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基于固定化酶的乙酰胆碱酯酶抑制剂体外筛选模型的建立

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高等学校化学学报 2013年第5期34卷 1121-1126页

作者：陈晨史倩陈军辉张茹潭李鑫郑立王小如国家海洋局第一海洋研究所现代分析技术及中药标准化重点实验室青岛266061 上海海洋大学水产与生命学院上海201306 厦门大学化学化工学院厦门361005

以可重复使用的固定化酶代替游离态酶,建立一种基于比色分析的乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂体外筛选新模型.采用以氨基化硅胶为载体固定的AChE优化了实验条件,用AChE抑制剂阳性对照物他克林和毒扁豆碱对该模型进行验证,还对模型技术参数进... 详细信息

以可重复使用的固定化酶代替游离态酶,建立一种基于比色分析的乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂体外筛选新模型.采用以氨基化硅胶为载体固定的AChE优化了实验条件,用AChE抑制剂阳性对照物他克林和毒扁豆碱对该模型进行验证,还对模型技术参数进行评价,并将新模型用于单体化合物及天然产物粗提物AChE抑制活性评价.结果表明,最佳实验条件为:固定化酶用量55μL,底物浓度5 mmol/L,甲醇、乙醇及体积分数不高于6%的二甲基亚砜水溶液均可作为样品溶剂;模型验证及模型技术参数评价结果良好,该模型对AChE抑制剂筛选有较好的特异性和灵敏度,可用于筛选AChE抑制剂.该模型具有适用性强、固定化酶可重复使用及结果可靠等优点,是单体化合物及天然产物粗提物AChE抑制剂活性评价的有效方法.

关键词：固定化酶乙酰胆碱酯酶抑制剂靶酶抑制剂筛选

非水反相高效液相色谱法测定海藻中3种叶黄素类化合物

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分析试验室 2012年第9期31卷 13-16页

作者：张茹潭陈军辉史倩李鑫陈晨王帅王小如国家海洋局第一海洋研究所现代分析技术及中药标准化重点实验室青岛266061 厦门大学化学化工学院厦门361005

建立了非水反相高效液相色谱测定不同种类海藻中3种叶黄素类化合物的方法。采用超声波辅助提取海藻中的叶黄素类化合物,选用Alltima C18色谱柱分离,以甲醇-乙腈-丙酮为流动相系统,梯度洗脱分离,检测波长445 nm。结果表明,在选定的色谱... 详细信息

建立了非水反相高效液相色谱测定不同种类海藻中3种叶黄素类化合物的方法。采用超声波辅助提取海藻中的叶黄素类化合物,选用Alltima C18色谱柱分离,以甲醇-乙腈-丙酮为流动相系统,梯度洗脱分离,检测波长445 nm。结果表明,在选定的色谱条件下,待分析的3种叶黄素类化合物与其他化合物分离良好,在一定浓度范围内线性关系良好(紫黄素:6.24～624μg/L,环氧玉米黄素:4.56～456μg/L,玉米黄素:5.60～560μg/L)。该方法适用于不同海洋藻类中3种叶黄素类化合物的定量分析。

关键词：非水反相高效液相色谱叶黄素类化合物海洋藻类

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麻痹性贝毒素电喷雾质谱负离子模式分析特征

质谱学报 2014年第1期35卷 8-15页

作者：李兆永陈军辉王帅张茹潭史倩郑立王小如国家海洋局第一海洋研究所、海洋生态研究中心山东青岛266061 中国海洋大学化学化工学院山东青岛266100 厦门大学化学化工学院福建厦门361005

利用多级质谱技术对8种常见麻痹性贝毒素(GTX1,GTX 4,GTX2,GTX 3,dcGTX2,dcGTX3,C1和C2)在电喷雾质谱负离子模式下的分析特征进行研究。结果表明:8种目标化合物在一级质谱分析过程中均易失去1个H,形成准分子离子[M-H]-峰(基峰);在二级... 详细信息

