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Rab21对破骨细胞分化的调控作用研究

Rab21对破骨细胞分化的调控作用研究

中华口腔医学会牙体牙髓病学专业委员会第十四次全国牙体牙...

作者：尉鹏功贺裕涵于雅琼仇丽鸿中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科

目的:Rab GTPases可参与质膜传递、融合,及溶酶体和自噬降解过程,从而调节细胞信号转导和细胞分化,Rab21是Rab GTPases家族成员之一,本实验旨在研究Rab21对破骨细胞分化和骨吸收的调控作用,及探索Rab21调节骨吸收的潜在机制。方法:*** B...

目的:Rab GTPases可参与质膜传递、融合,及溶酶体和自噬降解过程,从而调节细胞信号转导和细胞分化,Rab21是Rab GTPases家族成员之一,本实验旨在研究Rab21对破骨细胞分化和骨吸收的调控作用,及探索Rab21调节骨吸收的潜在机制。方法:*** Blot检测破骨细胞分化过程中Rab21的表达水平;2.在RAW-D细胞中过表达Rab21,TRAP染色检测破骨细胞分化水平;骨吸收试验检测破骨细胞骨吸收能力;Western Blot检测破骨细胞分化过程中,RANK、c-Fms、NFATc1、Src、CK表达水平及破骨细胞分化相关信号级联通路表达水平。3.激光共聚焦显微镜观察Rab21亚细胞定位。结果:1.在破骨细胞分化过程中,Rab21蛋白表达量升高2.过表达Rab21,破骨细胞分化水平降低,TRAP染色阳性破骨细胞降低80%以上,破骨细胞标志蛋白RANK、c-Fms、NFATc1、Src、CK表达水平显著降低;破骨细胞骨吸收能力降低,骨吸收面积降低85%以上;破骨细胞分化相关信号级联通路AKT、p38、JNK、IKBα、ERK磷酸化水平降低3.免疫荧光显示Rab21共定位于晚期内体、溶酶体、高尔基体、内质网。结论:***21可负向调控破骨细胞分化,抑制破骨细胞骨吸收;***21可抑制NFATc1上游信号级联通路AKT、p38、JNK、IKBα、ERK磷酸化水平,进而抑制破骨细胞分化;***21共定位于晚期内体、溶酶体、高尔基体、内质网,提示Rab21可能通过调控相应细胞器功能,参与调控破骨细胞骨吸收。

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miR-138-5p促进牙髓干细胞成牙本质向分化

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miR-138-5p促进牙髓干细胞成牙本质向分化

中华口腔医学会牙体牙髓病学专业委员会第十四次全国牙体牙...

作者：鄢晓媛尉鹏功郭佳杰仇丽鸿中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科

目的:通过检测miR-138-5p在牙髓干细胞(Dental Pulp Stem Cells,DPSCs)成牙本质向分化过程中表达量的变化以及敲减miR-138-5p对成牙分化标志物表达量的影响,探讨miR-138-5p在DPSCs成牙本质向分化中的作用,以期为临床中牙本质缺损的治疗...

目的:通过检测miR-138-5p在牙髓干细胞(Dental Pulp Stem Cells,DPSCs)成牙本质向分化过程中表达量的变化以及敲减miR-138-5p对成牙分化标志物表达量的影响,探讨miR-138-5p在DPSCs成牙本质向分化中的作用,以期为临床中牙本质缺损的治疗与修复提供参考。方法:使用成牙本质分化诱导培养液诱导DPSCs分化,检测诱导不同时长组(0、3、5、7、10、14天)的DSPP、DMP1、ALP mRNA表达量以确认诱导效果后,检测miR-138-5p表达量变化。转染敲减miR-138-5p以后,检测miR-138-5p表达量以验证转染效果,转染后分化诱导7天时检测DSPP、DMP1与ALP的mRNA表达量。结果:随着诱导时长增加,DPSCs的DSPP、DMP1与ALP表达量显著增高,证明DPSCs成牙本质向分化诱导成功。在DPSCs成牙本质向分化过程中,miR-138-5p表达量显著提高。转染组的miR-138-5p表达量较对照组显著降低,证明敲减成功。敲减miR-138-5p以后,DSPP、DMP1与ALP的mRNA表达量较未敲减组显著降低。结论:miR-138-5p对DPSCs成牙本质向分化具有促进作用。

