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基于主成分分析的温室白萝卜水氮耦合效应

江苏农业科学 2024年第5期52卷 159-165页

作者：孙世宇范海燕刘洪禄周慧北京市水科学技术研究院北京100048 河海大学农业科学与工程学院江苏南京210098 北京市非常规水资源开发利用与节水工程技术研究中心北京100048

为探究不同水氮处理对温室白萝卜的影响,设置3个灌溉水平100%ET0(W1)、85%ET0(W2)、70%ET0(W3)和3个施氮水平240(N1)、204(N2)、168 kg/hm^(2)(N3),观测不同水氮措施下白萝卜叶片叶绿素含量、果实品质、耗水量、产量、水分生产效率和氮... 详细信息

为探究不同水氮处理对温室白萝卜的影响,设置3个灌溉水平100%ET0(W1)、85%ET0(W2)、70%ET0(W3)和3个施氮水平240(N1)、204(N2)、168 kg/hm^(2)(N3),观测不同水氮措施下白萝卜叶片叶绿素含量、果实品质、耗水量、产量、水分生产效率和氮肥偏生产力的变化规律,基于主成分分析法对温室白萝卜进行综合指标评价。结果表明:灌溉对温室白萝卜叶片叶绿素含量呈极显著相关,施氮和水氮交互效应对其影响未达到显著水平,W3N3处理下叶绿素含量增长最显著;灌溉对温室白萝卜干物质含量和水分利用效率的影响达显著水平,对其余品质指标、产量和氮肥偏生产力的影响不显著;施氮和水氮交互作用对温室白萝卜氮肥偏生产力影响达到显著水平,对品质指标、产量和水分利用效率影响不显著,W1N3处理下温室白萝卜的产量和氮肥偏生产力最大,较其他处理产量提高3.75%~22.13%,氮肥偏生产力提高7.25%~74.48%;各个处理全生育期耗水量范围为208.6~292.4 mm,作物系数值范围为1.12~1.68。通过主成分分析综合指标评价,9个处理的评价得分排序为W1N3>W2N3>W2N2>W2N1>W3N3>W3N2>W1N2>W1N1>W3N1。综上,W1N3处理组合(100%ET0灌水量和168 kg/hm^(2)施氮量)是温室白萝卜的最优水氮处理。

关键词：温室白萝卜水分生产效率氮肥偏生产力产量主成分分析

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猪流感病毒通用型微滴式数字RT-PCR绝对定量检测方法的建立

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中国动物检疫 2024年第4期41卷 84-90页

作者：兰德松顾贵波孙世宇杨洺扬魏澍辽宁省农业发展服务中心辽宁沈阳110164

为建立灵敏且可绝对定量检测猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)的微滴式数字RT-PCR(ddRT-PCR)方法,以SIV M基因的保守序列为靶基因,设计并合成一套特异性引物和TaqMan探针,建立了可对主要流行的H1N1、H1N2和H3N2亚型SIV绝对定量检... 详细信息

为建立灵敏且可绝对定量检测猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)的微滴式数字RT-PCR(ddRT-PCR)方法,以SIV M基因的保守序列为靶基因,设计并合成一套特异性引物和TaqMan探针,建立了可对主要流行的H1N1、H1N2和H3N2亚型SIV绝对定量检测的通用型ddRT-PCR方法。随后,对该方法的敏感性、特异性和重复性进行评价,并利用临床猪鼻咽拭子样品进行检测验证。结果显示:建立的ddRT-PCR方法检测限达到1.6 copies/µL,灵敏度极高;能特异性检出H1N1、H1N2和H3N2亚型SIV,与猪瘟病毒等其他常见猪病病原均无交叉反应;重复检测结果的批内和批间变异系数(CV)分别为0.75%、3.17%,重复性良好;经临床样品检测验证,建立的ddRT-PCR和荧光RT-qPCR方法分别检出阳性样品72、66份,提示前者在检测低病毒拷贝样品时较荧光RT-qPCR更优。结果表明,本研究建立的SIV通用型ddRT-PCR方法灵敏度高,特异性和重复性均良好,且在检测低病毒含量临床样本时更具优势,可作为一种对SIV感染进行早期诊断和绝对定量检测的有效方法。