利用多级质谱技术对8种常见麻痹性贝毒素(GTX1,GTX 4,GTX2,GTX 3,dcGTX2,dcGTX3,C1和C2)在电喷雾质谱负离子模式下的分析特征进行研究。结果表明:8种目标化合物在一级质谱分析过程中均易失去1个H,形成准分子离子[M-H]-峰(基峰);在二级质谱分析过程中,各化合物的母离子([MH]-)主要通过丢失-H2O和-NHCO等中性碎片,形成稳定的特征子离子峰,并且同分异构体的二级质谱图有差异,可为含硫麻痹性贝毒素的二级质谱定性、定量分析提供依据。此外,对各目标化合物二级质谱的主要碎片峰进行三级质谱分析,对产生的主要特征碎片峰进行归属,并推测裂解途径。本研究可为电喷雾质谱在负离子模式下检测含硫麻痹性贝毒素提供参考和依据。

关键词：麻痹性贝毒素电喷雾质谱裂解途径

基于精确质量数筛选的亲水作用色谱-高分辨质谱法快速鉴别赤潮藻中的麻痹性贝毒素

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分析化学 2013年第7期41卷 979-985页

作者：李兆永陈军辉李鑫张茹潭陈晨史倩王帅郑立王小如国家海洋局第一海洋研究所海洋生态研究中心厦门大学化学化工学院

采用亲水作用色谱-高分辨电喷雾质谱联用技术(HILIC-HR-ESI/MS)结合麻痹性贝毒素(PSP)精确质量数数据库,建立快速筛查、定性识别赤潮藻中各种常见PSP的方法。产毒藻细胞破碎后经0.1 mol/L乙酸溶液提取,通过HILIC-HR-ESI/MS正负离子模式... 详细信息

采用亲水作用色谱-高分辨电喷雾质谱联用技术(HILIC-HR-ESI/MS)结合麻痹性贝毒素(PSP)精确质量数数据库,建立快速筛查、定性识别赤潮藻中各种常见PSP的方法。产毒藻细胞破碎后经0.1 mol/L乙酸溶液提取,通过HILIC-HR-ESI/MS正负离子模式全扫描分析,得到产毒藻粗提物中PSP化合物准分子离子及主要碎片离子精确质量数,结合PSP数据库筛查并辅以商品化软件数据分析,实现产毒藻所含PSP的快速定性识别。所建数据库包含25种常见PSP化合物精确分子质量及碎片离子信息,所发展的HILIC-HR-ESI/MS方法分离度高、灵敏度好,所考察的10种常见PSP化合物检测限在10～80 nmol/L范围内,能满足产毒藻实际样品的分析要求。3种产毒藻实际样品筛查、分析结果良好,说明本方法是赤潮藻中麻痹性贝毒素快速筛选、定性识别的有效方法。

关键词：赤潮麻痹性贝毒素亲水作用色谱高分辨质谱筛选

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崂山酸枣叶茶中芦丁含量测定及芦丁利用研究

时珍国医国药 2014年第1期25卷 13-15页

作者：张茹潭陈军辉史倩李兆永郑立王小如国家海洋局第一海洋研究所现代分析技术及中药标准化重点实验室山东青岛266061 厦门大学化学化工学院福建厦门361005

目的探讨一种简单、准确测定酸枣叶茶中芦丁含量的HPLC法,并对崂山酸枣叶茶中芦丁的含量及其利用率进行了初步研究。方法在优化获得的最佳色谱分离条件下(选用高碳载量反相C18柱,特定比例乙腈-水为流动相),实现酸枣叶茶中芦丁及其异构... 详细信息

