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HPV E7与子宫颈上皮内瘤样病变细胞DNA损伤应答的相关性研究

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四川大学学报（医学版） 2016年第6期47卷 837-842页

作者：曹寒雨王小军唐子执楼江燕四川大学华西第二医院妇产科成都610041 四川大学华西第二医院西部妇幼研究院基因组稳定性实验室成都610041 出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室(四川大学) 成都610041

目的通过原代培养HPV阳性的宫颈上皮内瘤变Ⅲ度（CINⅢ）的成纤维细胞与HPV阴性的小儿包皮成纤维细胞,探索HPV E7在DNA损伤应答过程中的作用。方法选取临床病理确认为HPV16阳性的CINⅢ新鲜宫颈组织和HPV16阴性的小儿包皮组织,组织块... 详细信息

目的通过原代培养HPV阳性的宫颈上皮内瘤变Ⅲ度（CINⅢ）的成纤维细胞与HPV阴性的小儿包皮成纤维细胞,探索HPV E7在DNA损伤应答过程中的作用。方法选取临床病理确认为HPV16阳性的CINⅢ新鲜宫颈组织和HPV16阴性的小儿包皮组织,组织块经胶原酶A消化后培养,用慢病毒E7或pLV感染HPV16-成纤维细胞,用离子射线（X光,2Gy或5Gy）分别照射HPV16阴性与HPV16阳性细胞以及经pLV或E7慢病毒感染的细胞0-8h,诱导细胞DNA双链断裂,采用间接免疫荧光法检测DNA双链断裂应答相关蛋白53BP1、BRCA1、NBS1、RPA32的应答特征。结果成功从宫颈上皮内瘤变组织及小儿包皮组织原代培养出HPV16阳性及HPV16阴性的成纤维细胞。间接免疫荧光染色发现X光照射后,HPV16阳性细胞中53BP1、BRCA1、NBS1、RPA32灶点多于HPV16阴性细胞（P〈0.05）,E7感染细胞中53BP1、RPA32、NBS1灶点少于pLV感染细胞（P〈0.05）,均为6h（2Gy）或4h（5Gy）达峰。结论利用原代培养CIN成纤维细胞成功建立了研究DNA损伤中E7作用的模型,在宫颈癌前病变发展过程中,HPV E7能够抑制DNA双链断裂修复应答反应。

关键词： E7 原代细胞培养 DNA损伤

水稻RBX1基因cDNA的分离及其过量表达载体对水稻的转化

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应用与环境生物学报 2008年第3期14卷 337-340页

作者：薛颖黄维藻卓婷唐子执牛向丽刘永胜四川大学生命科学学院成都610065

RBX1蛋白是基于Cullin蛋白的E3复合体中的一个亚基,对于基于Cullin蛋白的E3复合体结合E2及Cullin蛋白的活化具有重要作用.利用RT-PCR分离到水稻RBX1cDNA,序列比对分析显示,水稻RBX1与拟南芥、人、果蝇及酵母中该同源蛋白的氨基酸序列一... 详细信息

RBX1蛋白是基于Cullin蛋白的E3复合体中的一个亚基,对于基于Cullin蛋白的E3复合体结合E2及Cullin蛋白的活化具有重要作用.利用RT-PCR分离到水稻RBX1cDNA,序列比对分析显示,水稻RBX1与拟南芥、人、果蝇及酵母中该同源蛋白的氨基酸序列一致性分别为80%、74·4%、72%和51·2%.酵母双杂交实验显示,水稻RBX1与水稻Cullin4蛋白有着相互作用.将水稻RBX1cDNA插入植物表达质粒pHB,利用农杆菌介导法将构建好的植物表达载体导入水稻,获得植株38株.以基因组DNA为模板对潮霉素抗性基因片段进行扩增,初步确定其中32株为转基因植株.