关键词：猪流感病毒微滴式数字RT-PCR 通用型绝对定量检测

再生水灌溉对土壤中痕量有机污染物分布的影响

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北京水务 2024年第1期 61-67页

作者：周慧刘洪禄范海燕孙世宇张君莹河海大学江苏南京211100 北京市水科学技术研究院北京100048 北京市非常规水资源开发利用与节水工程技术研究中心北京100048 中国农业大学北京100083

为探究再生水灌溉对土壤中有机污染物分布和含量的影响,以芹菜为研究对象,通过设置清水(CK)、再生水(T1)和清水-再生水交替灌溉(T2)等3种灌水处理,开展灌溉试验。经监测芹菜不同生育期、不同土层深度下4种典型污染物即多环芳烃PAHs、邻... 详细信息

为探究再生水灌溉对土壤中有机污染物分布和含量的影响,以芹菜为研究对象,通过设置清水(CK)、再生水(T1)和清水-再生水交替灌溉(T2)等3种灌水处理,开展灌溉试验。经监测芹菜不同生育期、不同土层深度下4种典型污染物即多环芳烃PAHs、邻苯二甲酸酯PAEs、酚类、药物及个人护理物PPCPs的含量变化发现:不同灌溉水质处理条件下,不同深度土壤中PAHs、PAEs、酚类、药品与PPCPs含量分别为169.60~737.23、1953.76~8659.76、24.03~125.99、37.30~96.10μg/kg。与清水灌溉相比,芹菜不同生育期再生水灌溉会引起土壤表层有机污染物含量的轻微上升,但对深层土壤无明显影响。从有机污染物组成来看,土壤样品中PAHs、PAEs、酚类和PPCPs的主要组分分别为菲和苯并(k)莹蒽、邻苯二甲酸二丁酯DBP和邻苯二甲酸二甲酯DMP、双酚A、盐酸普萘洛尔,此研究成果可为再生水利用提供参考。

关键词：再生水灌溉有机污染物土壤芹菜

臂丛神经阻滞对行肩关节镜手术患者应激反应的影响

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局解手术学杂志 2024年第3期33卷 251-254页

作者：胡姝婧唐娟娟左真文孙世宇复旦大学附属上海市第五人民医院麻醉科上海200240 上海市松江区泗泾医院麻醉科上海200240 同济大学附属上海市第十人民医院麻醉科上海200072

目的探究臂丛神经阻滞对行肩关节镜手术患者应激反应的影响。方法选取复旦大学附属上海市第五人民医院2021年12月至2022年12月150例行肩关节镜手术的肩关节炎患者作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组75例。对照组... 详细信息

目的探究臂丛神经阻滞对行肩关节镜手术患者应激反应的影响。方法选取复旦大学附属上海市第五人民医院2021年12月至2022年12月150例行肩关节镜手术的肩关节炎患者作为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组75例。对照组患者采用全身麻醉,观察组患者在对照组基础上采用臂丛神经阻滞。比较2组患者术前(T0)、手术10 min(T1)、手术30 min(T2)、手术结束时(T3)、拔管30 min后(T4)的平均动脉压(MAP)、心率(HR)、去甲肾上腺素(NE)、皮质醇(Cor);比较2组患者术前和术后3 d的转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白(CRP);比较2组患者术后清醒时与术后6、12、24 h的视觉模拟量表(VAS)评分。结果与T0时相比,观察组和对照组患者T1、T2、T3、T4时的MAP、HR水平均显著降低(P<0.01),NE、Cor水平均显著升高(P<0.01),且观察组患者T1、T2、T3、T4时的MAP、HR、NE、Cor水平均显著低于对照组(P<0.01);观察组和对照组患者术后3 d TGF-β1、TNF-α、CRP水平均较术前显著升高(P<0.01),但观察组患者术后上述指标显著低于对照组(P<0.01);观察组患者术后清醒时与术后6、12、24 h的VAS评分均显著低于对照组(P<0.01)。结论超声引导下肌间沟入路臂丛神经阻滞可以确保行肩关节镜手术中肩关节炎患者的生命体征稳定,减轻疼痛,减少应激,降低炎症反应。