目的探讨一种简单、准确测定酸枣叶茶中芦丁含量的HPLC法,并对崂山酸枣叶茶中芦丁的含量及其利用率进行了初步研究。方法在优化获得的最佳色谱分离条件下(选用高碳载量反相C18柱,特定比例乙腈-水为流动相),实现酸枣叶茶中芦丁及其异构体的基线分离。结果方法的线性范围为0.02μg^5.00μg,检测限达6.6 ng,能满足实际样品的检测要求。五个崂山酸枣叶茶样品中芦丁的含量在11.3 mg/g^17.9 mg/g范围内,表明崂山酸枣叶茶中芦丁含量较高;崂山酸枣叶茶用热水冲泡2~3次,芦丁的浸出率高达60%~70%,饮用2.0 g酸枣叶茶所摄取的芦丁即相当于服用1.2片复方芦丁片。结论饮用酸枣叶茶而摄入的芦丁量较高,对人体的多种保健作用不能忽略。

关键词：关键词酸枣叶芦丁高效液相色谱利用度

TiO2-LDI-TOF快速检测细菌代谢物及用于细菌耐药性识别研究

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TiO2-LDI-TOF快速检测细菌代谢物及用于细菌耐药性识别研究

色谱及其联用技术在海洋药用生物核苷类化合物筛选排重方面的应用

第三届全国质谱分析学术报告会

作者：张茹潭秦琴刘宝红乔亮复旦大学化学系第二军医大学附属长海医院检验科

近年来临床治疗中因致病菌感染导致的致死率呈现逐年递增的趋势,尤其是耐药菌的出现导致抗生素治疗失败的案例逐年增多,对于临床致病菌尤其是耐药菌的快速鉴定以及耐药机理的研究已经变成非常棘手的问题[1]。我们课题组前期已经发展了... 详细信息

近年来临床治疗中因致病菌感染导致的致死率呈现逐年递增的趋势,尤其是耐药菌的出现导致抗生素治疗失败的案例逐年增多,对于临床致病菌尤其是耐药菌的快速鉴定以及耐药机理的研究已经变成非常棘手的问题[1]。我们课题组前期已经发展了基于细菌核糖体蛋白MALDI检测的方法用于细菌的快速鉴定[2]。在此基础上,我们尝试了小分子代谢物用于细菌鉴定的可能性。传统的基质如HCCA、DHB、9-AA等由于在低分子量端有非常强的背景信号难以用于代谢组分析,因此我们优化选取了纳米Ti O2 P25作为小分子检测的LDI基质。Ti O2 P25具有非常好的UV吸收效率,同时背景干扰极低,可以极大地提高检测灵敏度（图1）。在此基础上,我们进一步优化选取了细菌的裂解液Formic acid和1-Butanol,以及用于正负模式分析的质子添加和捕获试剂Salicylic acid和Dopamine。通过HCA、PCA及PLS-DA等多变量统计模型成功区分了48株临床菌株（包括大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌）。此外,我们还尝试采用该技术区分超广谱耐药和敏感的大肠埃希菌,当―鉴定阈值‖＞0.6时,误检率为零,并从中筛选出11种生物标志物（图1）。最后,我们也尝试了代谢通路分析用于细菌耐药机理的研究。实验结果显示若干氨基酸代谢通路（cysteineandmethionine metabolism, arginine and proline metabolism）、肽聚糖合成通路以及嘌呤代谢通路在临床耐药菌中发生显著改变,与文献报道相吻合。该工作首次尝试了采用Ti O2增强LDI快速检测小分子代谢物的方法鉴定临床致病菌,相比核糖体蛋白检测的方法,检测灵敏度更高并且可以提供更多关于细菌的代谢组信息,为后续更深入的机理研究提供了初步可行性预判。

关键词： TiO2 LDI-MS 临床致病菌耐药菌 ROC曲线

来源： cnki会议评论

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中国海洋药物 2014年第6期33卷 80-86页

作者：史倩陈军辉张茹潭李鑫李先国王小如中国海洋大学化学化工学院山东青岛266100 国家海洋局第一海洋研究所现代分析技术及中药标准化重点实验室山东青岛266061 厦门华夏职业学院福建厦门361024

