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lncRNA-MSTRG.7889.1竞争性结合bta-miR-146a靶向Smad4调控牦牛颗粒细胞的凋亡

中国农业科学 2024年第4期57卷 797-809页

作者：孟朝轶王运路姚一龙席广银牛家强索朗斯珠郭敏徐业芬西藏农牧学院动物科学学院中国农业科学院深圳农业基因组研究所中国农业大学动物科学技术学院

【背景】卵泡颗粒细胞（Granulosa cells,GCs）凋亡是导致卵泡闭锁的重要原因，竞争性内源RNA(competing endogenous RNAs,ce RNA）机制已被证明参与调控GCs的凋亡过程。前期牦牛卵巢转录组测序发现lnc RNA-MSTRG.7889.1与bta-mi R-146... 详细信息

【背景】卵泡颗粒细胞（Granulosa cells,GCs）凋亡是导致卵泡闭锁的重要原因，竞争性内源RNA(competing endogenous RNAs,ce RNA）机制已被证明参与调控GCs的凋亡过程。前期牦牛卵巢转录组测序发现lnc RNA-MSTRG.7889.1与bta-mi R-146a具有结合位点，而bta-mi R-146a和Smad4存在靶向关系。【目的】通过探究影响牦牛卵泡GCs凋亡的ce RNA分子调控机制，为揭示牦牛生殖调控的奥秘奠定基础。【方法】采集和分离成年母牦牛的健康和闭锁卵泡，利用RT-q PCR法检测lnc RNA-MSTRG.7889.1、bta-mi R-146a和Smad4在卵泡中的表达。制作牦牛健康和闭锁卵泡组织切片，TUNEL检测健康卵泡和闭锁卵泡中GCs的凋亡情况；荧光原位杂交分析lnc RNA-MSTRG.7889.1、bta-mi R-146a和Smad4在卵泡中的定位。体外分离和培养牦牛GCs，分别转染Smad4过表达载体和bta-mi R-146a mimics，流式细胞术检测GCs细胞凋亡率，Western blot检测促凋亡蛋白CASPASE3和BAX，抑凋亡蛋白BCL-2的表达；GCs共转染Smad4过表达载体和bta-mi R-146a mimics后，探究bta-mi R-146a是否靶向Smad4影响牦牛GCs的凋亡。将lnc RNA-MSTRG.7889.1过表达慢病毒载体感染GCs，流式细胞术和Western blot检测lnc RNA-MSTRG.7889.1对GCs凋亡的影响；lnc RNA-MSTRG.7889.1载体和bta-mi R-146a mimics共转染GCs，进一步分析lnc RNA-MSTRG.7889.1是否竞争性结合bta-mi R-146a靶向Smad4影响牦牛GCs的凋亡。【结果】lnc RNA-MSTRG.7889.1和Smad4 m RNA在牦牛健康卵泡中的表达极显著高于闭锁卵泡（P<0.01），而bta-mi R-146a的表达则相反（P<0.01）。TUNEL检测结果显示，在闭锁卵泡中GCs的荧光强度极显著高于健康卵泡（P<0.01），说明闭锁卵泡中GCs凋亡显著高于健康卵泡。荧光原位杂交结果显示Smad4、bta-mi R-146a和lnc RNA-MSTRG.7889.1在牦牛卵泡中共表达，其在健康和闭锁卵泡中的表达与RT-q PCR结果基本一致，提示可能存在ce RNA机制参与牦牛健康卵泡发育和卵泡闭锁过程。在牦牛GCs过表达Smad4使细胞凋亡率显著降低（P<0.01),CASPASE3和BAX蛋白的表达显著降低（P<0.01),BCL-2蛋白的表达显著升高（P<0.01）；过表达bta-mi R-146a使GCs凋亡率显著升高（P<0.01),CASPASE3和BAX蛋白的表达显著升高（P<0.01),BCL-2蛋白的表达显著降低（P<0.01);bta-mi R-146a靶向抑制Smad4的表达（P<0.01);Smad4和bta-mi R-146a共转染GCs，结果显示bta-mi R-146a靶向抑制Smad4降低前者对GCs凋亡的促进作用（P<0.01）。过表达lnc RNA-MSTRG.7889.1使牦牛GCs凋亡率显著降低（P<0.01),CASPASE3和BAX蛋白的表达显著降低（P<0.01),BCL-2蛋白的表达显著升高（P<0.01);lnc RNA-MSTRG.7889.1显著抑制bta-mi R-146a的表达（P<0.01）。将lnc RNA-MSTRG.7889.1和bta-mi R-146a共转染GCs，结果表明lnc RNA-MSTRG.7889.1靶向bta-mi R-146a降低后者对GCs凋亡的促进作用（P<0.01）；而且RT-q PCR法和Western blot检测结果表明lnc RNA-MSTRG7889.1竞争性结合bta-mi R-146a促进Smad4 m RNA和蛋白水平的表达（P<0.01）。【结论】lnc RNA-MSTRG.7889.1竞争性结合bta-mi R-146a促进Smad4的表达抑制牦牛GCs的凋亡。

