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《百回本<西游记>作者臆断》质疑

苏州大学学报（哲学社会科学版） 1991年第1期7卷 57-59页

作者：廉旭

《苏州大学学报》1990年第一期刊登了陈君谋的文章《百回本作者臆断》(人大《中国古代近代文学研究》1990年第6期复印,以下简称陈文)。作者认为,吴承恩写的《西游记》是游记性质的作品。对此,笔者有不同看法。一是吴承恩不具备写游记性... 详细信息

《苏州大学学报》1990年第一期刊登了陈君谋的文章《百回本作者臆断》(人大《中国古代近代文学研究》1990年第6期复印,以下简称陈文)。作者认为,吴承恩写的《西游记》是游记性质的作品。对此,笔者有不同看法。一是吴承恩不具备写游记性质《西游记》的条件。众所周知,写游记性质作品的一个先决条件是:本人须有亲身的经历,要有时间、精力和目的去游览名山大川,耳闻目睹异国风土人情。如辩机的《大唐西域记》是根据师父陈玄奘赴西天取经途中亲身经历的种种奇遇,并通过其口述写成的。又如元初道士邱长春“固尝西行。

关键词：唐西域长春真人西游记游记性相似之处吴承恩苏州封建统治者中国古代近代文学研究作者

基于胃肠微生物调控的小建中汤治疗慢性萎缩性胃炎大鼠的作用机制研究

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基于胃肠微生物调控的小建中汤治疗慢性萎缩性胃炎大鼠的作用机制...

作者：廉旭山西大学

学位级别：硕士

选题依据:小建中汤出自《伤寒论》,由饴糖和桂枝、白芍、生姜、大枣和炙甘草五味中药组合而成,主要用于中焦虚寒、肝脾不协调所引起的腹部疼痛的治疗。现代临床多将其用于治疗慢性萎缩性胃炎(Chronic atrophic gastritis,CAG)等胃肠疾病... 详细信息

