崂山酸枣叶茶特征成分分析及其质量控制方法研究

作     者：张茹潭 

作者单位：国家海洋局第一海洋研究所 

学位级别：硕士

导师姓名：王小如;陈军辉

授予年度：2014年

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090201[农学-果树学] 

主      题：酸枣叶茶 儿茶素类 黄酮甙类 抗氧化活性成分 芦丁 镇静催眠 质量控制 指纹图谱 DPPH自由基 质谱 

摘      要：酸枣叶茶是近年来兴起的一种具有多种保健功效的新型花草类茶叶,由鼠李科植物酸枣2(?)iziphus jujuba Mill. var. spinosa (Bunge) Hu ex H. F. Chow的叶子加工制作而成。近年来,酸枣叶茶因其特有的养心、安神、助睡眠功效而逐渐得到人们的关注。目前,虽已有研究表明酸枣叶水提液和中药酸枣仁(即酸枣的种子)具有相似的中枢神经抑制作用,能够明显抑制小鼠活动。但对于酸枣叶茶中存在的安神促眠成分仍有待进一步研究确定。抗氧化活性是衡量茶叶质量的一个重要指标,但目前还没有关于酸枣叶茶的抗氧化活性强度的测定和抗氧化成分鉴别方面的研究。市售酸枣叶茶主要由野生酸枣叶加工而成,虽然野生酸枣叶资源丰富,但仍存在用形态相似的其它植物叶子冒充酸枣叶的现象;不同产地的酸枣叶由于其生长环境、气候不同,导致其所含的活性成份也有一定程度的差异;此外,由于不同生产厂商加工工艺不同,所生产的酸枣叶茶质量差异较大,单纯从肉眼观察,难以分辨市售酸枣叶茶的真伪,更无法判断其质量。因此,有必要发展一种可以有效鉴别市售酸枣叶茶真伪并能对其质量进行评价的方法。为此,针对酸枣叶茶研究中所存在的以上问题,本研究采用现代分析技术分离鉴定酸枣叶茶中的主要活性成分并建立了相应的质量控制评价方法体系,所取得的主要研究结果如下所示： 1.采用高效液相色谱-电喷雾飞行时间质谱(HPLC-DAD-ESI-TOF/MS)及高效液相色谱-电喷雾离子阱多级质谱(HPLC-ESI-IT/MS2)方法对崂山酸枣叶茶中所含有的主要活性成分进行了有效的分离和鉴定。研究发现,酸枣叶茶中含有大量的黄酮甙类化合物以及少量的儿茶素类化合物,如,槲皮素-3-O-芸香糖苷,槲皮素-3-O-洋槐糖苷,槲皮素-3-O-芸香糖苷等黄酮甙类;没食子儿茶素,表没食子儿茶素,表没食子儿茶素没食子酸酯,表儿茶酚等儿茶素类。没有检出咖啡因和茶碱等具有兴奋大脑皮层功能的生物碱类化合物。通过查阅相关文献资料,发现酸枣叶茶中所检出的黄酮类化合物和中药酸枣仁中所含部分黄酮类成分相似,且酸枣叶中的总黄酮已通过动物实验证明具有镇静及催眠生物活性,因此这些黄酮类化合物极有可能是酸枣叶中的镇静催眠活性成分。此外,崂山酸枣叶茶中芦丁含量较高,冲泡饮用2.0g崂山酸枣叶茶,芦丁的摄入量约相当于服用1.2片复方芦丁片,对人体的保健作用不容忽视。 2.采用DPPH自由基体外清除模型测定了崂山酸枣叶茶水提液的总抗氧化活性;并采用HPLC-DAD-DPPH串联ESI-TOF/MS的方法对酸枣叶茶中的抗氧化活性成分进行了筛选鉴别,并在此基础上,对不同批次酸枣叶茶样品中的黄酮类化合物进行了半定量分析。结果表明,酸枣叶茶水提物的DPPH自由基清除作用明显,对DPPH自由基的清除率约为芦丁的1/7,咖啡酸的1/13;酸枣叶茶中含有多种自由基清除活性较高的化合物,如槲皮素-3-0-芸香糖苷(芦丁)、槲皮素-3-O-洋槐糖苷、山奈酚-7-0-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-L-(?)可拉伯糖-(1→2)-a-L-鼠李糖苷和槲皮素-3-O-β-D-木糖-(1→2)-a-L-鼠李糖苷等黄酮苷类以及色氨酸,它们在崂山酸枣叶茶中的含量较高,约为25.7-34.9mg/g。 3.应用高效液相色谱法建立了基于黄酮类活性化合物分布的市售酸枣叶茶HPLC特征指纹图谱,为市售酸枣叶茶的真伪鉴别及质量控制提供新方法。采用超声波辅助提取法用于黄酮类化合物的提取,高碳载量反相C18柱用于黄酮类化合物的分离,在最佳分离条件下,成功实现了酸枣叶茶粗提物中各黄酮类化合物的有效分离。并以芦丁为参照,对各黄酮类化合物的相对含量进行了测定。通过对21批不同产地、不同批次市售酸枣叶茶的HPLC分析,构建了以11种黄酮类化合物为指标的HPLC特征指纹图谱,结合聚类分析和相似度计算,成功用于市售酸枣叶茶的真伪鉴别和质量控制。不同市售酸枣叶茶样品分析结果显示,该方法简单、稳定性好、通用性强,基于黄酮类化合物的HPLC特征指纹图谱能够反映不同产地酸枣叶茶各自的固有特征,适用于市售酸枣叶茶的真伪及品质鉴定,可以做为市售酸枣叶茶的质量控制方法。