关键词： RBX1cDNA 序列比对酵母双杂交实验水稻转化

DNA损伤应答靶向抑制剂对卵巢癌细胞的化疗增敏作用

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四川大学学报（医学版） 2016年第3期47卷 316-320,336页

作者：蔡思源唐子执曾鸣王小军楼江燕刘聪陈杰四川大学华西第二医院妇产科成都610041 四川大学出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室成都610041

目的观察DNA损伤应答抑制剂及其联合常规化疗药物(顺铂等)在卵巢癌耐药细胞株OVCAR-8中的作用,研究其化疗致敏效应。方法利用针对DNA损伤应答关键信号蛋白质的抑制剂,与顺铂等连用处理卵巢癌细胞,分析这些药物处理方式对卵巢癌细胞的杀... 详细信息

目的观察DNA损伤应答抑制剂及其联合常规化疗药物(顺铂等)在卵巢癌耐药细胞株OVCAR-8中的作用,研究其化疗致敏效应。方法利用针对DNA损伤应答关键信号蛋白质的抑制剂,与顺铂等连用处理卵巢癌细胞,分析这些药物处理方式对卵巢癌细胞的杀伤能力。MTT法检测不同药物作用后OVCAR-8的增殖抑制情况;免疫荧光法检测OVCAR-8中磷酸化组蛋白2A变体(γH2AX)和p53结合蛋白1(53BP1)的表达,观察二者在DNA损伤位点的募集和形成灶点的能力。结果毛细血管扩张共济失调突变蛋白(ATM)/ATM和Rad 3相关蛋白(ATR)抑制剂与顺铂联用能抑制损伤修复机制的活化,明显减弱OVCAR-8细胞的增殖活力(P0.05)。结论适当的DNA损伤应答抑制剂有潜力提高常规化疗药物的抗肿瘤效果,以达到快速清除肿瘤细胞和防止产生耐药性的效果。

关键词：卵巢肿瘤顺铂耐药 DNA损伤应答抑制剂

HCV NS3/4A基因外来表达对Huh7细胞凋亡及DNA损伤应答的影响

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中国细胞生物学学报 2014年第8期36卷 1110-1115页

作者：任来峰唐子执吴惠文许宁刘刚曾鸣郭莲娣山西医科大学汾阳学院医学检验系汾阳032200 山西省汾阳医院肿瘤科汾阳032200 四川大学华西第二医院发育与干细胞研究所成都610041

NS3/4A是丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)编码的丝氨酸蛋白酶复合体,是病毒完成自身复制周期的必要成分。该研究为调查NS3/4A对细胞凋亡及DNA损伤应答(DNA-damage response,DDR)的影响,在Huh7细胞中表达了外来NS3/4A基因。通过DAP... 详细信息

NS3/4A是丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)编码的丝氨酸蛋白酶复合体,是病毒完成自身复制周期的必要成分。该研究为调查NS3/4A对细胞凋亡及DNA损伤应答(DNA-damage response,DDR)的影响,在Huh7细胞中表达了外来NS3/4A基因。通过DAPI染色和MTT分析显示,外来表达NS3/4A显著诱导细胞的凋亡和增殖活力的下降。免疫荧光检测结果表明,NS3/4A可明显增加细胞内源性DNA双链断裂(double strand breaks,DSBs)损伤(γH2AX灶点升高);而进一步用X-ray诱导细胞外源性DSBs损伤后,外来表达NS3/4A的细胞显示出明显的DSBs损伤修复缺陷(减缓的γH2AX灶点消退)。免疫印迹法检测结果显示,NS3/4A可抑制喜树碱(Camptothecin,CPT)诱导的ATM第1 981位丝氨酸的磷酸化(pATM1 981)。以上结果提示,NS3/4A基因外来表达可引起细胞DNA损伤,抑制ATM介导的DSBs损伤修复信号,诱导细胞凋亡通路的活化。

关键词： DNA损伤丙型肝炎病毒 DNA双链断裂非结构蛋白3 4A

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DNA双链断裂修复的选择性调控机制

生命科学 2014年第11期26卷 1172-1175页

作者：唐子执刘聪曾鸣四川大学华西第二医院成都610041

在各种DNA损伤中,DNA双链断裂(double-strand break,DSB)是最为严重的一种,快速准确地修复DSB对维持基因组稳定性起着至关重要的作用。真核生物细胞通过一系列复杂的信号转导途径激活对DSB的修复,其中最为重要的是同源重组和非同源末端... 详细信息

