miR-138-5p在微炎症环境中对人牙髓干细胞成牙本质向分化作用研究

作     者：鄢晓媛 张泽颖 喻施文 邱秋劲 尉鹏功 郭佳杰 仇丽鸿 YAN Xiao-yuan;ZHANG Ze-ying;YU Shi-wen;QIU Qiu-jing;WEI Peng-gong;GUO Jia-jie;QIU Li-hong

作者机构：中国医科大学口腔医学院·附属口腔医院牙体牙髓病科辽宁省口腔疾病重点实验室辽宁沈阳110002 

出 版 物：《中国实用口腔科杂志》 (Chinese Journal of Practical Stomatology)

年 卷 期：2023年第16卷第4期

页      面：444-451页

学科分类：1003[医学-口腔医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(81870752) 

主　　题：微炎症 微小RNA 人牙髓干细胞 成牙本质向分化 脂多糖 

摘      要：目的 研究miR-138-5p在微炎症环境对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)成牙本质向分化过程中的作用。方法 研究于2021年5月至2022年3月在中国医科大学口腔医学院中心实验室进行。原代培养并分离细胞,通过流式细胞术检测细胞表面间充质干细胞表面标记分子CD29、CD105、CD146及造血干细胞表面标记分子CD14、CD45的细胞阳性率,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色鉴定是否为hDPSCs及其成骨分化能力。根据ALP染色结果确定提高h DPSCs ALP活性的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)有效质量浓度,按照hDPSCs培养条件的不同分为生长培养液(GM)组(仅使用GM培养)、成牙本质向分化诱导培养液(OM)组(仅使用OM培养)、OM+LPS组(使用含有效质量浓度LPS的OM培养)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组hDPSCs白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、成牙本质向分化相关指标[牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)]及miR-138-5p的表达差异。将上述3组分别分为敲减miRNA阴性对照小干扰RNA(以下简称“NC)亚组及敲减miR-138-5p小干扰RNA(以下简称“i-138)亚组,通过qRT-PCR检测各亚组的成牙本质向分化相关指标,以及通过ALP染色检测敲减miR-138-5p后对微炎症环境中hDPSCs成牙本质向分化的影响。结果 分离出的原代细胞中表达间充质干细胞表面标记分子CD29、CD105的细胞阳性率超过95%,表达CD146的细胞阳性率超过30%,而表达造血干细胞表面标记分子CD14、CD45的细胞阳性率低于2%,且OM培养下细胞的ALP染色强于GM。ALP染色结果显示,含有0.01μg/mL质量浓度LPS的OM能有效促进hDPSCs成牙本质向分化。qRTPCR结果显示,OM+LPS组IL-6和TNF-α相对表达量均高于OM组,差异均有统计学意义(均P 0.001)。细胞培养7 d后,OM组DSPP、miR-138-5p相对表达量均显著高于GM组;细胞培养4、7 d后,OM组DMP1相对表达量显著高于GM组;细胞培养1、4、7 d后,OM+LPS组DSPP与DMP1相对表达量均显著高于OM组;细胞培养4、7 d后,OM+LPS组miR-138-5p相对表达量显著高于OM组,差异均有统计学意义(均P 0.001)。敲减miR-138-5p后,i-138 OM组和i-138 OM+LPS组分别与NC OM组和NC OM+LPS组相比,miR-138-5p、DSPP、DMP1相对表达量均减少,差异均有统计学意义(均P 0.001),且ALP染色强度均减弱。结论 微炎症环境可促进hDPSCs的成牙本质向分化,miR-138-5p可能在此过程中对h DPSCs成牙本质向分化起促进作用。