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NRP1参与C3H10T1/2细胞的成脂向分化、成骨向分化和成软骨向分化

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NRP1参与C3H10T1/2细胞的成脂向分化、成骨向分化和成软骨向分化

中华口腔医学会牙体牙髓病学专业委员会第十四次全国牙体牙...

作者：于雅琼贺裕涵尉鹏功岗村裕彦仇丽鸿中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科日本冈山大学·口腔形态学研究室

目的:神经毡蛋白1 (NRP1)是一种多功能的膜蛋白,然而,它在间充质干细胞的成脂向分化、成骨向分化和成软骨向分化中的作用尚不明确。本研究中,我们探索了NRP1和其糖基化修饰在间充质干细胞C3H10T1/2向脂肪、骨和软骨分化中的作用。方法:...

目的:神经毡蛋白1 (NRP1)是一种多功能的膜蛋白,然而,它在间充质干细胞的成脂向分化、成骨向分化和成软骨向分化中的作用尚不明确。本研究中,我们探索了NRP1和其糖基化修饰在间充质干细胞C3H10T1/2向脂肪、骨和软骨分化中的作用。方法:诱导C3H10T1/2成脂向分化、成骨向分化和成软骨向分化。油红O染色检测脂滴形成,qRT-PCR和Western blot检测标志性分化基因或蛋白的表达。我们采用了siRNA和CRISPR-Cas9技术研究低表达的NRP1对各向分化的影响。为了研究NRP1和其糖基化修饰对成脂向分化的调控,我们过表达了野生型NRP1 (NRP1 WT)和糖基化位点突变型NRP1 (NRP1S612A)。结果:NRP1和其糖基化形式在C3H10T1/2成脂向分化、成骨向分化和成软骨向分化中表达上调。敲减和敲除NRP1抑制C3H10T1/2向脂肪、骨和软骨向分化。另外,在C3H10T1/2脂向分化过程中,NRP1可以与JIP4直接结合,引起短暂的Akt和ERK通路活化。我们进一步观察发现,NRP1的糖基化抑制了NRP1在成脂分化中的促进作用。结论:NRP1促进C3H10T1/2成脂向分化、成骨向分化和成软骨向分化。Akt和ERK介导NRP1和JIP4促进脂肪向分化的过程。糖基化修饰在成脂分化中是NRP1的负调控因子。

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ATF4调控的lncRNA Malat1结合JMJD3促进人牙髓干细胞成牙本质向分化的机制研究

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ATF4调控的lncRNA Malat1结合JMJD3促进人牙髓干细胞成牙本质向分...

中华口腔医学会牙体牙髓病学专业委员会第十四次全国牙体牙...

作者：喻施文杨谛郭佳杰尉鹏功鄢晓媛仇丽鸿中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科

目的:活化转录因子4 (ATF4)对多种生理或病理进程有重要作用,但其在hDPSCs成牙本质向分化过程中的作用尚未明确。研究表明lncRNA Malat1可正向调控hDPSCs成牙本质向分化,本研究旨在明确ATF4调控Malat1在hDPSCs成牙本质向分化中发挥的作...

