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基于离线二维液质联用技术的多黏菌素E新组分的研究

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中国药学杂志 2022年第24期57卷 2118-2126页

作者：张含智胡迪田振华刘浩弈柯莱生物科技(上海)股份有限公司上海200240 上海市食品药品检验研究院上海201203 上海市药品监督管理局上海200233

目的建立一种基于离线二维高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱技术(off-line 2D HPLC-Q/TOF-MS)的多黏菌素E(PME)组分的结构分析方法。方法采用《欧洲药典》10版中的硫酸多黏菌素E的分析方法,经半制备液相色谱分别收集含量超过0.15%的馏分... 详细信息

目的建立一种基于离线二维高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱技术(off-line 2D HPLC-Q/TOF-MS)的多黏菌素E(PME)组分的结构分析方法。方法采用《欧洲药典》10版中的硫酸多黏菌素E的分析方法,经半制备液相色谱分别收集含量超过0.15%的馏分,去除溶剂后,注入液质联用系统。在HPLC-Q/TOF-MS方法中,根据建立的基于高分辨质谱的PME的结构解析策略推导其他未知组分的结构。结果通过离线半制备技术既可以富集含量较低的组分,也可以继续通过第二维色谱进行分离,提高峰容量。经质谱分析,共检测到31个组分。除《欧洲药典》中收载的11个组分外,还检测到包括已知组分如多黏菌素E1(PME1)、多黏菌素E2(PME2)、多黏菌素E4(PME4)、多黏菌素E2-缬氨酸(PME2-Val)的异构体和氨基酸取代产物,如2位苏氨酸转化为丝氨酸的PME组分[PME-Ser(2位)]及脂肪酰基链上的取代产物如3′位羟基化的PME2组分(3′-OHPME2),并首次解析出5个PME的脱水化合物,即2位或10位苏氨酸脱水形成脱氢丁氨酸而产生的PME1或PME2脱水物。结论本研究中的off-line 2D HPLC-Q/TOF-MS可以更全面的评价PME产品中的组分,特别是新型PME脱水物的发现扩展了对PME结构多样性的认识,本方法能够更严格地控制该类产品的质量。

关键词：多黏菌素E 多黏菌素脱水物组分半制备液相色谱-四级杆飞行时间质谱结构解析策略

基于高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱的棘白霉素B母核的结构解析策略

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中国药学杂志 2023年第22期58卷 2092-2097页

作者：张含智冯震罗煜田振华弈柯莱生物科技(上海)股份有限公司上海200240 上海市食品药品检验研究院上海201203

目的建立基于高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱(HPLC-Q/TOF-MS/MS)的棘白霉素B母核(ECBN)及其杂质的结构解析策略。方法通过HPLC-Q/TOF-MS/MS对ECBN的碎片离子进行解析,总结了①~④4条碎片离子裂解途径,这4条裂解途径包括特征性b、... 详细信息

目的建立基于高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱(HPLC-Q/TOF-MS/MS)的棘白霉素B母核(ECBN)及其杂质的结构解析策略。方法通过HPLC-Q/TOF-MS/MS对ECBN的碎片离子进行解析,总结了①~④4条碎片离子裂解途径,这4条裂解途径包括特征性b、y离子及氨基酸残基离子。另外,由于ECBN中含有较多羟基(8个)导致产生连续脱水离子峰,可以辅助推断ECBN类似物的结构。结果本研究首次建立了系统、完善的ECBN的结构解析策略,共解析了4个杂质的结构,包括已知杂质M和N,还发现了两个新的杂质:丝氨酸(2位)取代的ECBN[ECBN-Ser(2)]和3-羟基-4-羟甲基脯氨酸(6位)取代的ECBN[ECBN-4hMe3-Hyp(6)]。结论本研究为快速、合理解析ECBN或其衍生物中的杂质结构提供了方法,适用于棘白霉素类药物的质量研究。

关键词：棘白霉素B母核高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱结构解析策略 3-羟基-4-羟甲基脯氨酸(6位)取代的棘白霉素B

基于高分辨质谱的darobactin的结构解析策略

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中国抗生素杂志 2023年第6期48卷 649-656页