关键词：臂丛神经阻滞肩关节镜手术应激水平炎症反应

迷人杜鹃花色呈色关键结构基因的筛选及功能解析

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迷人杜鹃花色呈色关键结构基因的筛选及功能解析

作者：孙世宇贵州师范大学

学位级别：硕士

迷人杜鹃(Rhododendron agastum)为杜鹃花科杜鹃花属常绿杜鹃亚属的灌木或小乔木,主要分布在贵州东部,是百里杜鹃重要的建群种和优势种之一,花大而鲜艳,极具观赏价值。同时,迷人杜鹃花色粉红,富含花色苷,是一种值得研究的天然色素资源,... 详细信息

迷人杜鹃(Rhododendron agastum)为杜鹃花科杜鹃花属常绿杜鹃亚属的灌木或小乔木,主要分布在贵州东部,是百里杜鹃重要的建群种和优势种之一,花大而鲜艳,极具观赏价值。同时,迷人杜鹃花色粉红,富含花色苷,是一种值得研究的天然色素资源,在食品工业中具有一定的开发应用价值。花色是观赏植物的重要性状之一,主要由类胡萝卜素、甜菜碱和类黄酮三类色素决定。研究显示,决定迷人杜鹃花色的主要物质为花色苷,它可以赋予植物粉色、红色、紫色等色调,对花、果实等组织的成色尤为重要,可以极大地提高花朵的观赏价值与果实的口感和风味。在花色苷生物合成途径中,二氢黄酮醇4-还原酶(Dihydroflavonol4-reductase,DFR)位于途径中间,可将三种二氢黄酮醇催化还原为对应的无色花青素,由于其对三种二氢黄酮醇的选择性催化,使其在决定植物花色苷种类上发挥重要作用;而类黄酮3-O-葡萄糖基转移酶(Flavonoid 3-O-glucosyltransferase,3GT)则位于该途径下游,使花青素经糖基化形成花色苷,在增强花青素稳定性、水溶性和可转运性方面作用关键,直接影响植物色泽的呈现。本研究首先对迷人杜鹃(粉色)与露珠杜鹃(白色)花朵进行了花色苷种类与含量的测定,明确迷人杜鹃开花过程中花色苷含量变化规律,同时在完成二者花朵转录组测序分析的基础上,通过花色苷变化规律与基因表达量之间的相关性分析筛选获得2条调控迷人杜鹃花色呈色的关键基因(Ra DFR1与Ra3GT2),并对其进行功能鉴定。研究结果如下:1.迷人杜鹃花色呈色关键结构基因的筛选首先对迷人杜鹃与露珠杜鹃花朵中的花色苷进行定性分析,结果显示在迷人杜鹃花朵中共检测到7种花色苷,而露珠杜鹃中没检测到花色苷;随后将迷人杜鹃花朵发育过程分为4个时期,通过外标准曲线法完成其花朵发育过程中总花色苷的定量分析,发现伴随迷人杜鹃花的开放,总花色苷的积累水平逐渐降低。根据花色苷定性定量分析结果,初步确定迷人杜鹃花朵中花色苷代谢途径,并与转录组测序结果相结合,通过基因表达量与总花色苷含量变化的相关性分析,筛选到Ra DFR1与Ra3GT2两条调控迷人杜鹃花色呈色的关键结构基因。