关键词： lncRNA bta-miR-146a 凋亡颗粒细胞牦牛开放科学(资源服务)标识码(OSID):

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牦牛bta-miR-146a对卵巢卵泡颗粒细胞自噬的影响研究

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高原农业 2024年第4期8卷 367-375页

作者：徐业芬王运路孟朝轶刘博华昝瑞隆西藏农牧学院动物科学学院西藏高原动物疫病研究自治区高校重点实验室西藏林芝860000

自噬是细胞广泛存在的程序性死亡机制,通过对细胞内衰老细胞器、长寿命蛋白以及外源病原微生物进行吞噬、降解,以维持细胞平衡。在卵巢中,卵泡颗粒细胞自噬对卵泡发育起着关键作用,失衡会导致闭锁。为探究miR-106a对牦牛卵泡颗粒细胞自... 详细信息

自噬是细胞广泛存在的程序性死亡机制,通过对细胞内衰老细胞器、长寿命蛋白以及外源病原微生物进行吞噬、降解,以维持细胞平衡。在卵巢中,卵泡颗粒细胞自噬对卵泡发育起着关键作用,失衡会导致闭锁。为探究miR-106a对牦牛卵泡颗粒细胞自噬的影响,本试验通过体外分离培养牦牛卵泡颗粒细胞后,分别转染bta-miR-146a模拟物(bta-miR-146a mimics)和bta-miR-146a抑制剂(bta-miR-146a inhibitor),利用荧光定量RT-PCR法、Western Blot和激光共聚焦法检测细胞的自噬相关基因mRNA和蛋白表达情况。结果显示,转染bta-miR-146a mimic组与mimic NC组相比激光共聚焦可检测到LC3B蛋白荧光强度降低(P<0.01);荧光定量RT-PCR检测发现LC3B、Atg-5和Beclin-1自噬指示基因mRNA表达量均极显著降低(P<0.01);bta-miR-146a inhibitor组与bta-miR-146a inhibitor NC组相比LC3B、Atg-5和Beclin-1极显著升高(P<0.01),bta-miR-146a mimic组与bta-miR-146a inhibitor组相比,LC3B、Atg-5和Beclin-1自噬指示基因m RNA表达量极显著降低(P<0.01)。Western Blot检测发现bta-miR-146a inhibitor组自噬指示蛋白LC3B、Atg-5和Beclin-1表达最高,bta-miR-146a mimic组表达最低;bta-miR-146a mimic组与bta-miR-146a mimic NC组相比,LC3B、Atg-5和Beclin-1蛋白表达极显著降低(P<0.01),bta-miR-146a inhibitor组与bta-miR-146a inhibitor NC相比LC3B、Atg-5和Beclin-1蛋白表达极显著升高(P<0.01),bta-miR-146a mimic组与bta-miR-146a inhibitor组相比,自噬指示蛋白LC3B、Atg-5和Beclin-1的表达量极显著降低(P<0.01)。上述结果表明bta-miR-146a mimic抑制牦牛卵泡颗粒细胞的自噬,而bta-miR-146a inhibitor促进牦牛卵泡颗粒细胞的自噬。

关键词：牦牛 bta-miR-146a 颗粒细胞自噬

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细菌LPS影响lncRNA竞争性结合bta-miR-146a靶向Smad4调控牦牛GCs凋亡的机制研究

细菌LPS影响lncRNA竞争性结合bta-miR-146a靶向Smad4调控牦牛GCs...

