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粪肠球菌噬菌体IME-EF1的分离鉴定及其裂解酶的表达

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粪肠球菌噬菌体IME-EF1的分离鉴定及其裂解酶的表达

作者：张文惠安徽医科大学

学位级别：硕士

随着抗生素的滥用现象日益严重，细菌的耐药性问题日益加剧，新抗生素的研发速度远远赶不上耐药菌的产生速度，寻找新的抗菌制剂刻不容缓。而噬菌体及其裂解酶因其高效的杀菌能力及高度的宿主专一性而成为新一代抗菌制剂的候选之一，对... 详细信息

随着抗生素的滥用现象日益严重，细菌的耐药性问题日益加剧，新抗生素的研发速度远远赶不上耐药菌的产生速度，寻找新的抗菌制剂刻不容缓。而噬菌体及其裂解酶因其高效的杀菌能力及高度的宿主专一性而成为新一代抗菌制剂的候选之一，对于噬菌体及其裂解酶的研究在近些年被许多研究者提上日程。粪肠球菌是普遍存在于人或动物肠道、口腔及生殖道内的条件致病菌，可引起人的心内膜炎、菌血症、泌尿道感染及脑膜炎等疾病。在需氧革兰氏阳性菌导致的院内感染中，其致病率仅次于葡萄球菌，而多重耐药粪肠球菌所引起的疾病已经对人类健康造成极大威胁。本研究就目前粪肠球菌的严重耐药性现状，利用临床分离的多重耐药菌，从医院污水中分离到一株可广泛裂解耐药粪肠球菌的噬菌体IME-EF1，分析研究其生物学特性并进行全基因组测序;克隆表达噬菌体裂解酶，验证其裂解活性及测定裂解谱;构建小鼠腹部粪肠球菌感染模型对噬菌体IME-EF1及其裂解酶的治疗效果进行评估。方法：以临床分离的多重耐药粪肠球菌EF002为指示菌，采用噬菌斑实验从医院污水中分离噬菌体;利用双层平板培养法测定噬菌体IME-EF1效价,同时测定噬菌体的最佳感染复数及一步生长曲线;负染法透射电镜观察噬菌体形态;蛋白酶K/SDS法提取噬菌体基因组并酶切后电泳分析;ION TORRENT高通量测序仪测定噬菌体IME-EF1全基因组序列。 PCR扩增噬菌体IME-EF1裂解酶基因，克隆到pColdI表达载体进行诱导表达;采用点滴法与浊度法验证蛋白裂解活性及测定裂解谱;ELISA和Western blotting分析验证裂解酶蛋白表达与否及与敏感菌是否特异性结合。给小鼠腹部注射最小致死量的粪肠球菌EF002，感染一段时间后，分组腹部注射噬菌体IME-EF1或其裂解酶进行治疗，记录小鼠死亡率及血液内细菌量，判断噬菌体及其裂解酶的治疗效果。结果：成功分离出一株噬菌体IME-EF1，该噬菌体能够裂解多株临床分离的粪肠球菌;电镜观察呈蝌蚪形，最佳感染复数为1;通过绘制一步生长曲线证明该噬菌体感染后的潜伏期为25min，爆发期35min，裂解量60pfu。成功表达噬菌体裂解酶蛋白Lysin-EF2。该蛋白能够裂解实验室现有的所有粪肠球菌，包括2株耐万古霉素粪肠球菌;可与敏感菌特异性紧密结合。动物实验表明噬菌体IME-EF1及其裂解酶Lysin-EF2对于粪肠球菌所导致的感染具有较好的治疗效果，裂解酶治疗效果优于噬菌体;而在感染后及时有效的给药对于降低小鼠死亡率有一定意义。结论：随着粪肠球菌耐药性日趋严重，积极探索不依赖抗生素的治疗方法势在必行。研究结果表明利用临床分离的耐药粪肠球菌分离裂解性噬菌体，表达重组噬菌体裂解酶，并用于治疗细菌感染性疾病的方法是可行的，上述研究为耐药粪肠球菌的抗生素替代疗法打下了基础。

关键词：粪肠球菌噬菌体裂解酶噬菌体治疗

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曾繁仁生态美学的理论基础与实践意义研究

曾繁仁生态美学的理论基础与实践意义研究

作者：张文惠安徽大学

学位级别：硕士

生态环境问题是全球性问题,生态美学也成为全球热点话题。生态美学是中国美学领域的重要成果,自兴起以来,研究者众多。曾繁仁是中国生态美学研究者中的领军人物,他对生态环境的关注非常热切,对生态美学的研究全面且深刻,在中西方平等对... 详细信息