选题依据:小建中汤出自《伤寒论》,由饴糖和桂枝、白芍、生姜、大枣和炙甘草五味中药组合而成,主要用于中焦虚寒、肝脾不协调所引起的腹部疼痛的治疗。现代临床多将其用于治疗慢性萎缩性胃炎(Chronic atrophic gastritis,CAG)等胃肠疾病,效果确切。但目前对小建中汤治疗CAG的作用机制研究还较为缺乏,多是对其药效的初步评价。代谢组学是研究生物体系在生命过程中受到外界干预后机体代谢物的变化规律及其与生物学功能关系的技术手段。利用代谢组学技术可以对机体在疾病状态及药物治疗后体内代谢物的变化情况进行监测,从而为阐释药物作用机制提供数据支持。同时,CAG作为一种消化系统疾病,与菌群有着密不可分的关系。胃部并非是无菌环境,在疾病状态下胃部的菌群呈现出丰富的多样性;结肠是整个大肠中占比最多的部位,是微生物菌群最丰富的肠段。因此对胃液和结肠内容物微生物群落进行研究,能够更加全面地反映CAG疾病状态下及小建中汤治疗后的微生物差异。将代谢组学与微生物组学技术相关联,可以深入研究胃肠道菌群与机体代谢的关系,为阐明小建中汤的药效及作用机制开启了一个新思路。目的:本研究以CAG大鼠为动物病理模型,以小建中汤为治疗药物,联合代谢组学技术与16S rRNA技术,从“小建中汤-CAG-胃肠道菌群”三方面出发,研究小建中汤治疗CAG的潜在作用机制。方法:(1)首先构建CAG大鼠模型,用于小建中汤低剂量组和高剂量组的药效评价,另外设置阳性药组、模型抗生素干扰组、小建中汤低剂量抗生素组和小建中汤高剂量抗生素组,外加空白组。造模期间观察记录大鼠的外观状态和体重的变化,检测胃液pH、胃蛋白酶活性、血清TNF-α、IL-6和总胆汁酸的含量变化情况,并进行了胃窦组织的病理切片。同时,采用微量比浊法对抗生素对胃肠道菌群的抑制效果进行了检测。随后,综合考察传统药效学的药效,比较高低剂量的优劣。并且利用液相色谱-质谱联用技术分别对胃液和结肠内容物进行代谢组学分析,获取差异代谢物,综合评价小建中汤的药效。根据抗生素组代谢物含量的变化情况,推测代谢物含量变化是来自于小建中汤的直接调控还是小建中对菌群调控导致的间接作用。(2)使用16S rRNA高通量测序技术,分析各组大鼠的胃液及结肠内容物菌群的变化情况,定位得到具有显著差异的菌种,研究小建中汤对CAG大鼠菌群结构的影响。(3)对代谢组学获得的差异代谢物和16S rRNA高通量测序得到的差异菌种进行Spearman相关性分析,筛选出具有强相关性的差异代谢物-差异菌种相关对,随后分析各相关对之间可能存在的作用,最后采用分子对接技术对其互作中所涉及蛋白进行初步验证。结果:(1)药效学结果显示,模型组大鼠皮毛枯黄、尾巴颜色偏白色、精神状态萎靡以及对外界刺激反应小,同时胃液pH值升高,胃蛋白酶活性降低,胃黏膜萎缩且有炎症发生,血清TNF-α、IL-6和总胆汁酸的含量均显著升高,表明模型复制成功。给予小建中汤干预后,各项指标均可观察到显著的回调,高剂量组效果优于低剂量组。抗生素对给药组进行干预后,回调效果有所下降,表明菌群在小建中汤发挥药效过程中起到了重要作用。微量比浊法检测结果表明,抗生素干预后,大鼠粪便菌群含量显著减少。且增殖速度明显降低。代谢组学结果表明:与C组相比,在M组中,胃液中共有14个差异代谢物,小建中汤治疗后可回调7个差异代谢物,推测小建中汤可直接调控其中2个代谢物,而通过调节菌群影响其余5个代谢物。结肠内容物中共有19个差异代谢物,有11个小建中汤治疗后可显著回调,推测其中有4个代谢物被小建中汤直接调控,有1个受小建中汤和菌群的共同调控,其余6个代谢物的变化来自小建中汤对菌群的间接调控。(2)16S rRNA测序结果显示,CAG大鼠胃肠道菌群均发生了显著变化。其中,胃液中共有3个门,4个科,6个属和6个种的菌群发生了显著变化,给药后可显著回调其中1个门,3个科,4个属和5个种的菌群丰度。结肠内容物中有3个门,8个科,9个属和9个种的菌群发生了显著变化,给药后可以回调1个门,3个科4个属和5个种的菌群丰度。说明CAG的发病与胃肠道菌群紊乱关系密切,而小建中汤治疗可以改善这种菌群紊乱的状态。(3)通过Spearman相关性分析,找寻代谢组与微生物组之间的关联关系,其中在胃液当中r大于|0.6|的强相关对有9对。而在结肠内容物当中r大于|0.6|的强相关对有16对。随后收集小建中汤各单味药的有效成分,并对强相关对中可能存在“小建中汤-代谢物”,“小建中汤-菌群”调控作用所涉蛋白靶点进行分子对接验证,推测小建中汤有效成分可调控L-Tyrosine、L-Phenylalanine、PE(17:0/0:0)、Cervonoyl ethanolamide、Glycocholic acid、Urocanic acid和Tyr

关键词：小建中汤慢性萎缩性胃炎代谢组学抗生素胃肠道菌群关联分析

服务业基层员工情绪智力结构研究 ——以大型连锁超市为例

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服务业基层员工情绪智力结构研究 ——以大型连锁超市为例

作者：廉旭北京邮电大学

学位级别：硕士

近年来,国内外研究人士对“情绪智力”概念逐渐走向认同与完善;大量实践表明,企业不再仅仅关注员工的高智商与高学历,情绪智力成为个体成功的重要因素。尤其是在服务产业迅速发展的今天,如何提高服务行业的服务水平,成为服务企业热切关... 详细信息