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作者：孟朝轶西藏农牧学院

学位级别：硕士

在西藏地区牦牛大肠杆菌病的发病率较高,细菌脂多糖（Lipopolysacc haride,LPS）作为非特异性免疫原,影响生殖系统的功能。卵泡闭锁是卵巢中的正常生理现象,颗粒细胞（Granulosa cell,GCs）凋亡是导致卵泡闭锁的主要原因。在竞争内源性... 详细信息

在西藏地区牦牛大肠杆菌病的发病率较高,细菌脂多糖（Lipopolysacc haride,LPS）作为非特异性免疫原,影响生殖系统的功能。卵泡闭锁是卵巢中的正常生理现象,颗粒细胞（Granulosa cell,GCs）凋亡是导致卵泡闭锁的主要原因。在竞争内源性RNA（competing endogenous RNAs,ce RN A）机制中,长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）可竞争性结合微小RNA（micro RNA,miRNA）以达到调节功能基因m RNA水平的目的。已有研究表明,牦牛Smad4是bta-miR-146a的靶基因,但是对其ce RNA机制尚不清楚。本研究拟筛选出可能与bta-miR-146a竞争性结合的ln c RNA,进一步探究LPS是否影响ce RNA网络调控GCs凋亡的机制。本研究可以完善和发展动物繁殖活动的分泌调控机制,尤其对革兰氏阴性菌LP S引起的牦牛繁殖障碍性疾病的治疗具有重要意义。结果如下:1.采集和分离成年母牦牛的健康和闭锁卵泡,利用高通量测序平台Hi Seq Xten进行转录组测序分析其差异表达的lncRNAs,结果显示牦牛健康卵泡与闭锁卵泡相比上调的lncRNA数为330个,下调的lncRNA数为352个,利用RNAhybrid在线软件进行序列分析,发现lnc-MSTR G.7889和bta-miR-146a存在紧密结合位点。RT-PCR检测结果表明lnc-MSTRG.7889和Smad4基因m RNA在牦牛健康卵泡中的表达量显著高于闭锁卵泡（P<0.05）;而bta-miR-146a的表达则相反（P<0.01）。利用TUNEL法对牦牛卵巢组织进行细胞凋亡检测,结果显示闭锁卵泡细胞的凋亡率极显著高于健康卵泡（P<0.01）,说明闭锁卵泡与GCs凋亡具有相关性。进一步在牦牛卵巢组织中进行荧光原位杂交检测,结果发现Smad4基因m RNA、bta-miR-146a和lnc-MSTRG.7889在牦牛健康和闭锁卵泡中均共表达,且结果与RT-PCR检测三者在健康和闭锁卵泡中的表达趋势基本一致,表明lnc-MSTRG.7889、bta-miR-146a和Smad4基因可能存在ce RNA网络分子调控机制参与卵泡闭锁过程的调节,且与卵泡GCs凋亡相关。2.利用细胞筛法分离和培养牦牛卵泡GCs,采用10μg/m L浓度的LPS处理GCs,利用流式细胞术检测GCs的凋亡率,Western blot分别检测促凋亡蛋白（CASPASE3和BAX）和抑凋亡蛋白（BCL-2）的表达,结果表明LPS能显著促进GCs的凋亡（P<0.01）。在GCs中转染分别bta-miR-146a mimics和bta-miR-146a inhibitors,结果表明bta-miR-146a抑制GCs中Smad4基因的表达。分别将bta-miR-146a mimics和Smad4过表达载体转染GCs再经LPS处理后,结果表明Smad4可极显著抑制牦牛GCs的凋亡（P<0.01）,而LPS减弱Smad4对卵泡GCs凋亡的抑制作用（P<0.01）;bta-miR-146a促进牦牛GCs的凋亡（P<0.01）,而LPS增强bta-miR-146a对卵泡GCs的凋亡的促进作用（P<0.01）;GCs共转染Smad4过表达载体和bta-miR-146a mimics再经LPS处理后,发现bta-miR-146a通过抑制Smad4表达极显著降低其对凋亡的抑制作用（P<0.01）,而在LPS处理的GCs中过表达Smad4能抑制bta-miR-146a对细胞凋亡的促进作用（P<0.01）。上述结果表明:LPS影响bta-miR-146a靶向Smad4抑制GCs的凋亡。3.利用慢病毒载体构建技术构建lnc-MSTRG.7889慢病毒过表达载体,q PCR技术检测其感染293T细胞的感染效率,试验结果表明:由牦牛卵泡中成功扩增出lnc-MSTRG.7889的全长序列2 566 bp,将其与LV-EF1a-EG FP-2A载体成功构建了重组质粒,经慢病毒包装系统包装和浓缩构建慢病毒载体,结果显示该lnc-MSTRG.7889慢病毒的滴度为7.32×10～8TU·m L,对牦牛卵泡GCs的感染效率为（52.93±1.12）%。（1）将该lncRNA慢病毒感染牦牛卵泡GCs经LPS处理后,检测结果表明lnc-MSTRG.7889显著抑制GCs的凋亡（P<0.01）;LPS抑制lnc-MSTRG.7889显著促进GCs的凋亡（P<0.01）。（2）将lncRNA过表达慢病毒载体感染牦牛GCs后,结果发现lnc-MSTRG.7889靶向抑制bta-miR-146a的表达。将lncRNA慢病毒和bta-miR-146a mi