生态环境问题是全球性问题,生态美学也成为全球热点话题。生态美学是中国美学领域的重要成果,自兴起以来,研究者众多。曾繁仁是中国生态美学研究者中的领军人物,他对生态环境的关注非常热切,对生态美学的研究全面且深刻,在中西方平等对话交流的过程中形成独具中国特色的生态存在论美学思想。他的生态美学思想有着坚实的理论基础和很强的实践性,在学术理论与现实实践中均产生重要影响。曾繁仁生态美学思想的实践要求与新时代“美丽中国”建设的目标相一致,志在实现青山绿水绕祖国、人与自然相和谐的美好愿景。本文对曾繁仁生态美学思想的研究除去绪论和结语,主体内容分为三个部分:首先论述曾繁仁生态美学思想的理论来源,这是最基本的研究内容,是其他研究部分得以展开的基础。曾繁仁生态美学思想的理论资源广泛,有特定的理论指导方向,借鉴中西方文化中的生态美学思想,如马克思恩格斯、海德格尔、西方环境理论家以及中国的儒道佛家的生态审美智慧。其次论述曾繁仁生态美学思想的主要范畴,以“生态存在论”为主线,串联起“生态审美本性”“诗意栖居”“家园意识”基本范畴。用现象学的方法研究生态美学,从外在到本质,从个体到整体,形成生态整体论,审美地对待整个生态系统,诗意地栖居于地球。最后论述曾繁仁生态美学思想在现实中的实践拓展及意义,这也是本文研究的价值所在,他的生态美学思想在实践上的运用分别体现在经典作品的生态审美解读、新时代简约生活方式的倡导以及生态审美教育的推广。曾繁仁的生态美学思想来源于现实,最终也将指导现实的生态文明建设,促进中国美学的转型发展。

关键词：理论基础生态存在论生态美育实践拓展

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图书馆采编流程优化模式研究

现代情报 2008年第8期28卷 161-163页

作者：张文惠广州航海高等专科学校图书馆广东广州510725

本文针对图书馆采编流程运作的传统模式,综合运用经济学投入产出分析和管理学BPR理论的有关技术与方法,构建图书馆采编流程的优化模式,并分析优化模式的优越性。为进一步开展图书馆采编流程优化研究提供参考,也为优化图书馆采编流程运... 详细信息

本文针对图书馆采编流程运作的传统模式,综合运用经济学投入产出分析和管理学BPR理论的有关技术与方法,构建图书馆采编流程的优化模式,并分析优化模式的优越性。为进一步开展图书馆采编流程优化研究提供参考,也为优化图书馆采编流程运作献技献策。

关键词：采编流程投入产出分析流程活动重组优化模式

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VOCs综合治理项目施工风险管理研究

VOCs综合治理项目施工风险管理研究

作者：张文惠山东科技大学

学位级别：硕士

作为我国的支柱产业之一,炼化行业的生产规模、技术水平已经达到国际高度,环保工作也取得了显著成就。“十二五”后,我国炼化行业兴起了大批VOCs综合治理项目,然而对于此类新兴的环保项目,行业对其风险管理方面的研究相对不足,难以满足... 详细信息

作为我国的支柱产业之一,炼化行业的生产规模、技术水平已经达到国际高度,环保工作也取得了显著成就。“十二五”后,我国炼化行业兴起了大批VOCs综合治理项目,然而对于此类新兴的环保项目,行业对其风险管理方面的研究相对不足,难以满足实际工程和当前环境保护的需要。本文以西北某石化公司的VOCs治理项目为工程实例,对此类项目的风险管理方法展开研究,理论联系实际,提出VOCs综合治理类项目的风险管理新方法。以现有的风险管理理论、标准规范和法律文件等为基础,对本文用作工程实例的VOCs治理项目进行了两个层面的风险管控。首先从项目全生命周期的角度,选择贝叶斯网络法这一适用于不确定体系的分析方法,对项目进行宏观层面的风险管控,判断此类项目的风险因素集中在项目施工阶段。进而针对项目施工阶段,选取头脑风暴法这一典型的定性分析方法,对项目进行系统的风险识别,得出西北某石化公司VOCs治理项目的施工风险因素清单,从人员伤害、财产损失、环境影响和声誉影响四个方面分别引入评估指标,对风险因素的危害程度以0分至5分的分值进行了量化,建立风险矩阵将其定级为轻微风险、一般风险、重大风险。对于识别为重大风险的风险因素,通过改变施工方案等手段,从根源上进行了规避。本论文提出了针对VOCs综合治理项目风险管理的新方法,并将其运用在西北某石化公司具体项目实践过程中。实践证明,该方法有效提升了该公司的项目管理水平。论文提出的风险管控新方法可进一步提高VOCs治理项目的管理水平,提供了理论依据和运作模板,并为国内外其他相关企业VOCs综合治理项目提供了风险管理成功的具体事例,为相关企业相关项目提供一定的参考和借鉴,这有助于促进整个VOCs综合治理项目的持续健康发展,进而推动国家可持续发展战略的具体实施。

