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青钱柳叶水提物对阴虚内热型糖尿病大鼠的调节作用研究

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青钱柳叶水提物对阴虚内热型糖尿病大鼠的调节作用研究

作者：扶丽君广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)是一种代谢疾病,其特点是胰岛素分泌绝对不足或者相对不足引起的高血糖症,中医辩证为“消渴症”。青钱柳叶(Cyclocarya paliurus,CP)具有清热消肿解毒的功效,近年来其降血糖、降血压等作用引起了人们... 详细信息

目的:糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)是一种代谢疾病,其特点是胰岛素分泌绝对不足或者相对不足引起的高血糖症,中医辩证为“消渴症”。青钱柳叶(Cyclocarya paliurus,CP)具有清热消肿解毒的功效,近年来其降血糖、降血压等作用引起了人们的关注。中医辩证消渴症一般分为阴虚燥热、阴虚内热、气阴两虚和阴阳两虚四种类型,其中阴虚内热型是最常见的一种。本论文通过高脂饲料+甲状腺素(Thyroxin,T4)+多次小剂量注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)建立阴虚内热型糖尿病大鼠模型,并观察青钱柳叶水提物治疗阴虚内热型糖尿病的作用,初步探讨其作用机理。为中药青钱柳叶用于阴虚内热型糖尿病的治疗提供更多的实验依据。方法:一、模型制备SD大鼠,给予高脂饲料喂养(正常组给予普通饲料),第3周,除正常组外,每组动物均皮下注射T4 0.2 mg/kg/d,连续7天。第4周,腹腔注射25 mg/kg STZ溶液;正常组腹腔注射同等体积柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。注射STZ后第3天,动物禁食测空腹血糖(Fasting blood glucose,FBG),以FBG≥7.8 mmol/L及出现阴虚内热表征作为阴虚内热型糖尿病大鼠模型建立标准。二、分组及给药将造模动物随机分为模型组,阳性组(知柏地黄丸组(1.5 g/kg/d)、二甲双胍组(0.125 g/kg/d)),青钱柳叶水提物高(26.4 mg/kg/d)、中(13.2 mg/kg/d)、低(6.6 mg/kg/d)剂量组。灌胃给药4周(1天/次)。正常组,模型组给予等体积的蒸馏水。给药期间,模型组及给药组继续饲以高脂饲料,正常组饲以普通饲料。三、指标检测(一)阴虚内热症状检测1.表观指标:每周记录动物表征,动物行为、背部温度、眼睛神采、舌颜色、爪色、大便干硬情况。2.对阴虚症的改善作用:末次给药后,测血清中三碘甲状腺原氨酸(Triiodothyronine,T3)、T4、环磷酸腺苷(Cyclic adenosine monophosphate,c AMP)、环磷酸鸟苷(Cyclic guanosine monophosphate,c GMP)水平。3.对免疫功能的影响:末次给药后,取全血测定淋巴细胞亚群CD3、CD4和CD8水平。(二)糖尿病大鼠一般情况造模成功后,每周测定动物体重、摄食量、饮水量、尿量。(三)对肝功、肾功的影响末次给药后,测定血清中谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)、AST/ALT、尿素氮(Carbamide)、肌酐(Creatinine,Cre)水平。解剖取肝脏、肾脏,计算肝肾系数;取肝脏组织,HE染色观察其病理形态的改变。(四)糖脂代谢检测1.造模成功后,每周定期测定FBG水平。2.末次给药后,测定动物口服糖耐量(Oral glucose tolerance test,OGTT)、糖化血红蛋白水平、取肝脏组织,检测肝糖原含量。3.末次给药后,放免诊断试剂盒测血清胰岛素(insulin,INS)水平,并计算胰岛素敏感指数(Insulin sensitivity index,ISI)及胰岛素抵抗指数(Homeostasis model assessment for insulin resistance,HOMA-IRI)。4.末次给药后,测血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C、FFA的含量。(五)对Ins R、IRS-2基因表达的影响Q-PCR测定肝脏组织中胰岛素受体(insulin receptor,Ins R)、胰岛素受体底物(insulin receptor substrate-2,IRS-2)的基因表达。结果:一、阴虚内热型糖尿病模型大鼠建立造模后,大鼠出现明显的阴虚内热表现:活动次数增加、背部温度增加、舌色鲜红、爪色青紫、大便干硬、眼睛神采变暗(P<0.01或P<0.05);大鼠T3及c GMP水平明显升高,免疫功能异常(淋巴细胞亚群CD3+、CD4+和CD8+水平紊乱)(P<0.01或P<0.05)。且模型动物体重明显减轻,摄食量、饮水量和尿量均明显增加(P<0.01或P<0.05);空腹血糖明显升高,口服糖耐量异常,肝糖原明显降低(P<0.01或P<0.05);胰岛素含量明显升高,ISI明显降低,HOMA-IR明显升高,表现为明显的胰岛素抵抗(P<0.05),提示造模成功。二、青钱柳叶水提物对模型大鼠的阴虚症状的改善作用(一)阴虚内热表观指标:与模型组相比,在给药第四周时,青钱柳叶水提物各剂量组动物背部温度上升程度、舌色鲜红比率及爪色青紫程度均有所改善;活动次数有所减少、眼睛神采好转(P<0.01或P<0.05)

