接到PX458质粒上构建sg RNA-质粒载体,Sanger测序和酶切反应验证质粒载体的正确性。用sg RNA-质粒载体转染BHK-21细胞后,通过荧光强度以及酶切反应验证sg RNA的敲除效率,选择效率高的sg RNA用于受精卵显微注射。把注射后的受精卵移植到代孕金黄仓鼠中,约2周后幼崽金黄仓鼠(即F0代)出生。待F0代金黄仓鼠生长至2周龄时,剪取脚趾做标记并收集脚趾组织用于提取基因组DNA和PCR扩增。PCR产物纯化后做载体克隆,挑取单克隆做Sanger测序以检测F0代金黄仓鼠的基因型。利用Benching软件预测潜在的脱靶位点,选取脱靶评分最高的前8个位点设计PCR引物进行扩增,Sanger测序分析脱靶现象。待金黄仓鼠生长至3周龄时,雌雄分开并单笼饲养。10周龄时把携带基因突变的F0与野生型金黄仓鼠交配繁殖出F1代金黄仓鼠。提取F1代仓鼠的基因组DNA后通过测序鉴定其基因型,并根据每种基因型的出现频率来分析母本F0的传代情况。把携带相同基因型的F1代金黄仓鼠雌雄交配繁殖F2代金黄仓鼠,测序鉴定F2代仓鼠的基因型后选取纯合突变型(ApoE)金黄仓鼠用于扩繁。把8周龄的金黄仓鼠隔夜禁食后,通过眼球后静脉取血并分离血清,用生化分析仪检测不同基因型金黄仓鼠的血脂水平。为了分析ApoE基因敲除对血脂代谢的影响,同时选取8-10周龄的野生型和纯合突变型金黄仓鼠,并将其各自分为两组(对照组和实验组),每组6-8只。其中对照组给予标准饲料,实验组给予高脂饲料(含0.5%的胆固醇和15%脂肪)。在高脂饮食处理后第4周和第8周,分别采集血液样品并检测血脂水平,以鉴定ApoE基因敲除金黄仓鼠模型在不同饮食条件下的表型特点。结果:我们设计了2对sg RNA并构建了sg RNA质粒载体,并用测序和酶切实验证实载体构建成功。通过体外细胞转染实验比较了二者的基因编辑效率,结果表明sg RNA2基因编辑效率较高。因此选用sg RNA2质粒载体进行受精卵显微注射,并把注射后的受精卵移植到代孕金黄仓鼠中。16天后获得了6只F0代金黄仓鼠,基因型鉴定结果证实,除了F0-6的基因型为野生型外,其余5只F0个体共携带了7种ApoE突变基因型,突变类型包括碱基删除和插入,整体编辑效率为(83.3%,5/6),且未检测到脱靶效应。根据传代特点和基因突变类型,最终选择了基因型为单碱基插入的F1代个体进行扩繁(来源于F0-5),建立了能稳定遗传的纯合型ApoE基因敲除(ApoE)的金黄仓鼠模型。表型鉴定结果表明,正常饮食的ApoE金黄仓鼠在8周龄时血脂水平即明显高于野生型金黄仓鼠,其中总胆固醇(TC)水平较野生型(WT)升高了1.75倍(461.81±107.10 mg/d L vs 167.74±21.64 mg/d L,P<0.01),甘油三脂(TG)升高了53.36%(251.16±20.08 mg/d L vs 196.09±23.38 mg/d L,P<0.01),而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)未见明显变化,表明ApoE金黄仓鼠能自发形成高脂血症。与野生型相比,ApoE金黄仓鼠血脂水平未见明显异常。此外,高脂饮食处理能显著促进ApoE金黄仓鼠血脂代谢异常。高脂饮食处理4周时,其血液中的TC、TG和HDL-C分别为3730.21±416.72 mg/d L,1759.60±153.53 mg/d L和588.84±90.18 mg/d L,均显著高于WT高脂饮食组金黄仓鼠的TC(861.09±88.11mg/d L),TG(836.50±124.96 mg/d L)和HDL-C(121.36±21.50 mg/d L)的水平(P<0.01)。高脂饮食处理8周时,ApoE金黄仓鼠的血液TC、TG和HDL-C的水平分别进一步升高至4214.67±341.96 mg/d L,2066.92±211.36 mg/d L和666.04±67.16 mg/d L,显著高于同期WT高脂饮食组的TC(961.45±69.45)、TG(925.00±139.08)和HDLC(129.85±15.84)的水平,P值均小于0.0001。同时,我们将各

关键词：高脂血症 ApoE CRISPR/Cas9 金黄仓鼠动脉粥样硬化

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消费维权的公众参与问题研究

消费维权的公众参与问题研究

作者：方光明华南理工大学

学位级别：硕士

消费是推动生产发展的三大动力之一,消费状况如何,直接影响到一个国家的经济发展方式和速度。因此,消费者权益保护在营造良好消费秩序中起着非常重要的作用。改革开放以来,随着生产力的不断发展,消费维权事件的数量不断增加,对消费维权... 详细信息