关键词：脂多糖 lncRNA bta-miR-146a 颗粒细胞凋亡

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Sora驱动下的融合出版新技术新业态新模式分析

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中国编辑 2024年第4期 29-36页

作者：张新新孟轶上海理工大学出版学院数字文明研究院

在阐释Sora的技术指征和视频生成大模型对时空创建、模拟和复刻现实世界的强大能力的基础上,以融合出版为研究对象,从不同视角分析Sora驱动下的出版虚实融合自动构建、多模态融合呈现、全媒体营销等数智新技术供给能力,推测网络出版的... 详细信息

在阐释Sora的技术指征和视频生成大模型对时空创建、模拟和复刻现实世界的强大能力的基础上,以融合出版为研究对象,从不同视角分析Sora驱动下的出版虚实融合自动构建、多模态融合呈现、全媒体营销等数智新技术供给能力,推测网络出版的影视延伸、有声读物的视频转向、AR/VR出版物的提质增效、元宇宙出版的全域赋能以及生成式智能出版的升维发展等融合出版新业态趋势,提出数智赋能新模式之于出版业数据化转型、生成式智能技术应用以及融合出版编辑培养三个方面的积极作用。

关键词： Sora 文生视频大模型生成式人工智能智能出版数据出版出版新质生产力出版深度融合发展

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牦牛lncRNA ENSBGRT00000000387.1慢病毒载体构建及其对卵泡GCs凋亡的影响

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畜牧兽医学报 2023年第3期54卷 1058-1070页

作者：孟朝轶王运路徐业芬牛家强索朗斯珠郭敏席广银西藏农牧学院动物科学学院林芝860000 中国农业大学动物科学技术学院北京100193

旨在构建牦牛lncRNA ENSBGRT00000000387.1过表达慢病毒载体,并将其感染牦牛卵泡颗粒细胞(granulosa cells,GCs),了解它对细胞凋亡的影响。本研究提取牦牛卵泡RNA,以RT-PCR技术扩增lncRNA ENSBGRT00000000387.1全长序列,而后构建其重组... 详细信息

旨在构建牦牛lncRNA ENSBGRT00000000387.1过表达慢病毒载体,并将其感染牦牛卵泡颗粒细胞(granulosa cells,GCs),了解它对细胞凋亡的影响。本研究提取牦牛卵泡RNA,以RT-PCR技术扩增lncRNA ENSBGRT00000000387.1全长序列,而后构建其重组质粒,并以慢病毒包装系统(pVSVG:pMDL:pRev)包装后利用qPCR法测定在293T细胞上的感染滴度,再感染分离培养的牦牛GCs,以qPCR检测GCs中lncRNA ENSBGRT00000000387.1的表达水平,并以流式细胞仪检测GCs的凋亡率,以Western blot和qPCR分别检测促凋亡基因CASPASE3、BAX和抑凋亡基因BCL-2的mRNA和蛋白表达水平。结果显示,由牦牛卵泡中成功扩增出lncRNA ENSBGRT00000000387.1的全长2566 bp序列,将其与LV-EF1a-EGFP-2A载体同源区的片段同源重组,经酶切鉴定及测序验证表明成功构建了重组质粒,将之经慢病毒包装系统包装和浓缩后,在293T细胞的感染效率达(75.77±0.850)%,qPCR测定结果显示该慢病毒滴度为7.32×10^(8)TU·mL^(-1),表明目的lncRNA过表达慢病毒载体成功构建;以该慢病毒感染牦牛卵泡GCs的感染效率达(52.93±1.168)%,qPCR结果显示感染GCs中目的lncRNA表达水平显著升高(P<0.01);流式细胞仪检测发现慢病毒感染组细胞凋亡率显著下降(P<0.01),促凋亡基因CASPASE3和BAX在mRNA和蛋白水平的表达量显著降低(P<0.01),而抑凋亡基因BCL-2表达量显著升高(P<0.01)。本试验成功构建了lncRNA ENSBGRT00000000387.1慢病毒载体,成功感染牦牛卵泡GCs后发现其具有抑制细胞凋亡的作用,说明其可能在牦牛卵泡功能中发挥作用。