关键词：青钱柳叶水提物阴虚内热糖尿病 InsR IRS-2

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清热消炎宁片重复给药的毒理学研究

中国临床药理学杂志 2024年第1期40卷 82-86页

作者：赵莉扶丽君周芷伊易帅王衡新天地恒一制药股份有限公司药物研究院湖南长沙410331

目的探究清热消炎宁片对SD大鼠重复给药毒性的影响。方法将120只SD大鼠随机分为空白组(纯水)和低、中、高剂量实验组(2.63、5.25、10.50 g·kg^(-1)清热消炎宁干膏粉),每组30只。4组大鼠均连续给药4周,设置恢复期4周。给药末期及恢复期... 详细信息

目的探究清热消炎宁片对SD大鼠重复给药毒性的影响。方法将120只SD大鼠随机分为空白组(纯水)和低、中、高剂量实验组(2.63、5.25、10.50 g·kg^(-1)清热消炎宁干膏粉),每组30只。4组大鼠均连续给药4周,设置恢复期4周。给药末期及恢复期末进行解剖,观察4组大鼠的一般状况、体质量增长、血液学及血生化指标、主要脏器系数、观察肉眼及镜下组织形态。结果实验期间,低、中、高剂量实验组的一般状况、体质量增长、凝血指标、组织病理学与空白组比较均未见明显异常。给药末期,高剂量实验组和空白组的平均血红蛋白浓度分别为(370.70±3.78)和(365.90±5.77)g·L^(-1),葡萄糖分别为(5.98±0.63)和(6.61±0.93)mmol·L^(-1),尿素氮(BUN)分别为(4.72±1.01)和(5.78±1.64)mmol·L^(-1),肝系数分别为3.05±0.17和2.89±0.19,在统计学上差异均有统计学意义(P≤0.05或P≤0.01)。恢复期末,低剂量实验组和空白组的直接胆红素分别为(0.38±0.18)和(0.19±0.18)μmol·L^(-1),中剂量实验组和空白组的BUN分别为(4.45±0.56)和(5.65±1.16)mmol·L^(-1),在统计学上差异均有统计学意义(均P≤0.05)。结论清热消炎宁片重复给药对SD大鼠无明显的毒性。

关键词：清热消炎宁片干膏粉大鼠重复给药毒性试验

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缩泉胶囊改善糖尿病小鼠膀胱功能

中成药 2017年第1期39卷 1-6页

作者：范平龙连大卫徐伟君扶丽君黄萍操红缨广州中医药大学中药学院广东广州510405

目的研究缩泉胶囊(乌药、益智仁、山药)对糖尿病小鼠膀胱病变的改善作用及其作用机制。方法 60只小鼠随机分为正常组(n=8)及建模组(n=52),后者采用高脂饲料喂养加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,将造模成功小鼠(n=32)随机分为... 详细信息

目的研究缩泉胶囊(乌药、益智仁、山药)对糖尿病小鼠膀胱病变的改善作用及其作用机制。方法 60只小鼠随机分为正常组(n=8)及建模组(n=52),后者采用高脂饲料喂养加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,将造模成功小鼠(n=32)随机分为模型组,甲钴胺片组,缩泉胶囊低、高剂量组。观察缩泉胶囊对糖尿病小鼠空腹血糖值(FBG)、糖化血清蛋白(GSP)水平及一般情况的影响;测定膀胱漏尿点压(BLPP),并对膀胱进行组织病理学染色;利用荧光双标法检测P物质及NK1受体表达。结果各组FBG、GSP、体质量、摄食量和饮水量无明显差异,高剂量缩泉胶囊可以显著降低小鼠尿量。与模型组相比,缩泉胶囊治疗后能显著升高BLPP、P物质、NK1受体表达,并能明显改善小鼠膀胱组织形态学。结论缩泉胶囊改善糖尿病小鼠膀胱病变,其机制可能与上调膀胱组织中P物质及NK1受体表达有关。