近年来,国内外研究人士对“情绪智力”概念逐渐走向认同与完善;大量实践表明,企业不再仅仅关注员工的高智商与高学历,情绪智力成为个体成功的重要因素。尤其是在服务产业迅速发展的今天,如何提高服务行业的服务水平,成为服务企业热切关心的问题,对组织的人力资源管理产生了很大的影响。目前国内的研究基本是停留在对国外情绪智力量表的介绍,实证研究不多,也大都集中在以在校学生为对象的研究上,对员工,尤其是服务企业员工的研究更少。本研究以情绪智力为核心,采用理论与实证研究、定性与定量相结合的方法,以我国服务行业的员工为研究对象,对员工的情绪智力进行探索性研究,希望从理论与实证相结合的角度,探讨服务行业的员工的情绪智力包括哪几个因素,.并通过工作绩效、组织承诺等效标来探索他们之间的关系,从而为服务企业员工招聘提供可靠的依据。本研究分为两个阶段：第一阶段是对以往情绪智力及相关文献的梳理、总结与评述,并在此基础上提出本研究思路;第二阶段为质性研究,用结构化的问卷对员工进行访谈,以便了解基层员工对情绪智力的理解等相关问题,并以此作为依据设计问卷;第三阶段是定量研究。在第二阶段访谈的基础上,结合西方情绪智力研究和工作绩效、工作满意度、组织承诺等理论,并根据服务业的实际情况,设计了基层员工情绪智力结构测评问卷,通过SPSS 11.5统计。最后,在此基础上,结合现实情况提出了有关招聘、培训服务业基层员工的建议,希望借此引起实践者对相关问题的关注,为情绪智力理论的进一步研究和发展提供依据。

关键词：情绪智力服务业基层员工招聘培训

习近平对马克思主义青年担当观的继承与发展研究

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习近平对马克思主义青年担当观的继承与发展研究

作者：廉旭华北电力大学

学位级别：硕士

党的十八大以来,习近平总书记高度重视青年担当问题,通过讲话、座谈、书信等多种方式,提出了一系列新观点、新论断和新要求,系统阐释了青年担当问题,形成了包括青年担当必要性、担当要义、担当教育等内容的新时代青年担当观。系统探究... 详细信息

党的十八大以来,习近平总书记高度重视青年担当问题,通过讲话、座谈、书信等多种方式,提出了一系列新观点、新论断和新要求,系统阐释了青年担当问题,形成了包括青年担当必要性、担当要义、担当教育等内容的新时代青年担当观。系统探究习近平对马克思主义青年担当观的继承发展关系,不仅有利于深刻理解习近平关于新时代青年担当的立场、观点、方法与价值,而且有利于把握马克思主义青年担当观的思想体系和发展脉络。习近平关于新时代青年担当的论述既对马克思主义青年担当观有所借鉴和继承,又立足新时代进行了丰富和发展。继承主要包括两个方面,一方面,继承了马克思主义青年担当观一贯坚持的人民立场和历史唯物主义方法,另一方面,对于青年职业的选择、青年理想信念的培养、青年干部的担当要求以及共青团在青年培育中的作用进行了思想观点的继承,并结合时代特征进行了相应阐释。发展主要表现为凸显了青年的世界担当,对青年担当的要求更加精准,强调青年担当教育的主体和内容向一体化方向发展。相比以往的青年担当观,习近平关于新时代青年担当的论述更具鲜明的时代性、深刻的人民性、显著的民族性、突出的国际性以及丰富的实践性特征。不仅为新时代青年担当教育实践提供了遵循,而且为新时代青年成长成才指明了方向。

关键词：青年担当观习近平马克思主义继承发展

基于深度学习的智能车辆视觉实时定位算法研究

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基于深度学习的智能车辆视觉实时定位算法研究

作者：廉德旭哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

随着人工智能领域的发展,人们对生活质量更高的追求,无人驾驶成为汽车领域研究热点,而其中关键的一点,车辆行驶过程中需要提供车辆此时的位置信息以及姿态信息,根据得到的数据来进行自主导航决策。VSLAM（Visual Simultaneous Localizat... 详细信息