目的:活化转录因子4 (ATF4)对多种生理或病理进程有重要作用,但其在hDPSCs成牙本质向分化过程中的作用尚未明确。研究表明lncRNA Malat1可正向调控hDPSCs成牙本质向分化,本研究旨在明确ATF4调控Malat1在hDPSCs成牙本质向分化中发挥的作用及具体机制。方法:(1)检测hDPSCs成牙本质向分化过程中ATF4和Malat1表达;分别沉默ATF4和Malat1,qRTPCR、Western blot和ALP染色分析其对分化功能的影响。(2) qRT-PCR检测沉默ATF4对Malat1影响,ChIP验证ATF4与Malat1启动子区结合。(3)沉默Malat1检测JMJD3基因、蛋白及酶活性水平,RIP分析Malat1与JMJD3的结合情况,ChIP探究Malat1对DSPP、DMP1启动子区组蛋白修饰的影响;同时沉默Malat1和过表达JMJD3,观察JMJD3对Malat1的分化功能拯救效果。结果:(1) hDPSCs成牙本质向分化过程中,ATF4和Malat1表达显著上调,且诱导分化后ATF4在hDPSCs核定位显著增强;沉默ATF4或Malat1明显下调DSPP、DMP1基因和蛋白表达水平。(2)沉默ATF4后Malat1表达量随之下调,ChIP进一步证实ATF4可与Malat1启动子区结合。(3) Malat1主要位于核内,沉默Malat1后JMJD3 mRNA水平无明显变化,但蛋白水平及酶活性显著降低;RIP证实Malat1可与JMJD3相结合,ChIP实验证明干扰Malat1会显著升高DSPP、DMP1启动子区H3K27me3水平;回复实验表明JMJD3过表达后部分逆转了Malat1对分化能力的抑制作用。结论:ATF4转录调控Malat1,Malat1通过结合JMJD3,增加JMJD3蛋白水平及酶活性,介导DSPP和DMP1启动子区H3K27me3脱甲基,增加DSPP和DMP1转录水平,进而发挥促进hDPSCs成牙本质向分化作用。

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纳米氧化锌表面修饰对羟基磷灰石晶须成骨诱导性的影响

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纳米氧化锌表面修饰对羟基磷灰石晶须成骨诱导性的影响

第十六次全国牙体牙髓病学学术大会

作者：尉鹏功张泽颖鄢晓媛邱秋劲王万锋仇丽鸿中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科辽宁省口腔医学疾病重点实验室

目的:拥有高长径比的羟基磷灰石晶须(HAw)具有提高基质材料力学性能的优势,但HAw的低成骨诱导性限制了其在骨缺损修复中的应用。本研究制备表面含纳米氧化锌颗粒的羟基磷灰石晶须(nano-ZnO/HAw),探索具有增强基质材料力学性能,同时兼备...

目的:拥有高长径比的羟基磷灰石晶须(HAw)具有提高基质材料力学性能的优势,但HAw的低成骨诱导性限制了其在骨缺损修复中的应用。本研究制备表面含纳米氧化锌颗粒的羟基磷灰石晶须(nano-ZnO/HAw),探索具有增强基质材料力学性能,同时兼备良好成骨诱导性的骨缺损修复材料。方法:检测nano-ZnO/HAw对基质材料抗压强度的影响;扫描电镜(SEM)观测HAw对成骨细胞形貌的影响,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验定量分析细胞膜完整性;对nano-ZnO/HAw在体外对成骨细胞分化、及体内大鼠股骨缺损修复的影响进行验证。结果:Nano-ZnO/HAw对基质材料的增强作用高于HAw。SEM可捕捉到HAw刺破成骨细胞。与HAw共培养的成骨细胞上清液中LDH含量显著升高,而5%和10%nano-ZnO颗粒表面修饰可降低HAw造成的细胞内LDH外泄。相比于HAw,与nano-ZnO/HAw共培养的成骨细胞的碱性磷酸酶活性及成骨向分化标志基因表达水平升高。同时,植入nano-ZnO/HAw骨缺损区的影像学密度、骨体积分数和新生骨组织量高于HAw组。结论:Nano-ZnO/HAw具有更好的增强基质材料抗压强度的性能;同时,nano-ZnO颗粒表面修饰降低HAw对成骨细胞的机械性损伤,提高HAw的成骨诱导性。

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miR-138-5p在微炎症环境中对人牙髓干细胞成牙本质向分化作用研究

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中国实用口腔科杂志 2023年第4期16卷 444-451页

作者：鄢晓媛张泽颖喻施文邱秋劲尉鹏功郭佳杰仇丽鸿中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科辽宁省口腔疾病重点实验室辽宁沈阳110002