关键词：缩泉胶囊糖尿病膀胱病变 P物质 NK1受体

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广藿香醇抑制幽门螺杆菌脲酶活性及其机制

中国中药杂志 2017年第3期42卷 562-566页

作者：连大卫许艺飞任文康扶丽君范平龙操红缨黄萍广州中医药大学中药学院广东广州510405

探讨广藿香醇对于幽门螺杆菌Helicobacter pylori脲酶活性的抑制及其相关基因的表达变化,为进一步研究广藿香醇对幽门螺杆菌定植感染的影响奠定基础。培养幽门螺杆菌并采用革兰染色、快速尿素酶及PCR的方法鉴定后,在酸性条件(pH 5.3)和... 详细信息

探讨广藿香醇对于幽门螺杆菌Helicobacter pylori脲酶活性的抑制及其相关基因的表达变化,为进一步研究广藿香醇对幽门螺杆菌定植感染的影响奠定基础。培养幽门螺杆菌并采用革兰染色、快速尿素酶及PCR的方法鉴定后,在酸性条件(pH 5.3)和中性条件(pH 7.0)培养液中给予不同浓度的广藿香醇干预1 h,应用琼脂稀释法测定细菌的存活率;Berthelot显色法检测细菌的脲酶活性;RT-qPCR法检测细菌中ureA,ureB,ureE,ureH,ureI和nix A相关脲酶基因的表达变化。经过鉴定生长良好幽门螺杆菌在不同浓度的广藿香醇干预后,细菌存活率没有明显变化;其脲酶活性出现了显著的下降;同时脲酶的相关基因ureA,ureB,ureE,ureH,ureI和nix A的表达均出现不同程度的降低。广藿香醇在酸性条件和中性条件下均可以抑制幽门螺杆菌脲酶的活性,可能与降低细菌脲酶相关的基因表达有关。

关键词：幽门螺杆菌脲酶广藿香醇

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清热消炎宁片对幼龄大鼠的安全性评价

中南药学 2023年第11期21卷 2868-2874页

作者：扶丽君赵莉王衡新天地恒一制药股份有限公司长沙410331

目的评价清热消炎宁片(QRXYN)对幼龄SD大鼠发育的影响及其毒性反应,为儿童临床用药提供参考。方法选取出生后第21日幼龄SD大鼠120只,随机分为空白对照组和QRXYN高、中、低剂量给药组,每日按26.5、51.5、102.9 g生药·kg^(-1)连续灌胃给... 详细信息

目的评价清热消炎宁片(QRXYN)对幼龄SD大鼠发育的影响及其毒性反应,为儿童临床用药提供参考。方法选取出生后第21日幼龄SD大鼠120只,随机分为空白对照组和QRXYN高、中、低剂量给药组,每日按26.5、51.5、102.9 g生药·kg^(-1)连续灌胃给予QRXYN 6周,并设停药恢复期5周。评价药物对幼龄大鼠常规毒性指标和生长发育、骨骼发育、行为学、免疫系统等指标的影响。结果QRXYN各剂量组对幼龄SD大鼠体重、摄食量、性征发育、行为学、血液学、血液生化学、眼科、生长激素、骨骼系统发育、免疫学、组织病理学等指标均未见明显毒性影响,仅幼龄大鼠尿常规指标可见剂量相关性的异常变化,停药5周恢复正常,考虑与QRXYN本身的理化性质有关,临床应用时可重点监测尿常规,以保护受试者的用药安全。结论清热消炎宁片未见明显毒性,最大无毒性反应剂量(NOAEL)为102.9 g生药·kg^(-1),约为儿童临床剂量的59倍(按体重计算)。

关键词：幼龄大鼠安全性评价清热消炎宁片

幽门螺杆菌感染小鼠慢性胃炎模型的建立及评价

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中国比较医学杂志 2017年第7期27卷 6-12页

作者：连大卫扶丽君许艺飞任文康操红缨黄萍广州中医药大学中药学院广州510405

目的建立幽门螺杆菌(***)感染动物模型,评价***相关慢性胃炎胃黏膜病理变化。方法灌胃*** SS1菌株建立在体感染,感染后第2周后采用快速尿素酶法和PCR法检测感染成功率;确认感染成功后再分别继续饲养至6周和12周,建立***相关慢性胃炎动... 详细信息