2.Ra DFR1、Ra3GT2的克隆及生物信息学分析利用RT-PCR方法成功克隆得到Ra DFR1 c DNA序列,而Ra3GT2的转录组测得序列5’端较短,无法设计引物进行克隆,故送公司合成。Ra DFR1和Ra3GT2的开放阅读框长度分别为1035 bp、1395 bp,编码344、464个氨基酸,预测蛋白大小分别为38.34 k Da、50.31 k Da。Ra DFR1和Ra3GT2均为亲水性蛋白且无信号肽。在Ra DFR1的N端有高度保守的NADPH结合位点以及底物结合区,系统进化树显示其与Nt DFR亲缘关系较近;Ra3GT2属于糖基转移酶GT-B超家族,含有糖基转移酶家族特有的PSPG保守结构域,具有两个糖基转移酶的催化活性位点,与马缨杜鹃Rd3GT1的亲缘关系最近。3.Ra DFR1、Ra3GT2真核表达载体的构建及遗传转化以p BI121作为过表达载体,构建Ra DFR1、Ra3GT2的过表达重组子并将其转化至农杆菌GV3101中,分别侵染拟南芥tt3和ugt78d2突变体。结果显示,Ra DFR1、Ra3GT2均可恢复突变体花色苷的合成。为验证两个基因对花色形成的影响,将其在烟草中进行过表达。结果显示,转基因烟草花瓣颜色均有不同程度的加深,同时过表达Ra3GT2烟草花瓣中的花色苷由原来的2种增加至3种,表明这两个基因均具有调控花色苷合成的功能,可以用于植物花色的改良。4.Ra DFR1、Ra3GT2原核表达载体的构建及体外酶活检测成功构建原核表达载体p ET32a(+)-Ra DFR1、p ET32a(+)-Ra3GT2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,制备获得重组蛋白并进行酶活检测。结果显示,Ra DFR1可催化二氢槲皮素、二氢杨梅素生成相应的产物,不具备催化二氢山奈酚的功能,表明其对底物的特异性选择可能是迷人杜鹃中检测不到天竺葵素类花色苷的直接原因。Ra3GT2以UDP-半乳糖为糖基供体时可催化天竺葵色素、矢车菊色素、飞燕草色素、芍药色素、矮牵牛花色素和锦葵色素生成相应的糖苷;以UDP-葡萄糖为糖基供体时则只可催化矢车菊色素、飞燕草色素、锦葵色素生成相应的糖苷。Ra3GT2重组蛋白不能以UDP-阿拉伯糖和UDP-鼠李糖作为糖基供体进行糖基化反应;同时,Ra3GT2还可以UDP-半乳糖、UDP-葡萄糖为糖基供体催化槲皮素、杨梅素以及山奈酚生成相应的糖苷。催化效率分析显示,Ra3GT2无论催化花色素还是黄酮醇,以UDP-半乳糖为糖基供体的催化效率均高于UDP-葡萄糖为糖基供体;所以,Ra3GT2对底物的偏好性直接影响迷人杜鹃花朵中花色苷的多样性。