随着人工智能领域的发展,人们对生活质量更高的追求,无人驾驶成为汽车领域研究热点,而其中关键的一点,车辆行驶过程中需要提供车辆此时的位置信息以及姿态信息,根据得到的数据来进行自主导航决策。VSLAM（Visual Simultaneous Localization and Mapping）的前端视觉里程计通过相机采集图像获得图像序列,利用相机成像模型与计算中的多视图几何学原理计算车辆的姿态信息,为无人驾驶后续决策的实现奠定基础。本文从VSLAM系统的前端视觉里程计的原理出发,重点研究了VSLAM系统中视觉里程计各部分模块的关键算法,包括图像中特征点的提取、特征点的匹配以及基于得到的匹配特征点对进行的位姿估计,最后应用本文中的视觉里程计进行了试验验证。对于特征点提取与匹配模块,采用深度学习的方法设计浅层卷积网络同时提取特征点和描述子。为提高训练模型的精度,在原有的三分支边界损失函数基础上添加了全局正交正则化项,同时在训练中对数据集进行了数据增强处理,提高训练模型的鲁棒性。针对训练好的模型,在尺度、旋转、视角以及光照变换等条件下对本文中算法以及ORB、SIFT两种传统算法进行了性能分析。在特征点对匹配后的位姿结果中显示,经标准的RANSAC优化后本文中的算法与ORB、SIFT算法得到的位姿结果相比,较ORB算法位姿估计的误差更小,同时在不同的条件下有着与SIFT算法近似或更优的位姿结果。在时间性能方面,本文中的算法在GPU硬件条件下能够实时的提取图像中的特征点和描述子,能够满足无人驾驶对实时性能的要求。对于位姿估计模块,针对传统视觉里程计采用标准RANSAC（Random Sample Consensus）算法对图像中特征提取匹配的样本进行提纯优化,剔除离群点,利用图割RANSAC（Graph-cut RANSAC）算法进行替换。在尺度、旋转、视角以及光照变换等条件下对标准RANSAC算法和图割RANSAC算法进行优化结果对比。试验结果表明,经由图割RANSAC算法进行优化的结果相比于标准RANSAC算法,估计的位姿结果更精确。最后基于改进的特征点提取与匹配以及位姿优化模块构建视觉里程计,将其与ORB算法的视觉里程计在数据集上进行试验对比,结果表明了该视觉里程计相比于ORB算法构成的传统视觉里程计位姿估计结果与真实位姿更加接近,平均平移误差降低33.04%,平均旋转误差降低18.78%,具有更高的精度。

关键词：深度学习视觉里程计特征点提取与匹配位姿估计

紫杉醇的氟代单糖基化修饰及其抗肿瘤活性研究

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紫杉醇的氟代单糖基化修饰及其抗肿瘤活性研究

作者：廉旭静天津科技大学

学位级别：硕士

紫杉醇具有诱导和促进微管蛋白聚合的作用,能够抑制肿瘤细胞的分裂和增殖。对乳腺癌、卵巢癌和部分头颈癌和肺癌等多系统肿瘤都有良好的治疗效果。但是紫杉醇具有高度亲脂性,几乎不溶于水,且半衰期短,其细胞毒性不具有选择性,毒副作用大... 详细信息