目的建立幽门螺杆菌(***)感染动物模型,评价***相关慢性胃炎胃黏膜病理变化。方法灌胃*** SS1菌株建立在体感染,感染后第2周后采用快速尿素酶法和PCR法检测感染成功率;确认感染成功后再分别继续饲养至6周和12周,建立***相关慢性胃炎动物模型。实验结束后,取胃腺体组织别进行HE和硼酸美兰染色,分析胃炎程度及***感染程度;生化法检测胃组织中髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO),超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),丙二醛(malondialdehyde,MDA)和过氧化氢酶(catalase,CAT)的含量变化;RT-q PCR法检测胃组织中COX-2、iNOS、TNF-α和IL-1β基因表达的变化。结果与正常组相比,模型6周和12周组胃组织内可见***定植,并且黏膜层有不同程度的慢性炎性细胞浸润,腺体萎缩和肠化生情况;同时组织中CAT和SOD的含量明显下降,MPO和MDA的水平和COX-2、iNOS、TNF-α和IL-1β基因表达均有显著上升(P<0.05或P<0.01)。结论通过灌胃给菌的方法可以成功将***定植于小鼠体内,并在定植的6周和12周后均可引起慢性炎性细胞的浸润,并使增强胃腺体组织内氧化应激水平和促炎基因的表达,但12周模型感染程度更深,出现腺体萎缩和肠化生的情况。

关键词：幽门螺杆菌慢性胃炎小鼠模型氧化应激促炎因子

广藿香醇对幽门螺杆菌酸抵抗能力的影响及其机制探讨

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山东医药 2017年第34期57卷 16-19页

作者：连大卫许艺飞扶丽君任文康魏文辉庄惠玲黄萍操红缨广州中医药大学中药学院广州510405

目的观察广藿香醇对于幽门螺杆菌(Hp)酸抵抗能力的影响,并探讨其机制。方法体外培养并鉴定Hp后随机分为5组,受试药高、中、低剂量组分别加入20、10、5mg/L广藿香醇,阳性对照组加入尿素酶(Ure)抑制剂AHA,空白对照组加入等体积DMSO;干预0... 详细信息

目的观察广藿香醇对于幽门螺杆菌(Hp)酸抵抗能力的影响,并探讨其机制。方法体外培养并鉴定Hp后随机分为5组,受试药高、中、低剂量组分别加入20、10、5mg/L广藿香醇,阳性对照组加入尿素酶(Ure)抑制剂AHA,空白对照组加入等体积DMSO;干预0.5h后应用琼脂稀释法测定Hp菌落数,观察其抗酸能力。通过大肠杆菌系统表达和纯化得到Hp尿素酶A(UreA)、UreB、UreG,取UreA/UreB蛋白混合溶液体外模拟Ure成熟过程,将UreG蛋白单体溶液和镍离子(Ni^(2+))溶液混合,均分别以20、10、5mg/L广藿香醇(受试药高、中、低剂量组)和等体积DMSO处理(对照组);采用Berthelot显色法检测Ure活性,判断Ure成熟度;以原子吸收光谱法检测Ni^(2+)浓度,判断UreG携带Ni^(2+)的能力。结果在中性环境中,受试药各剂量组和阳性对照组与空白对照组Hp菌落数比较无统计学差异;在酸性环境中,受试药各剂量组和阳性对照组均较空白对照组Hp菌落数减少(P均<0.01),且受试药高剂量组、阳性对照组<受试药中剂量组<受试药低剂量组(P均<0.01)。受试药高、中、低剂量组和对照组Ure活性分别为54.89%±11.47%、63.99%±9.46%、83.88%±11.81%、101.53%±2.55%,Ni^(2+)浓度分别为(0.77±0.24)、(0.80±0.22)、(1.12±0.35)、(1.56±0.42)μmol/L,受试药高、中剂量组<受试药低剂量组<对照组(P均<0.01)。结论广藿香醇可以降低Hp的酸抵抗能力,可能与阻断Ni^(2+)的传递途径和Ure的成熟过程进而抑制Ure活性有关。