为了解决天然产物化学研究中核苷类化合物重复提取、分离、纯化和表征等问题,避免人力物力的大量消耗并提高新化合物的发现效率,对已知核苷类化合物的快速鉴别、排重显得尤为重要。本文以笔者所在课题组取得的研究成果为例,从高效液相... 详细信息

为了解决天然产物化学研究中核苷类化合物重复提取、分离、纯化和表征等问题,避免人力物力的大量消耗并提高新化合物的发现效率,对已知核苷类化合物的快速鉴别、排重显得尤为重要。本文以笔者所在课题组取得的研究成果为例,从高效液相色谱、高效液相色谱-质谱联用、毛细管电泳和毛细管电泳-质谱联用等4种色谱及其联用技术,对海洋生物中核苷类化合物快速鉴别、排重方法进行了系统介绍。上述方法可以实现对海洋药用生物粗提物中常见核苷类化合物的快速筛选、排重,避免对已知成分繁杂的分离纯化、结构鉴定过程,为海洋天然产物化学研究提供了1种新思路。

关键词：海洋天然产物化学核苷类化合物筛选排重色谱及其联用技术

基于质谱技术的非靶向检测微生物新算法、新技术

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基于质谱技术的非靶向检测微生物新算法、新技术

液相色谱-高分辨质谱快速筛查近岸海水中的脂溶性海洋生物毒素

中国化学会第十三届全国分析化学年会

作者：乔亮杨奕程鼎易佳张茹潭张冬雪复旦大学化学系

病原微生物可以引起多种疾病,是对公共卫生和安全产生的严重威胁。发展非靶向的、灵敏的微生物检测方法对于食品安全和临床诊断等需求至关重要。传统的微生物检测鉴定主要依赖于基于细菌培养的生化实验,耗时长、成本高、对检测人员的技... 详细信息

病原微生物可以引起多种疾病,是对公共卫生和安全产生的严重威胁。发展非靶向的、灵敏的微生物检测方法对于食品安全和临床诊断等需求至关重要。传统的微生物检测鉴定主要依赖于基于细菌培养的生化实验,耗时长、成本高、对检测人员的技术水平依赖严重。新型非靶向的微生物检测主要包括基于质谱技术的质量指纹谱识别和基于基因测序的基因组分析。前者具有简单、快速、低成本的优势;后者则具有更高的分辨率和准确度。我们发展了一系列基于基质辅助激光解析离子化飞行时间（MALDI-TOF）质谱技术分析微生物的谱图解析新算法。实现了对于单一菌种一级的精准鉴定和低丰度细菌鉴定[1];简单混合细菌的MALDI-TOF直接鉴定;无需标准谱图库基于基因蛋白质组数据库的谱图识别与细菌鉴定[2]。开发了相对欧式距离、强度加权相对欧式距离、余弦夹角相关系数三种谱图相似性打分方法,相似谱图模型、随机谱图模型等假设验证方法。此外,我们还发展了一系列的样品预处理方法和表面增强离子化质谱分析方法。利用功能化的磁性纳米粒子实现了复杂体系中目标细菌的选择性捕获与质谱分析。达到了水中40个细菌每毫升、血清中500个细菌每毫升、全血中8000个细菌每毫升的检测灵敏度,将血液感染细菌诊断的时间缩短至4到6小时。我们进一步构建了用于捕获微生物气溶胶的微流控芯片系统装置,对环境中的微生物颗粒进行实时监控[3,4]。利用表面增强的离子化技术,我们将MALDI-MS分析微生物的有效信号范围从2-12kDa扩展至0-100kDa [5,6],从而能够得到更多的功能化蛋白信息,用于微生物耐药信息的预测。

关键词：微生物 MALDI-TOF 微流控新算法

来源： cnki会议评论

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液相色谱-高分辨质谱快速筛查近岸海水中的脂溶性海洋生物毒素