关键词： lncRNA 慢病毒载体颗粒细胞凋亡牦牛

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转染miR-106a对牦牛卵泡颗粒细胞增殖和激素分泌的影响

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中国兽医杂志 2023年第3期59卷 46-50页

作者：孟朝轶王玉恒徐业芬王运路罗浩月郭慧李惠侠西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 西藏自治区兽医生物药品制造厂西藏拉萨850004 南京农业大学动物科技学院江苏南京210014

为探究miR-106a对牦牛卵泡颗粒细胞(GCs)增殖和激素分泌的影响,本试验通过体外分离培养牦牛卵泡GCs,分别转染miR-106a模拟物(miR-106a mimics)和miR-106a抑制剂(miR-106a inhibitors),利用CCK-8法检测GCs细胞增殖,ELISA法分别检测雌二醇(E_2)和孕酮(P_4)激素分泌情况。结果显示,与对照组相比,24、48、72和96 h时,miR-106a mimics组和miR-106a inhibitors组牦牛GCs的细胞增殖受到极显著抑制(P<0.01)。与对照组相比,GCs转染48 h时,miR-106a mimics组E_2分泌量极显著升高,而miR-106a inhibitors组E_2分泌量极显著降低(P<0.01);GCs转染72 h时,miR-106a mimics组和miR-106a inhibitors组E_2分泌量均极显著降低(P<0.01);GCs转染48 h时,miR-106a mimics组和miR-106a inhibitors组P_4分泌量均极显著降低(P<0.01);而GCs转染72 h时则结果相反,miR-106a mimics组和miR-106a inhibitors组P_4分泌量均极显著升高(P<0.01)。结果表明,miR-106a转染牦牛GCs后对细胞增殖和激素分泌具有影响,为其在卵巢卵泡中的研究提供了数据支持。

关键词： miR-106a 颗粒细胞增殖激素牦牛

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青年网络粉丝社群的公共价值和思想引领

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青少年学刊 2024年第2期 18-24页

作者：史帅孟轶上海理工大学出版印刷与艺术设计学院上海200000

以青年群体为主体、追星娱乐为诉求、各类社交应用为媒介的网络粉丝社群不断实现破圈传播,在公共议题参与和爱国集体行动中成为一支重要力量。青年群体普遍面临着自由度提高与归属感缺乏的双重生存境遇,他们试图构建想象的共同体来重新... 详细信息

以青年群体为主体、追星娱乐为诉求、各类社交应用为媒介的网络粉丝社群不断实现破圈传播,在公共议题参与和爱国集体行动中成为一支重要力量。青年群体普遍面临着自由度提高与归属感缺乏的双重生存境遇,他们试图构建想象的共同体来重新回归“聚落”,进而通过参与式文化生产与互动仪式不断强化群体认同。青年网络粉丝社群呈现较强的自组织特性,其在组织结构和组织话语上具有显著的特点,通过提纯情感价值、营造共在场景、共创符合话语有利于进一步加强对该社群的思想引领。

关键词：青年粉丝网络社群粉丝文化

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基于满足多边界条件基函数的微分求积法及其应用

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东南大学学报（自然科学版） 2024年第1期54卷 149-155页