作者：张含智田振华罗煜秦东光郭锋弈柯莱生物科技(上海)股份有限公司上海200241

目的Darobactin(达罗巴汀)是一类经核糖体合成的翻译后修饰肽,该七肽具有独特的稠和双环结构,本研究建立了系统的基于高分辨质谱的darobactin组分的结构解析策略。方法依据文献中报道的在高能碰撞裂解(HCD)和碰撞诱导裂解(CID)模式下获... 详细信息

目的Darobactin(达罗巴汀)是一类经核糖体合成的翻译后修饰肽,该七肽具有独特的稠和双环结构,本研究建立了系统的基于高分辨质谱的darobactin组分的结构解析策略。方法依据文献中报道的在高能碰撞裂解(HCD)和碰撞诱导裂解(CID)模式下获得的一级及二级高分辨质谱数据,以碎片离子结构式的方式呈现了darobactin A的裂解途径,并修正了文献中部分碎片离子结构和质荷比的错误。针对特殊的双环结构,本文提出了基于生物合成路径的“逆向裂解途径”来确证1位和3位色氨酸之间因醚键断裂而生成的特征离子,并首次解析出包含特殊碳碳键的色氨酸-赖氨酸的碎片离子,为判断5位色氨酸被其他氨基酸(如精氨酸)取代提供了直接证据。结果建立了系统的darobactin A的结构解析策略,并以darobactin B/D/E的碎片离子加以验证,从理论上推导了其他darobacitn组分如C和F的特征离子。结论本文为快速判定darobactin新组分及其前体肽的结构提供了研究基础。

关键词： Darobactin A 双环七肽高分辨质谱结构解析策略逆向裂解途径

高效液相色谱质谱联用分析硫酸多黏菌素B中的未知杂质

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中国药学杂志 2018年第11期53卷 918-924页

作者：张含智秦峰刘浩上海市食品药品检验所上海201203

目的建立基于HPLC-MS/MS对硫酸多黏菌素B中未知杂质的结构分析方法。方法采用Agilent 1260-6550 Q/TOFMS液质联用仪,选择Diamonsil Plus C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.01 mol·L^(-1)CF_3COOH-CH_3CN(95∶5)溶液为流动相A,0.1%甲酸的CH_3CN溶液为流动相B,流动相A-流动相B=79∶21,等度洗脱,流速为1 mL·min^(-1),检测波长为215nm。质谱检测器采用电喷雾离子源(ESI),正离子扫描,一级质谱及二级质谱扫描范围(m/z):50~1 700。通过对比已知组分如多黏菌素B_1、B_2等与未知组分的二级质谱的异同,推断杂质结构。采用254 nm低压汞灯作为光化学反应(帕特诺-比希反应)的光源,以丙酮-水(50/50,V/V)作为反应试剂。结果推断出硫酸多黏菌素B原料药及制剂中7个未知杂质的结构,其中含量最大的未知杂质经光化学反应结合二级质谱推测结构为双键化多黏菌素B_1(命名为7'-烯基多黏菌素B_1),双键位于酰基脂肪链末端。结论 7'-烯基多黏菌素B_1为首次报道,本方法为药物中含有双键未知杂质的结构鉴定提供了一种新颖的解决思路。

关键词：硫酸多黏菌素B 未知杂质高效液相色谱质谱联用法光化学反应

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利奈唑胺葡萄糖注射液的质量分析

中国抗生素杂志 2022年第3期47卷 229-234页

作者：裘亚张含智丁颖吕丹丹赵敬丹张梦悦刘浩上海市食品药品检验研究院上海201203

目的评价利奈唑胺葡萄糖注射液的质量现状和存在的问题。方法采用法定标准结合探索性研究,从多方面对83批利奈唑胺葡萄糖注射液抽验样品的质量进行分析与评价。结果法定检验结果显示83批注射用利奈唑胺葡萄糖注射液均符合规定。探索... 详细信息