紫杉醇具有诱导和促进微管蛋白聚合的作用,能够抑制肿瘤细胞的分裂和增殖。对乳腺癌、卵巢癌和部分头颈癌和肺癌等多系统肿瘤都有良好的治疗效果。但是紫杉醇具有高度亲脂性,几乎不溶于水,且半衰期短,其细胞毒性不具有选择性,毒副作用大,因此亟待对紫杉醇进行结构或剂型的改造,提高其水溶性和靶向性,降低毒副作用和延长半衰期。相关研究表明,葡萄糖转运蛋白GLUTs在肝癌等多种实体瘤中过量表达。甘露糖受体（Mannose receptor,MR）在肝癌细胞或肝癌组织中也过量表达,因此GLUTs和MR成为重要的研究治疗靶点。基于此,本文设计并合成了紫杉醇的两种靶向型前药,即葡萄糖糖基化紫杉醇和甘露糖糖基化紫杉醇。这两种前药靶向肿瘤部位,经水解作用释放出原药,从而发挥抗肿瘤作用。值得一提的是,我们在糖基中创新性的引入氟原子,利用氟原子本身的特性,提高前药的代谢稳定性和生物利用度。本文以β-五乙酰葡萄糖为原料经过七步反应以10%与8%的收率分别得到氟代葡萄糖中间体和氟代甘露糖中间体;对于Linker,我们以对硝基苯甲醇为起始原料,经过三步反应,以56%收率得到异氰酸酯类中间体;之后,将氟代葡萄糖与Linker进行偶联,经过五步反应,以总收率2%得到氟代葡萄糖糖基化紫杉醇（2F-glc-PTX）。另一方面,将氟代甘露糖与Linker反应,经过五步反应获得氟代甘露糖糖基化紫杉醇（2F-man-PTX）,总收率2%。同时,我们也制备了天然葡萄糖基修饰的紫杉醇（glc-PTX）作为对照。完成制备阶段后,我们对目标化合物进行了水溶性测定、药物累计释放测定和细胞毒性测试。实验结果显示,2F-glc-PTX,glc-PTX和2F-man-PTX三种化合物在水中的溶解度分别为480 μg/mL、870 μg/mL和390 μg/mL,相对于紫杉醇的50 μg/mL,三种糖基化修饰后的前药水溶性提高了 5-17倍;氟代和天然葡萄糖糖基化紫杉醇在PB+10%FBS+β-葡萄糖苷酶条件下24 h时累积释放率分别达到49%和83%;氟代甘露糖糖基化紫杉醇在PB+10%FBS条件下24 h时累积释放率达到80%。2F-glc-PTX、glc-PTX 和 2F-man-PTX 对肝癌细胞 HepG2 的 IC50 值分别为 280 nM、60 nM 和 250 nM。以上体外实验结果表明,制备的紫杉醇的氟代糖基衍生物显示出改善的溶解度、适宜的原药释放速率和良好的细胞毒性,具有深入研究的价值。

关键词：紫杉醇前药靶向疗法糖基化修饰

三峡库区彭家槽滑坡治理失效原因及治理对策研究

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三峡库区彭家槽滑坡治理失效原因及治理对策研究

作者：廉旭闯绍兴文理学院

学位级别：硕士

本文以三峡库区兴山县境彭家槽滑坡为研究对象,调查了边坡的工程地质条件。结合勘察、测绘、理论分析与稳定性计算等手段,对该滑坡的特征、变形机理、稳定性、前期治理失效原因及下一步治理对策进行研究。研究成果为三峡库区的典型滑坡... 详细信息

本文以三峡库区兴山县境彭家槽滑坡为研究对象,调查了边坡的工程地质条件。结合勘察、测绘、理论分析与稳定性计算等手段,对该滑坡的特征、变形机理、稳定性、前期治理失效原因及下一步治理对策进行研究。研究成果为三峡库区的典型滑坡地质灾害发育演化特征及其治理对策提供重要的案例和借鉴。论文工作如下:(1)通过对彭家槽滑坡的工程地质及滑坡机理分析,得出该滑坡属于蠕滑型阶跃式滑坡。坡体受持续性降雨影响,上部出现多条裂缝,大量雨水通过地表张拉裂缝进入土体内部,降低土体的力学性质,继而发生失稳破坏。降雨作用是此次滑坡的诱发主因。(2)对彭家槽坡体稳定性进行评价。通过定性评价法、极限平衡法和有限元法对边坡在天然、饱水工况下的变形破坏情况和稳定性系统分析,得到彭家槽边坡在天然工况下,安全储备较小,处于欠稳定状态;在饱水工况下,处于不稳定的状态,尤其在强降雨作用下,计算安全系数较天然工况明显下降。现场调查该滑动在暴雨季节发生溜坡,并出现部分张拉裂缝,分析结果与实际较为吻合。(3)对滑坡治理对策进行研究,推荐采用抗滑桩+排水沟+削方的治理方案。运用数值模拟的手段,对抗滑桩设计参数进行优化。结果表明边坡在抗滑桩支挡作用下,坡体位移与应变值都明显降低,桩顶变形量小于容许阈值,满足规范要求。治理后边坡稳定性大幅度提高,处于稳定状态。