作者：汤轶群李振岳东南大学土木工程学院南京211189

提出了一种由基函数来处理梁边界条件的改进微分求积法(MDQM).在构造挠度函数时,通过多次积分来满足梁的所有边界条件,进而利用此函数计算微分求积法中的加权系数矩阵,解决了通过多项式测试函数计算该系数矩阵时难以在同一个点运用多个... 详细信息

提出了一种由基函数来处理梁边界条件的改进微分求积法(MDQM).在构造挠度函数时,通过多次积分来满足梁的所有边界条件,进而利用此函数计算微分求积法中的加权系数矩阵,解决了通过多项式测试函数计算该系数矩阵时难以在同一个点运用多个边界条件的问题.为了研究该方法在梁的各类分析中的应用,首先构造了2类梁在各种边界条件下对应的挠度基函数,再根据Euler-Bernoulli梁振动理论和稳定性理论,基于微分求积法将计算梁的固有频率问题和临界荷载问题转化为求解矩阵特征值的问题,并将结果与精确解进行比较.此外,还根据理想弹塑性梁的平面弯曲理论,利用该方法计算了梁在各种边界条件下的弹塑性位移,并将结果与其他方法对比.结果表明,所提方法对于梁的稳定性分析、固有频率分析及弹塑性分析都具有较高的计算效率和精度.

关键词：微分求积法 Euler-Bernoulli梁固有频率临界屈曲荷载弹塑性

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自主创新VS.技术外取:考虑研发能力的绿色供应链研发策略与合同设计

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中国管理科学 2024年

作者：孙嘉轶龙琦滕春贤哈尔滨理工大学经济与管理学院

循环经济下，绿色技术创新是制造企业走向绿色可持续发展的重要途径。本文考虑一个由下游零售商主导且上下游合作的绿色创新供应链，基于收益共享合同，构建制造商自主创新、模仿创新和合作创新下的三种研发模型，分析制造商研发能力对... 详细信息

循环经济下，绿色技术创新是制造企业走向绿色可持续发展的重要途径。本文考虑一个由下游零售商主导且上下游合作的绿色创新供应链，基于收益共享合同，构建制造商自主创新、模仿创新和合作创新下的三种研发模型，分析制造商研发能力对绿色创新决策的影响，对比三种模型得到不同研发效率下制造商的最优研发方式。最后，进一步考虑零售商分担制造商的研发成本以及制造商公平关切行为，扩展现有模型。研究表明：制造商初始研发能力和吸收能力的提升有利于增加研发努力投入，提高收益共享比例，但会降低零售商的营销积极性；自主创新情形下，零售商营销努力最大，制造商研发努力最小，不同研发情形下制造商最大研发努力与技术溢出效应有关；当制造商研发效率较高时，模仿创新或合作创新为最优研发方式，当研发效率较低时，最优研发方式取决于外部成本；零售商分担研发成本和制造商公平关切行为均有利于制造商的研发活动，但后者会损害零售商以及绿色供应链创新绩效。

关键词：绿色创新研发能力研发方式激励合同

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马克思哲学思想视阈下的高校教育新模式——评《新时代马克思哲学研究》

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当代电影 2024年第2期 I0004-I0005页

作者：石秋轶浙江大学哲学学院

马克思哲学,作为19世纪中期重要的哲学思想,以其深刻的唯物辩证法和历史唯物主义观念,为我们认知社会、推动社会变革提供了深刻而系统的理论基础。“在马克思的著作中,我们找到了理论和实践之间相互联系的纽带,也找到了引领社会进步的... 详细信息

马克思哲学,作为19世纪中期重要的哲学思想,以其深刻的唯物辩证法和历史唯物主义观念,为我们认知社会、推动社会变革提供了深刻而系统的理论基础。“在马克思的著作中,我们找到了理论和实践之间相互联系的纽带,也找到了引领社会进步的钥匙。”在当代社会,随着中国特色社会主义事业的不断深入发展,对于高校教育模式的探索和创新显得尤为重要。与此同时,我们应当以马克思哲学为视阈,审视高校教育的新模式,以更好地引领教育体系的发展。《新时代马克思哲学研究》是一本具有鲜明特色的哲学著作,作者彭劲松力图通过对马克思哲学的系统阐释。

关键词：教育新模式引领社会马克思哲学思想哲学著作高校教育模式视阈下唯物辩证法 19世纪中期

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