目的研究miR-138-5p在微炎症环境对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)成牙本质向分化过程中的作用。方法研究于2021年5月至2022年3月在中国医科大学口腔医学院中心实验室进行。原代培养并分离细胞,通过流式细胞术检... 详细信息

目的研究miR-138-5p在微炎症环境对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)成牙本质向分化过程中的作用。方法研究于2021年5月至2022年3月在中国医科大学口腔医学院中心实验室进行。原代培养并分离细胞,通过流式细胞术检测细胞表面间充质干细胞表面标记分子CD29、CD105、CD146及造血干细胞表面标记分子CD14、CD45的细胞阳性率,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色鉴定是否为hDPSCs及其成骨分化能力。根据ALP染色结果确定提高h DPSCs ALP活性的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)有效质量浓度,按照hDPSCs培养条件的不同分为生长培养液(GM)组(仅使用GM培养)、成牙本质向分化诱导培养液(OM)组(仅使用OM培养)、OM+LPS组(使用含有效质量浓度LPS的OM培养)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组hDPSCs白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、成牙本质向分化相关指标[牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)]及miR-138-5p的表达差异。将上述3组分别分为敲减miRNA阴性对照小干扰RNA(以下简称“NC”)亚组及敲减miR-138-5p小干扰RNA(以下简称“i-138”)亚组,通过qRT-PCR检测各亚组的成牙本质向分化相关指标,以及通过ALP染色检测敲减miR-138-5p后对微炎症环境中hDPSCs成牙本质向分化的影响。结果分离出的原代细胞中表达间充质干细胞表面标记分子CD29、CD105的细胞阳性率超过95%,表达CD146的细胞阳性率超过30%,而表达造血干细胞表面标记分子CD14、CD45的细胞阳性率低于2%,且OM培养下细胞的ALP染色强于GM。ALP染色结果显示,含有0.01μg/mL质量浓度LPS的OM能有效促进hDPSCs成牙本质向分化。qRTPCR结果显示,OM+LPS组IL-6和TNF-α相对表达量均高于OM组,差异均有统计学意义(均P <0.001)。细胞培养7 d后,OM组DSPP、miR-138-5p相对表达量均显著高于GM组;细胞培养4、7 d后,OM组DMP1相对表达量显著高于GM组;细胞培养1、4、7 d后,OM+LPS组DSPP与DMP1相对表达量均显著高于OM组;细胞培养4、7 d后,OM+LPS组miR-138-5p相对表达量显著高于OM组,差异均有统计学意义(均P <0.001)。敲减miR-138-5p后,i-138 OM组和i-138 OM+LPS组分别与NC OM组和NC OM+LPS组相比,miR-138-5p、DSPP、DMP1相对表达量均减少,差异均有统计学意义(均P <0.001),且ALP染色强度均减弱。结论微炎症环境可促进hDPSCs的成牙本质向分化,miR-138-5p可能在此过程中对h DPSCs成牙本质向分化起促进作用。

关键词：微炎症微小RNA 人牙髓干细胞成牙本质向分化脂多糖

白藜芦醇通过上调SOCS-3蛋白抑制脂多糖诱导的成骨细胞表达MIP-2

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上海口腔医学 2021年第3期30卷 232-236页

作者：于雅琼尉鹏功李晓琳曲柳孙海燕仇丽鸿中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科辽宁省口腔医学疾病重点实验室牙体牙髓病学研究室辽宁沈阳110002