关键词：边坡稳定性三峡库区数值模拟治理对策抗滑桩

微润灌溉下不同施氮措施对土壤水氮运移及蔬菜生长的影响

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微润灌溉下不同施氮措施对土壤水氮运移及蔬菜生长的影响

作者：廉旭瑞太原理工大学

学位级别：硕士

微润灌溉是国内外目前节水效果较好的农业灌溉方式,它采用地埋方式,利用微润管膜内外水势差将植物生长所需水分与养分适时、适量地输送至作物根部,减少了灌溉水的蒸发、渗漏损失,可以根据作物对水分的需求来调节灌溉水量,突破性的实现... 详细信息

微润灌溉是国内外目前节水效果较好的农业灌溉方式,它采用地埋方式,利用微润管膜内外水势差将植物生长所需水分与养分适时、适量地输送至作物根部,减少了灌溉水的蒸发、渗漏损失,可以根据作物对水分的需求来调节灌溉水量,突破性的实现了作物供需水平衡。论文采用室内土箱模拟试验与室外蔬菜种植试验相结合的方法,探究了微润灌溉水肥一体化条件下不同施肥浓度与运筹对土壤水氮运移及蔬菜生长的影响。试验压力水头均设置为1.5m,室内试验与室外露天生菜种植试验设有施肥浓度梯度为0、200、400、600、800、1000mg/L的6组处理,而大棚番茄的种植试验设有施肥浓度200、200～400、400、400～800、800mg/L的5组处理。试验主要得出以下结论:(1)通过观测室内模拟试验中土壤湿润体的各项指标,发现在压力水头1.5m的条件下,随着施肥浓度的升高,土壤颗粒絮凝程度升高,土壤孔隙率增大,各处理累积入渗量越多、湿润锋运移越快、运移距离越远、土壤水氮含量越高。累积入渗量随时间以“S”型曲线增长,其拟合函数为一元二次函数,相关度均大于0.99,各处理入渗速率成直线下降;湿润锋轮廓近似为以微润管为中心的同心圆,且由于重力影响运移距离表现为:Y方向F3(400mg/L)>F5(800mg/L)>F2(200mg/L)>F1(0mg/L)>F6(1000mg/L)处理,微润灌溉1.5m水头下生菜种植的最佳施肥浓度在600mg/L左右,且施肥浓度达到1000mg/L时对生菜生长有抑制作用。各处理氮素含量随施肥浓度的增大而增大,氮素含量随生菜各生育期的需求而波动。

关键词：微润灌溉施肥浓度番茄生菜生长指标水氮运移

黄芪甲苷、丹参酮ⅡA及其配伍对周细胞Cx43及GJC的调节及对血管新生的影响

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黄芪甲苷、丹参酮ⅡA及其配伍对周细胞Cx43及GJC的调节及对血管新...

作者：孙廉旭中国人民解放军空军军医大学

学位级别：硕士

益气活血法是治疗缺血性心脏病的治疗大法,黄芪、丹参作为益气活血中药的代表在临床冠心病治疗过程中应用十分广泛。黄芪甲苷(astragaloside IV)、丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA)分别是黄芪和丹参的主要有效成分,研究揭示二者均具有抗氧化、... 详细信息