消费是推动生产发展的三大动力之一,消费状况如何,直接影响到一个国家的经济发展方式和速度。因此,消费者权益保护在营造良好消费秩序中起着非常重要的作用。改革开放以来,随着生产力的不断发展,消费维权事件的数量不断增加,对消费维权工作的要求也越来越高,消费维权的领域也越来越广。但是,长期以来行政部门承担了大量的纠纷处理任务,而企业和解、消委调解、消费仲裁与诉讼等其他消费维权途径发展相对比较缓慢。随着社会经济的不断发展,主要依靠行政部门来处理的方式已经越来越不适合社会发展的需要。在这种新形势下,从理论研究角度来探讨如何进一步加强完善消费者维权工作的方式方法,有助于行政部门在更为开阔的视野层面提高公共管理和公共服务的水平,引导民众积极参与消费维权,构建规范的市场秩序,促进和谐社会建设。本文尝试以新公共行政理论关于公众参与的有关观点和公民民主理论为理论支撑,从公众参与模式研究的角度出发,运用文献研究法、调查问卷法,个案研究法等多种研究方法,对国内消费维权工作的现状进行研究,借鉴参考国外消费维权工作中公众参与的经验和做法,以广东省近年来在发展公众参与,创新消费维权工作体制机制的做法为个案,在分析当前消费维权工作公众参与不足的原因基础上,从公众参与的主体、公众参与的体制、公众参与的途径等方面入手,探讨在公众参与模式下发展和推进消费维权工作的对策,提出:“在有效控制参与成本的前提下,大力培育参与消费维权的各类主体,提高公众参与意识,提升公众参与能力,扩宽公众参与途径,把消费维权工作变事后调处为事前监督,构筑起全方位的消费维权体系,有效提升消费维权工作的效率”。同时,也通过对消费者权益维护工作的研究,为有效维护公民权利,发展民主政治提供一定的参考和借鉴。

关键词：公众参与消费者权益保护

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在西部大开发中发挥外经贸工作的积极作用

数量经济技术经济研究 2001年第11期18卷 30-33页

作者：王燕霞方光明北京工业大学经管学院驻马店市人民医院

西部开发在当前的中国可谓是个热门话题,国内外的各界人士都在不断探讨如何才能使西部发挥它最大的潜能.一个地域经济的发展是多方面因素共同作用的结果,在西部开发中,外经贸所发挥的作用就像新鲜的血液一样为西部的发展注入了活力.

关键词：西部大开发外经贸工作中国招商引资外资利用政策对外经济技术合作

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亚非国家的对外开放

利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠Mlk3基因探讨其对血压的影响

1988年

作者：朱威烈方光明

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生物工程学报 2023年第4期39卷 1644-1654页

作者：高诗娟方光明张燕红杜杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所北京100029

为探讨混合谱系激酶3(mixed lineage kinase 3,Mlk3)基因敲除(knockout,KO)对小鼠血压的影响,采用CRISPR/Cas9系统构建Mlk3基因敲除(Mlk3 knockout,Mlk3KO)小鼠模型。T7核酸内切酶I(T7 endonuclease I,T7E1)酶切法验证向导RNA(small guide RNA,sgRNA)的活性。体外转录CRISPR/Cas9 mRNA及sgRNA,显微注射至受精卵并移植入假孕母鼠。聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)及DNA测序检测基因型。实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)检测Mlk3 mRNA表达,Western blotting及免疫荧光检测Mlk3蛋白表达。尾套法监测小鼠血压。免疫组化及Western blotting检测小鼠主动脉肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)磷酸化水平。PCR基因型鉴定及DNA测序显示Mlk3敲除成功,且Mlk3敲除小鼠未检测到Mlk3蛋白表达,证实CRISPR/Cas9系统成功构建了Mlk3敲除小鼠。Mlk3敲除小鼠在基础状态下血压显著高于同笼对照,且Mlk3敲除小鼠主动脉平滑肌层MLC的磷酸化高于对照组,说明Mlk3具有抗高血压的内源性保护作用。本研究为探讨蛋白激酶Mlk3抗高血压及抗高血压诱导心血管不良重塑的作用机制提供了理想的动物模型。

关键词：基因敲除小鼠 CRISPR/Cas9 混合谱系激酶3 血压肌球蛋白轻链

共产主义运动从共产国际到共产党情报局第1卷共产国际的危机

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共产主义运动从共产国际到共产党情报局第1卷共产国际的危机

1982年

作者：（西）克劳丁方光明等译

内部发行

ISBN: (纸本)2173·19

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关键词：政治、法律国际共产主义运动共产国际(第三国际,1919年3月~1943年6月)

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斯大林现象史 1