目的评价利奈唑胺葡萄糖注射液的质量现状和存在的问题。方法采用法定标准结合探索性研究,从多方面对83批利奈唑胺葡萄糖注射液抽验样品的质量进行分析与评价。结果法定检验结果显示83批注射用利奈唑胺葡萄糖注射液均符合规定。探索性研究中对利奈唑胺葡萄糖注射液的有关物质、对映异构体杂质和葡萄糖含量测定等方法进行了优化;建立了能同时分离15个已知杂质的HPLC方法,并发现各企业样品的杂质谱基本一致;采用LC-MS分析发现样品中均存在潜在基因毒性杂质3-氟-4-(4-吗啉基)苯胺,且在加速稳定性试验中,3-氟-4-(4-吗啉基)苯胺的含量略有增加。结论国内利奈唑胺葡萄糖注射液的产品质量较为理想;但各生产企业应对产品中的潜在基因毒性杂质3-氟-4-(4-吗啉基)苯胺予以关注。现行质量标准亟待统一和提高。

关键词：利奈唑胺葡萄糖注射液评价性抽验质量分析

HPLC结合组分制备分析杆菌肽中的有关物质及有效组分含量

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中国药学杂志 2018年第23期53卷 2041-2045页

作者：张含智秦峰刘浩上海市食品药品检验所上海201203

目的建立基于HPLC结合组分制备对杆菌肽中有关物质及有效组分含量测定的分析方法。方法采用Agilent HPLC,选择Diamonsil Plus C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm),以50 mmol·L^(-1)甲酸铵溶液(p H经甲酸调至4. 0)为流动相A,乙腈为流动相B... 详细信息

目的建立基于HPLC结合组分制备对杆菌肽中有关物质及有效组分含量测定的分析方法。方法采用Agilent HPLC,选择Diamonsil Plus C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm),以50 mmol·L^(-1)甲酸铵溶液(p H经甲酸调至4. 0)为流动相A,乙腈为流动相B,流速为1 m L·min-1,线性梯度洗脱,检测波长为254 nm。经调整甲酸铵溶液的p H、流动相比例、溶剂等确定了分析方法,开展了专属性、线性、精密度、重复性、稳定性、耐用性等方法学研究。根据半制备液相色谱技术收集了杆菌肽A、B1/B2/B3、C1/C2/C3、F(采用《美国药典》40版中杆菌肽液相分析方法),并在甲酸铵-乙腈液相体系中进行定位及确认。结果建立了适用于杆菌肽有关物质的液相分析方法,方法学试验结果良好。已知组分与相邻杂质之间实现良好分离,特别是B1/B2的分离,明确了各组分的洗脱位置。对比了不同杆菌肽样品中各组分的含量,能够提供更加详细的样品信息。结论该液相分析方法可同时测定杆菌肽中的有关物质及有效组分含量,适用于该产品的质量控制。

关键词：杆菌肽杆菌肽F 杆菌肽A 组分制备

离线二维色谱结合糖苷外切酶酶解用于IgG与人血清糖蛋白中N-糖链的结构表征

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分析测试学报 2020年第2期39卷 198-204页

作者：李凤张含智康经武西安文理学院化学工程学院陕西西安710065 上海市食品药品检验所上海201203 中国科学院上海有机化学研究所生命有机化学国家重点实验室上海200032

基于离线二维色谱和糖苷外切酶分析,建立了一种有效、可靠的糖蛋白N-糖链的结构鉴定方法。首先采用弱阴离子交换色谱实现不同唾液酸程度糖链的制备,随后将激光诱导毛细管电泳(CE-LIF)与糖苷外切酶相结合进行糖链结构鉴定。将分离制备后... 详细信息

基于离线二维色谱和糖苷外切酶分析,建立了一种有效、可靠的糖蛋白N-糖链的结构鉴定方法。首先采用弱阴离子交换色谱实现不同唾液酸程度糖链的制备,随后将激光诱导毛细管电泳(CE-LIF)与糖苷外切酶相结合进行糖链结构鉴定。将分离制备后的糖链荧光标记后,进行自上而下的消化(top-down digestion)以及自下而上的结构归属(bottom-up identification),共检测到IgG中的18种糖型。将上述策略进一步应用于人血清中N-糖链的分析,发现不同唾液酸化程度糖链的相对量为S1:S2:S3:S4=4.7:20.9:6:1。结果表明,人血清中高丰度的中性糖链与IgG的中性糖链结构非常相似,而血清中含量最丰富的是二唾液化两天线的N-糖型FA2G2S2。该方法在糖蛋白N-糖链的结构表征中具有一定的应用潜力。