益气活血法是治疗缺血性心脏病的治疗大法,黄芪、丹参作为益气活血中药的代表在临床冠心病治疗过程中应用十分广泛。黄芪甲苷(astragaloside IV)、丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA)分别是黄芪和丹参的主要有效成分,研究揭示二者均具有抗氧化、抗炎、改善微循环和保护血管的作用。我们的前期研究表明黄芪甲苷和丹参酮ⅡA具有促进骨髓间充质干细胞向内皮细胞分化的作用,但新生血管的完整性和功能正常不仅仅取决于血管内皮细胞,周细胞(Pericyte PC)作为微血管重要组成部分同样有其重要作用,内皮细胞对周细胞的募集是微血管成熟的标志性现象,二者相互作用,共同形成完整的微血管管腔结构。微血管中周细胞与内皮细胞通过多种连接方式进行相互作用,形成并维持完整的血管结构,并通过细胞间隙连接(Gap junction GJ)对血管的生成及功能发挥调节作用。间隙连接通道(Gap junction channel GJC)由间隙连接蛋白(Connexin Cx)构成,允许小分子、离子、细胞信息和代谢物通过,使相邻细胞间进行直接通讯,并在组织发育、电偶联和维持组织内稳态等方面具有重要作用。因此,本研究旨在研究,黄芪甲苷和丹参酮ⅡA是否具有促进内皮细胞募集周细胞的功能及促进血管新生的作用,其作用是否通过调节周细胞Cx和GJC来实现。不仅为探讨益气活血中药促进血管新生的潜在作用机制,而且为探寻中药促进血管新生治疗发挥作用的潜在靶点提供实验依据。第一部分周细胞原代分离、培养及鉴定目的:探讨改良后SD大鼠肺微血管周细胞(PC)的分离、培养、鉴定方法,检测所获得的周细胞的功能,为下一步实验提供支持,奠定基础。方法:1)采用机械剪切、Ⅰ型胶原酶消化、微孔过滤结合超高速离心法分离获取微血管片段。2)应用含15%胎牛血清(Fetal bovine serum FBS)的DMEM高糖培养基进行培养。3)倒置显微镜观察原代PC的形态及生长特性。4)检测周细胞特异性标志物神经元-胶质抗原2(neuron-glial antigen 2,NG2),α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、结蛋白(desmin)、血小板源性生长因子受体β(PDGFR-β)的表达和内皮细胞相关抗原CD31的表达。5)CCK-8测定周细胞生长曲线6)周细胞-内皮细胞共培养成管实验检测周细胞功能结果:1)本改良方法获得纯度较高的,并能连续传代的微血管周细胞。2)周细胞48h自微血管片段爬出,呈长梭形、三角形等不规则形状,以长梭形多见,前期伴生少量内皮细胞,8-10d细胞汇合达传代要求,传代后细胞生长迅速。3)周细胞多为单核,偶见双核,核呈卵圆形,居于中央,胞质丰富。呈栅栏样或旋涡状生长,无接触抑制。4)所培养细胞表达周细胞特异性表面标志物α-SMA、NG2、desmin、PDGFR-β;内皮细胞表面标志物CD31阴性。5)周细胞与内皮细胞共培养可见血管出芽及管腔结构形成。结论:通过本改良方法成功获得纯度较高的周细胞,并表达周细胞特异性标志物,具备周细胞的特性和功能特征。第二部分黄芪甲苷、丹参酮ⅡA及其配伍调控Cx43及GJC促进血管新生作用研究目的:观察黄芪甲苷、丹参酮ⅡA及二者配伍对周细胞间隙连接蛋白43(Cx43)/细胞间隙连接通道(GJC)的影响,及其对内皮细胞募集周细胞的作用及毛细血管成管的作用,并进一步采用间隙连接通道阻滞剂Gap26明确其作用机制是否是通过Cx43/GJC来实现。方法:1)实验分组:取P代周细胞用于实验:设立空白对照组,黄芪甲苷组(As组),丹参酮ⅡA组(Ts组),配伍组(As+Ts组),Gap26组,Gap26+As组,Gap26+Ts组,Gap26+As+Ts组。分别给予黄芪甲苷(0.4μg/ml),丹参酮ⅡA(0.2μg/ml),配伍组(As 0.4μg/ml+Ts 0.2μg/ml),作用72h;Gap26组给予Gap26(500μM),作用18h;对于Gap26+As组,Gap26+Ts组,Gap26+As+Ts组,预先给予Gap26作用18h,后分别给与As、Ts、As+Ts继续干预72h,药物工作浓度同前。空白对照组给予等体积生理盐水干预。2)应用生理盐水、黄芪甲苷(0.4μg/ml)、丹参酮ⅡA(0.2μg/ml)、配伍组(As0.4μg/ml+Ts 0.2μg/ml)分别干预周细胞72h后。Q-PCR法检测PC的Cx43 mRNA表达。Western Blot法检测PC的Cx43蛋白表达。染料划痕实验检测细胞间隙连接通讯功能(GJIC)。Transwell检测周细胞迁移能力。PC与HUVEC共培养成管实验测定血管出芽和新生血管数量。3)Gap26组采用间隙连接阻断剂Gap26(500μM)干预PC 18h后,应用

关键词：黄芪甲苷丹参酮ⅡA 周细胞血管新生 GJC Cx43