关键词：风险管理风险矩阵法贝叶斯网络 VOCs治理

采用分子动力学方法研究氯化钠水溶液的微观结构

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原子与分子物理学报 2023年第4期40卷 65-72页

作者：王丽娜尚洁莹张文惠周恒为赵兴宇伊犁师范大学物理科学与技术学院新疆凝聚态相变与微结构实验室伊宁835000

溶液的微观结构对溶液的宏观性质具有决定性影响,团簇的存在和溶液不均性的认知是该领域研究的重要进展之一,也是关注的热点.为了考察溶液的微观结构,本文采用分子动力学方法对浓度适中的氯化钠水溶液进行了模拟,获得了各原子(离子)间... 详细信息

溶液的微观结构对溶液的宏观性质具有决定性影响,团簇的存在和溶液不均性的认知是该领域研究的重要进展之一,也是关注的热点.为了考察溶液的微观结构,本文采用分子动力学方法对浓度适中的氯化钠水溶液进行了模拟,获得了各原子(离子)间的径向分布函数和溶液的瞬态图像.通过对比分析Na^(+)-Cl^(-)和Cl^(-)-Na^(+)的径向分布函数,并结合已有研究结果,表明该径向分布函数上第三峰也来源于离子对,发现氯化钠水溶液存在着第三种离子对;上述径向分布函数上的三个峰分别与直接接触离子对、部分间隔离子对和完全间隔离子对相对应,并给出了这三种离子对的瞬态图像.三个时刻下系统瞬态图像的分析结果表明,溶液中存在水分子连续分布的区域和由离子与水分子共同构成的离子团簇.各瞬态图像中水分子连续分布的最大区域的平均尺寸至少为1.43 nm,溶液中部分间隔离子对的比例最大,约为0.68.在同时考虑直接接触离子对和部分间隔离子对时,三个时刻中最大团簇尺度的平均值为1.44 nm,该值约为部分间隔离子对最概然尺寸的3倍;团簇尺寸随团簇中离子数的增加而增大,在团簇中离子数较大时,满足无规行走(自由连接链)模型的结果.这些说明氯化钠水溶液中存在着自聚集效应和微观不均匀,显示出自聚集效应也存在于离子溶液之中.上述区域和团簇的物质组成分别与氯化钠水溶液形成的冰和NaCl·2H_(2)O晶体的组成具有类似性,这启发人们思考溶液中该区域与团簇和相应固相中两种晶体之间的联系,促进对晶体形成的认知.

关键词：氯化钠水溶液团簇分子动力学模拟离子对

二氧化氯对MCF-7细胞的杀伤机制及其对裸鼠移植瘤生长的影响研究

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二氧化氯对MCF-7细胞的杀伤机制及其对裸鼠移植瘤生长的影响研究

作者：张文惠河北大学

学位级别：硕士

目的:研究二氧化氯(ClO2)对乳腺癌细胞(MCF-7)的杀伤机制,并在此基础上,探究ClO2对乳腺癌细胞移植瘤的影响。方法:1.以乳腺癌细胞株MCF-7为研究对象,设定对照组和ClO2干预组。采用MTT法检测ClO2干预后乳腺癌MCF-7细胞株的细胞活性、生... 详细信息

目的:研究二氧化氯(ClO2)对乳腺癌细胞(MCF-7)的杀伤机制,并在此基础上,探究ClO2对乳腺癌细胞移植瘤的影响。方法:1.以乳腺癌细胞株MCF-7为研究对象,设定对照组和ClO2干预组。采用MTT法检测ClO2干预后乳腺癌MCF-7细胞株的细胞活性、生长曲线及量效关系。2.用流式细胞术(FCM)检测ClO2干预后MCF-7细胞的周期变化、细胞凋亡情况和细胞膜通透性大小。3.通过HE染色法观察MCF-7细胞形态的完整性,吉姆萨染色法观察细胞核结构改变。4.构建MCF-7细胞裸鼠移植瘤模型,给移植瘤内注射ClO2,观察瘤体直径变化情况,作用一定时间后取瘤体进行石蜡切片,并对切片行HE染色和免疫组化染色(Ki67和VEGF)分析。结果:1.与对照组相比,各ClO2干预组中MCF-7的细胞增殖率均明显降低(P<0.05),且增殖率与药物浓度成反比。ClO2的有效抑制浓度为13μg/mL,有效杀伤浓度为26μg/mL。2.FCM检测提示:ClO2处理后,MCF-7细胞周期被阻滞在G1期,MCF-7细胞增殖被抑制(P<0.05)。细胞凋亡检测发现,低浓度ClO2对乳腺癌细胞凋亡作用明显(P<0.05),且随着ClO2浓度的增加,MCF-7细胞早期凋亡的细胞数逐渐减少,晚期凋亡的细胞数逐渐增加。3.PI染色膜通透性检测结果表明,细胞膜的通透性随着ClO2浓度增加而增大。HE染色辅助吉姆萨染色结果显示,随着ClO2浓度的增加,细胞膜完整性及染色体结构破坏程度逐渐增强,核仁数目逐渐增多,但细胞核的形态结构变化不大。4.ClO2处理MCF-7细胞移植瘤后,瘤体内部细胞出现大面积坏死的现象,HE染色和免疫组化阳性部位均为瘤体边缘。结论:1.ClO2处理MCF-7细胞后,MCF-7细胞的生长繁殖受到抑制,且细胞存活率与药物浓度呈反比关系。2.低浓度ClO2主要影响细胞增殖;中等浓度主要诱导细胞凋亡;高等浓度ClO2主要导致细胞坏死。3.ClO2能使MCF-7移植瘤内部坏死,且对瘤体部位皮肤的损伤是可控的,故“把浅表性肿瘤当成外伤处理”的设想是具有可行性的。