关键词：离线二维色谱毛细管电泳免疫球蛋白G N-糖链人血清

由硫酸卡那霉素注射液中杂质的变化探讨处方和灭菌工艺的合理性

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药学学报 2021年第6期56卷 1683-1688页

作者：赵敬丹刘浩张含智上海市食品药品检验研究院上海201203

通过硫酸卡那霉素注射液中主药卡那霉素和功能性辅料枸橼酸钠的相容性研究,对制剂处方进行评价,探讨处方中枸橼酸钠添加浓度和该处方条件下灭菌工艺的合理性。采用经优化的高效液相色谱-蒸发光散射检测系统(HPLC-ELSD)分别测定原研药和... 详细信息

通过硫酸卡那霉素注射液中主药卡那霉素和功能性辅料枸橼酸钠的相容性研究,对制剂处方进行评价,探讨处方中枸橼酸钠添加浓度和该处方条件下灭菌工艺的合理性。采用经优化的高效液相色谱-蒸发光散射检测系统(HPLC-ELSD)分别测定原研药和国产制剂中枸橼酸钠的含量和杂质谱;采用新建的柱后衍生化-HPLC-荧光检测系统(FLD)分析某些特定杂质的量和枸橼酸钠含量的相关性;结合特定杂质的质谱(MS)裂解规律,探讨处方及灭菌工艺的合理性。结果显示:国产注射液中枸橼酸钠的含量是原研药的近40倍;通过系列加速对比实验(121℃),提示某些未知杂质和枸橼酸钠的含量相关;结合其质谱裂解规律,推测上述杂质主要为卡那霉素和枸橼酸钠的反应产物。因此,国内药品生产企业在处方筛选时应关注处方的合理性,并结合主药和辅料的理化特性选择适当的灭菌工艺,保证临床用药的安全性。同时,对于主药结构中含有伯氨基的药物,在处方设计中应关注辅料的相容性问题。

关键词：卡那霉素枸橼酸钠辅料相容性杂质谱衍生化

毛细管电泳-激光诱导荧光检测用于多个胞内蛋白激酶的抑制剂筛选和选择性评价(英文)

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色谱 2013年第7期31卷 646-655页

作者：张倩倩张雪佩张含智康经武中国科学院上海有机化学研究所上海200032

发展了一种基于毛细管电泳(CE)-激光诱导荧光(LIF)检测的多个细胞内源激酶的抑制剂平行筛选及选择性评价方法。CE高效的分离能力和LIF检测器的高选择性,使得同时测试多个胞内激酶的活性成为可能。共4种细胞系、3种特异性蛋白激酶底物肽... 详细信息

发展了一种基于毛细管电泳(CE)-激光诱导荧光(LIF)检测的多个细胞内源激酶的抑制剂平行筛选及选择性评价方法。CE高效的分离能力和LIF检测器的高选择性,使得同时测试多个胞内激酶的活性成为可能。共4种细胞系、3种特异性蛋白激酶底物肽、2种选择性蛋白激酶抑制剂和1种非选择性蛋白激酶抑制剂用于方法的建立。特异性底物肽与细胞裂解液混合后孵育,被其相应的激酶选择性地磷酸化,利用CE-LIF分离检测磷酸化产物和底物肽。同时测定一个抑制剂对几种蛋白激酶的抑制活性,用于评价抑制剂的选择性。与传统的单靶标筛选模式相比,这种基于细胞裂解液的多靶标筛选方法能提供更多的信息,更加高效,且细胞裂解液作为一种廉价的激酶来源大大降低了筛选成本。

关键词：毛细管电泳激光诱导荧光检测蛋白激酶抑制剂筛选选择性评价