目的:探讨白藜芦醇是否依赖细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling-3,SOCS-3)蛋白发挥对牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)诱导成骨细胞产生巨噬细胞炎性蛋白2(macrophage inflammatory protein-2,MIP-2) mRNA的抑制作用。方法:以不同浓度的白藜芦醇(0、5、10和20μmol/L)诱导MC3T3-El细胞和以20μmol/L白藜芦醇作用于细胞不同时间(0、10、30、60、120和180 min)后,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SOCS-3蛋白的表达。SOCS-3的si RNA(si-SOCS-3)和对照si RNA(si-control)转染成骨细胞后,以实时反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测SOCS-3沉默效率;在有或无白藜芦醇预处理转染细胞1 h后,用20μg/mL P.e-LPS刺激MC3T3-E1细胞24 h,实时RT-PCR检测MIP-2 mRNA的变化。采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果:不同浓度白藜芦醇诱导MC3T3-El表达SOCS-3蛋白具有剂量依赖性;在所观察的180 min内,20μmol/L白藜芦醇作用成骨细胞60 min时,SOCS-3蛋白表达量最大。si-SOCS-3对SOCS-3 mRNA的沉默效率是63.7%,转染si-SOCS-3后,增加LPS诱导成骨细胞产生MIP-2 mRNA,并且削弱白藜芦醇对MIP-2 mRNA表达的抑制作用。结论:白藜芦醇通过上调SOCS-3蛋白,抑制P.e-LPS诱导成骨细胞表达的MIP-2 mRNA。

关键词：细胞因子信号转导抑制因子3 脂多糖成骨细胞巨噬细胞炎性蛋白2 白藜芦醇

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地中电偶极源极低频电磁场的分布与传播特征

地球物理学报 2024年第4期67卷 1527-1545页

作者：王桥唐新功胡文宝应急管理部国家自然灾害防治研究院北京100085 油气资源与勘探技术教育部重点实验室(长江大学) 武汉430100 中国地震局地球物理研究所北京100081 北京白家疃地球科学国家野外科学观测研究站北京100095

利用层状大地中偶极源响应的正演算法,计算地中电偶极源激发的极低频地震电磁场并分析其在地球环境下的传播特征.设计了多个水平层状地球模型,分别模拟和展示了深埋地中的电偶极源的响应和空间分布特征.重点分析了含地壳波导+LAI波导模... 详细信息

利用层状大地中偶极源响应的正演算法,计算地中电偶极源激发的极低频地震电磁场并分析其在地球环境下的传播特征.设计了多个水平层状地球模型,分别模拟和展示了深埋地中的电偶极源的响应和空间分布特征.重点分析了含地壳波导+LAI波导模型的高阻大地中,倾斜电偶极源激励响应随观测点的偏移距和垂直位置、激励源深度、地壳波导结构和参数变化时各场量响应的幅频特征.研究表明,用倾斜电偶极源模拟和分析高阻大地中孕震电磁辐射的响应及在大地电磁系统中的传播特性是可行的;模拟的高阻大地中的电磁辐射在地壳波导和LAI波导中均表现有慢衰减或幅值增强特性,但两个波导效应具有不同的频率选择性;高阻大地中的电磁辐射在波导的高阻介质中具有幅值强、衰减慢的特点.建议在高阻地层出露的地表、井中或海底的高阻岩层中以及大气层中布设测站.

关键词：层状模型地中电偶极源极低频电磁场传播特征岩石圈波导 LAI波导

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新型农村集体经济现代化发展探讨

中南民族大学学报(人文社会科学版) 2024年

作者：陈全功徐念中南民族大学经济学院

新型农村集体经济是一种有明确的经营主体、能够行使产权创造收入、经营管理,以“合”和“股”为主、利益按“股”分配的农村经济形态。我国新型农村集体经济市场主体初步建立,资产负债比有所下降,经营性收入占比有所上升,收支略有结余... 详细信息

新型农村集体经济是一种有明确的经营主体、能够行使产权创造收入、经营管理,以“合”和“股”为主、利益按“股”分配的农村经济形态。我国新型农村集体经济市场主体初步建立,资产负债比有所下降,经营性收入占比有所上升,收支略有结余,成员获得一定收益。新时代新征程中,新型农村集体经济现代化发展的要求是产权明晰、治理科学、经营稳健、分配合理和功能丰富。地方政府应把新型农村集体经济发展作为重要工作职责和任务,加大政策和资金支持力度,以推进其健康发展,并逐步实现现代化。

关键词：新型农村集体经济发展现状现代化