关键词：活性氧二氧化氯 MCF-7 凋亡坏死移植瘤

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薄层扫描法测定利胆排石片中大黄素的含量

中草药 1997年第A10期28卷 67-68页

作者：张凌张文惠江西中医学院

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松原市生猪养殖业经营现状与对策研究

松原市生猪养殖业经营现状与对策研究

作者：张文惠吉林农业大学

学位级别：硕士

我国是农业大国,农业产业发展关系到国民经济发展,农业产业经营情况是对产业发展的最直接描述。在农业产业中,养殖业的发展壮大备受瞩目,尤其是生猪养殖业,因其关系到国计民生,成为农业经济发展研究中的热点。松原市是吉林省生猪养殖大... 详细信息

我国是农业大国,农业产业发展关系到国民经济发展,农业产业经营情况是对产业发展的最直接描述。在农业产业中,养殖业的发展壮大备受瞩目,尤其是生猪养殖业,因其关系到国计民生,成为农业经济发展研究中的热点。松原市是吉林省生猪养殖大市,因生猪养殖项目开发受到社会关注,然而非洲猪瘟疫情的爆发和生态环保工作对养殖业的限制也影响到该地生猪养殖经营。解决生猪养殖经营存在的问题,不仅是松原市社会经济发展的主题,也关系到该市农村产业建设和乡村振兴等工作的开展,本研究以此为目标,进行松原市生猪养殖经营研究。研究采用文献分析法,对生猪养殖相关研究进行了系统的分析,发现生猪养殖经营研究范畴十分广泛,涉及到养殖成本和效益关系、养殖规模控制、生产技术和生产经营与环境保护关系各个方面,这些相关研究的最终落脚点都是如何促进生猪养殖业盈利,因此,将这些要素作为产业经营的基本要素进行分析,确定要求思路和研究方法,对重要概念和理论进行整理;研究采用数据分析法和问卷调查法,对松原市生猪养殖业投入产出情况进行整理,分析经营现状,为投入产出效率模型的建立提供数据基础;采用数据包络分析法（DEA）建立松原市生猪养殖经营的生产效率模型,探讨其经营过程中各要素投入的效率及其与产出的关系;采用访谈法,根据生产效率模型分析的结果,分析生猪养殖业经营存在的问题并提出对策建议。研究得到以下结论:第一,松原市生猪养殖业在2017年后在投入方面有明显提高,因此产值也有明显提高,总体而言,生猪养殖业的经营呈上升趋势。第二,DEA模型显示松原市生猪养殖业投入的8个样本单位中,只有基础成本、市场、企业3项的综合效率有效,技术、生态环保、养殖户和风险规避都未达到总额效率有效,尚有上升空间;第三,松原市生猪养殖业存在着养殖技术推广不足、养殖户的生产行为缺乏科学性、养殖规模发展不合理、生态环保资金不充足、政府政策与养殖业发展实际情况拟合度不高的问题。针对以上问题,提出如下对策建议:第一,创新生猪养殖技术推广服务;第二,进行生猪养殖户的生产科学教育;第三,鼓励企业和农户合作以优化养殖规模;第四,调整生猪养殖业环保资金结构;第五,制定合理的补贴政策并完善法规。

关键词：生猪养殖业投入产出 DEA

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再谈“难溶电解质的溶解平衡”教学设计

化学教育 2015年第17期36卷 24-27页

作者：张文惠河北衡水中学

针对当前“难溶电解质的溶解平衡”的教学设计存在过分注重探究、对教材重视不够、对符号表征重视不够等问题，介绍了追求“平实”的教学设计，主要包括内容的整体设计思路、课时目标、每一课时的主要教学环节及教学反思。

关键词：溶解平衡教学设计难溶电解质符号表征