关键词：幽门螺杆菌酸抵抗广藿香醇尿素酶成熟镍离子传递

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幽门螺杆菌感染细胞炎症模型的建立及评价

中国组织化学与细胞化学杂志 2017年第3期26卷 235-239,243页

作者：连大卫任文康扶丽君许艺飞黄萍操红缨广州中医药大学中药学院广州510405

目的建立和评价幽门螺杆菌(***)感染的2种细胞感染模型,为进一步研究***感染及其相关机制奠定基础。方法培养人胃癌细胞株MKN45细胞,与***共孵育6h、12h和24h建立MKN45细胞***感染模型,台盼蓝染色和乳酸脱氢酶(LDH)法测定感染细胞存活率... 详细信息

目的建立和评价幽门螺杆菌(***)感染的2种细胞感染模型,为进一步研究***感染及其相关机制奠定基础。方法培养人胃癌细胞株MKN45细胞,与***共孵育6h、12h和24h建立MKN45细胞***感染模型,台盼蓝染色和乳酸脱氢酶(LDH)法测定感染细胞存活率,荧光显微镜照相和流式细胞仪检测Rhodamine123染色的细胞线粒体膜电位;培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞,与***共孵育6h、12h和24h建立RAW264.7细胞***感染模型,Griess法检测感染细胞上清液中NO的含量变化,RT-q PCR法检测感染细胞中Tnf-α,Inos和Cox-2基因表达变化。结果在MKN45细胞***感染模型中,感染12h和24h均可显著降低细胞存活率并降低细胞线粒体膜电位,即***作用于MKN45细胞12h即产生明显的细胞毒性作用;在RAW264.7细胞***感染模型中,感染6h、12h和24h均可增加细胞上清液中NO含量和细胞Tnf-α,Inos和Cox-2基因表达,即***作用于巨噬细胞后可明显增加其促炎因子的表达,并随着时间的延长而加强。结论 ***感染MKN45细胞和RAW264.7巨噬细胞可作为理想的***感染细胞模型。

关键词：幽门螺杆菌细胞模型细胞毒性促炎因子

青钱柳叶水提物对阴虚内热型2型糖尿病大鼠中医表征和免疫功能的改善作用

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广州中医药大学学报 2016年第6期33卷 851-855页

作者：任文康胡明华尹西拳连大卫扶丽君操红缨江伟雯范平龙许艺飞黄萍广州中医药大学广东广州510006 无限极中国有限公司广东广州510665

【目的】探讨青钱柳叶水提物对阴虚内热型2型糖尿病大鼠中医表征和免疫功能的作用。【方法】将60只SPF级SD大鼠随机分为正常组,模型组,知柏地黄丸组,青钱柳叶水提物高、中、低剂量组。复制阴虚内热型2型糖尿病大鼠模型:大鼠给予高脂饲... 详细信息

【目的】探讨青钱柳叶水提物对阴虚内热型2型糖尿病大鼠中医表征和免疫功能的作用。【方法】将60只SPF级SD大鼠随机分为正常组,模型组,知柏地黄丸组,青钱柳叶水提物高、中、低剂量组。复制阴虚内热型2型糖尿病大鼠模型:大鼠给予高脂饲料喂养,喂养第4周时,按0.2 mg·kg^(-1)·d^(-1)剂量连续皮下注射甲状腺素(T4)7 d;第5周时,一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)35 mg/kg,3周后造模结束。模型复制成功后,除正常组和模型组外,其余各组给予相应药物灌胃治疗4周。每周观察中医证候指标并评分。末次给药后,观察空腹血糖(FBG)值变化、血糖曲线下面积(AUC)及血清中尿素(Urea)含量;取肝脏称质量计算肝指数,并检测肝组织肝糖原含量;检测CD3^+、CD4^+和CD8^+T淋巴细胞百分比。【结果】与模型组比较,给予青钱柳叶水提物治疗之后,阴虚内热型糖尿病中医表征表现如背部温度上升、舌色鲜红、活动次数明显增加、爪色青紫及眼睛神采异常等均有明显的改善(P<0.05或P<0.01),FBG、AUC、Urea含量和肝脏系数下降(P<0.05或P<0.01),肝糖原含量升高,CD8^+T细胞百分比升高,CD4^+T细胞百分比及CD4^+/CD8^+值下降(P<0.05或P<0.01)。【结论】青钱柳叶水提物能改善大鼠阴虚内热型2型糖尿病中医表征及调节免疫功能。

关键词：青钱柳叶水提物/药理学 2型糖尿病/中药疗法中医表征阴虚内热证糖代谢肝肾功能免疫功能疾病模型,动物大鼠