关键词：迷人杜鹃二氢黄酮醇4-还原酶类黄酮3-O-葡萄糖基转移酶遗传转化体外酶活分析

新型冠状病毒DNA候选疫苗构建及小鼠免疫评价

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新型冠状病毒DNA候选疫苗构建及小鼠免疫评价

作者：孙世宇广西大学

学位级别：硕士

新型冠状病毒（Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2）作为呼吸道新发病原体,可引起人新型冠状病毒肺炎,具有较高的传染性和一定的致死率。新型冠状病毒肺炎引发的疫情对全球公众健康构成了严重威胁,目前迫切... 详细信息

新型冠状病毒（Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2）作为呼吸道新发病原体,可引起人新型冠状病毒肺炎,具有较高的传染性和一定的致死率。新型冠状病毒肺炎引发的疫情对全球公众健康构成了严重威胁,目前迫切需要安全有效的疫苗来实现群体免疫,预防和控制SARS-CoV-2进一步传播。DNA疫苗可同时诱导细胞和体液免疫应答,具有成本低、操作简单等优点。针对SARS-CoV-2刺突蛋白（spike protein,S蛋白）和RBD蛋白的中和抗体可阻断RBD蛋白与其受体结合,从而防止病毒侵入,是SARS-CoV-2疫苗设计的理想靶点。本研究拟针对SARS-CoV-2主要保护性抗原RBD蛋白及多表位抗原基因,构建2种SARS-CoV-2重组DNA候选疫苗,通过小鼠免疫试验评价2种疫苗的免疫效果。RBD重组蛋白多克隆抗体制备:为验证2种SARS-CoV-2 DNA候选疫苗的体外表达,以重组RBD蛋白作为免疫原,与弗氏佐剂乳化后免疫BALB/c小鼠,制备针对RBD蛋白的多克隆抗体。3免4天后收集血清,使用新型冠状病毒小鼠ELISA检测试剂盒对小鼠血清进行抗体效价测定,结果表明针对RBD重组蛋白的特异性IgG抗体效价可达1:409600以上。经Western Blot验证表明,制备的RBD重组蛋白多克隆抗体可与RBD重组蛋白发生特异性结合,且条带单一,大小正确。SARS-CoV-2重组DNA候选疫苗构建及鉴定:获取已报道的SARS-CoV-2 S、N、M和E蛋白的部分T、B细胞表位,将表位之间加入接头序列（Linker）进行串联,获得表位串联体基因,命名为EPI;加入Linker,与RBD基因进行串联获得RBD-EPI基因。针对人密码子偏好性,对RBD和RBD-EPI基因进行优化与合成,连接pVAX1载体后成功构建pVAX-RBD和pVAX-RBD-EPI 2种重组质粒。使用制备的重组RBD蛋白多克隆抗体作为一抗,将pVAX-RBD和pVAX-RBD-EPI 2种重组质粒转染BHK-21细胞,进行体外表达验证。通过Western Blot验证表明,pVAX-RBD和pVAX-RBD-EPI 2种重组质粒在体外均得到很好的表达,且条带单一,大小正确。SARS-CoV-2重组DNA候选疫苗小鼠免疫评价:为评估pVAX-RBD和pVAX-RBD-EPI 2种DNA疫苗的免疫效果,将2种DNA疫苗联合PIKCA佐剂免疫BALB/c小鼠,同时设定pVAX-RBD-EPI单独免疫组、pVAX1联合PIKCA和PBS对照组。3免后14天,pVAX-RBD和pVAX-RBD-EPI联合PIKCA佐剂免疫组,针对SARS-CoV-2 RBD蛋白的特异性IgG抗体平均效价可达为1:17200和1:14933,pVAX-RBD联合PIKCA佐剂免疫组针对SARS-CoV-2假病毒的中和抗体平均效价可达1:75;pVAX-RBD-EPI单独免疫组、pVAX1联合PIKCA和PBS对照组均未检测到特异性抗体和中和抗体。结果表明2种DNA疫苗联合PIKCA佐剂免疫小鼠后,可产生很好的体液免疫反应,PIKCA佐剂对2种DNA疫苗均有明显的免疫增强效果。胞内细胞因子检测结果表明,2种DNA疫苗联合PIKCA佐剂免疫小鼠后产生的CD3+CD8+IFN-γ表达水平分别是PBS对照组的2.70倍和3.31倍,与对照组PBS相比,差异均显著;胞内细胞因子CD3+CD4+IFN-γ、CD3+CD8+IL-4和CD3+CD8+IL-4的表达与对照组相比,有一定升高,差异不显著。结果表明,2种DNA疫苗联合PIKCA佐剂免疫小鼠后,可产生细胞免疫反应,主要诱导针对SARS-CoV-2的Th1型特异性CD8+T细胞免疫反应。综上所述,本研究成功构建pVAX-RBD和pVAX-RBD-EPI 2种DNA候选疫苗,2种DNA候选疫苗联合PIKCA佐剂免疫小鼠后可产生很好的体液和细胞免疫效果。本研究结果为SARS-CoV-2疫苗的进一步研究提供技术参考。

关键词：新型冠状病毒受体结合域蛋白抗原表位免疫原性

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脑内不受阿片耐受影响的胆碱能镇痛环路

中国疼痛医学杂志 2024年第5期30卷 321-324页

作者： Sullere S Kunczt A McGehee DS 陆屹(译) 孙世宇(译) 周国坤(译) 刘通(校) 不详南通大学特种医学研究院

慢性疼痛对病人自身和社会都是一种沉重的负担。尽管阿片类药物可以有效地缓解疼痛,但其显著的不良反应限制了临床应用。为寻找新的疼痛调控机制,该研究探讨了腹外侧导水管周围灰质(ventrolateral periaqueductal gray,vlPAG)中的胆碱... 详细信息

慢性疼痛对病人自身和社会都是一种沉重的负担。尽管阿片类药物可以有效地缓解疼痛,但其显著的不良反应限制了临床应用。为寻找新的疼痛调控机制,该研究探讨了腹外侧导水管周围灰质(ventrolateral periaqueductal gray,vlPAG)中的胆碱能信号在下行疼痛调控中的作用。慢性疼痛状态下vlPAG中乙酰胆碱的释放减少。在阿片耐受的情况下,脑桥脚被盖核至vlPAG的胆碱能投射环路的激活仍可通过α7烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,nAChRs)来缓解疼痛。激活α7 nAChRs或刺激内源性乙酰胆碱释放,能够通过Ca2+以及过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferatoractivated receptorα,PPARα)依赖的信号抑制vlPAG神经元的活动。在体双光子成像显示,慢性疼痛诱发vlPAG神经元集群的异常兴奋,且α7 nAChRs介导的神经元抑制在阿片耐受状态下仍具有镇痛作用。靶向该胆碱能环路机制缓解疼痛与阿片耐受、奖赏或戒断症状无关,从而凸显了其潜在的临床意义。

关键词：阿片耐受阿片类药物过氧化物酶体增殖物激活受体α 缓解疼痛导水管周围灰质慢性疼痛胆碱能戒断症状

马缨杜鹃查尔酮异构酶(RdCHI1)重组蛋白的制备及功能验证

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福建农业学报 2023年第5期38卷 574-582页

作者：王聿晗孙世宇鞠志刚孙威徐小蓉贵州师范大学生命科学学院/植物生理与发育调控重点实验室贵州贵阳550025 贵州中医药大学药学院贵州贵阳550025 西南喀斯特山地生物多样性保护重点实验室贵州贵阳550025

【目的】制备马缨杜鹃(Rhododendron delavayi)查尔酮异构酶(Chalcone isomerase,CHI)基因表达的重组蛋白并验证其活性,为解析查尔酮异构酶功能提供理论依据,为改良植物花色、增加药用成分奠定基础。【方法】根据所获得的马缨杜鹃查尔... 详细信息

【目的】制备马缨杜鹃(Rhododendron delavayi)查尔酮异构酶(Chalcone isomerase,CHI)基因表达的重组蛋白并验证其活性,为解析查尔酮异构酶功能提供理论依据,为改良植物花色、增加药用成分奠定基础。【方法】根据所获得的马缨杜鹃查尔酮异构酶RdCHI1基因的序列信息设计引物,构建其原核表达载体,优化RdCHI1可溶性重组蛋白最佳诱导表达条件,制备可溶性重组蛋白并检测其活性。【结果】成功构建RdCHI1原核表达载体,RdCHI1重组蛋白可在上清中表达,最佳诱导条件为:15℃、36 h,IPTG浓度0.35 mmol·L^(-1)。经镍柱纯化得到质量较好的RdCHI1重组蛋白,通过体外酶活反应确定,与对照组相比,RdCHI1可以更快地催化柚皮素查尔酮(Naringenin chalcone)反应生成柚皮素(Naringenin)。【结论】RdCHI1为I型CHI,可极大提高柚皮素查尔酮生成柚皮素的速率,增加黄酮类物质积累量。

关键词：马缨杜鹃查尔酮异构酶原核表达载体可溶性重组蛋白酶活测定

“一带一路”沿线国投资风险评估研究——以新加坡等六国为例

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科技经济市场 2023年第1期 61-64页

作者：孙世宇王桂玲山东管理学院经贸学院山东济南253700

“一带一路”沿线国的投资风险情况会直接影响我国的对外投资结构,由于沿线国家的政治制度不同,政治环境复杂;经济发展处于不同的经济周期,经济发展水平不一;民族文化复杂,民族冲突不断。尤其是近年来受到新型冠状病毒性肺炎疫情的影响... 详细信息

“一带一路”沿线国的投资风险情况会直接影响我国的对外投资结构,由于沿线国家的政治制度不同,政治环境复杂;经济发展处于不同的经济周期,经济发展水平不一;民族文化复杂,民族冲突不断。尤其是近年来受到新型冠状病毒性肺炎疫情的影响,国际经济大环境低迷。因此,有必要研究“一带一路”沿线国的投资风险。文章主要研究中国与东道国的经济发展状况、地理位置成本、劳动生产率等因素与我国对外投资水平之间的联系。

关键词： “一带一路”倡议投资风险风险评估