在各种DNA损伤中,DNA双链断裂(double-strand break,DSB)是最为严重的一种,快速准确地修复DSB对维持基因组稳定性起着至关重要的作用。真核生物细胞通过一系列复杂的信号转导途径激活对DSB的修复,其中最为重要的是同源重组和非同源末端连接机制。最近的研究表明,这两种方式在DSB修复的早期是相互竞争的关系,其选择在很大程度上受到53BP1及同源蛋白质的调控。将讨论53BP1作为DSB修复途径的核心因子,在染色质水平整合BRCA1、Ct IP等修复因子和多种组蛋白修饰构成的信号途径,介导同源重组和非同源末端连接通路选择的分子机制。

关键词： DNA双链断裂 53BP1 同源重组非同源末端连接

DNA损伤修复因子WDR70的生物学功能及其在人卵巢癌中的突变研究

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四川大学学报（医学版） 2016年第4期47卷 501-506页

作者：郭莲娣王丹杨帆梁语珈杨雪琴覃意扬任来峰曾鸣唐子执王小军王思刘聪楼江燕陈杰西南民族大学成都610041 山西医科大学汾阳学院汾阳032200 四川大学华西第二医院妇产科成都610041

目的在细胞水平上分析新发现的DNA损伤修复因子WDR70的生物学功能,确定WDR70基因在人卵巢癌中的突变发生情况,以验证该基因的功能丢失是否与卵巢癌关联。方法在人细胞中用siRNA干扰WDR70基因表达,或用慢病毒和质粒过表达WDR70的野生型... 详细信息

目的在细胞水平上分析新发现的DNA损伤修复因子WDR70的生物学功能,确定WDR70基因在人卵巢癌中的突变发生情况,以验证该基因的功能丢失是否与卵巢癌关联。方法在人细胞中用siRNA干扰WDR70基因表达,或用慢病毒和质粒过表达WDR70的野生型和突变体,通过免疫印迹和免疫荧光等方法研究该基因在DNA损伤后的亚细胞定位和DNA损伤信号通路中的作用;此外,抽提1例正常卵巢组织和16例卵巢癌标本的mRNA进行半定量RT-PCR扩增,对这些标本中的WDR70基因进行测序分析。结果 WDR70基因沉默和过表达其突变体导致同源重组功能蛋白——DNA复制蛋白A(RPA32)磷酸化修饰水平降低和重组酶——重组蛋白A(RAD51)向DNA损伤位点招募的能力减低;WDR70的功能障碍还导致染色体的断裂增多;同时,卵巢癌样本中发现多例WDR70突变型别。结论在体外系统中,WDR70参与DNA损伤修复过程,沉默或过表达其突变体将导致同源重组修复缺陷和染色体结构的不稳定;在卵巢癌基因组中,WDR70基因频繁出现突变,可能导致相应的DNA修复缺陷和基因组不稳定性的发生。因此,WDR70是一个潜在的卵巢癌抗癌基因。

关键词： DNA损伤应答卵巢癌 WDR70

乙型肝炎病毒抑制肝细胞免疫检查点PD-1配体基因表达的研究

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重庆医学 2017年第27期46卷 3752-3754,3758页

作者：郭莲娣王丹唐子执曾鸣王小军刘聪李友伟西南民族大学药学院成都610041 四川大学华西第二医院成都610041 四川省德阳市人民医院肝胆外科 618000

目的在细胞水平上分析乙型肝炎病毒(HBV)复制及其编码的X基因(HBx)表达对细胞基因表达谱的影响,特别是免疫相关基因表达水平的变化。方法通过慢病毒和pcDNA瞬时转染过表达HBx基因,利用RNA-Seq和RT-qPCR等方法检测免疫相关基因的表达水平... 详细信息

目的在细胞水平上分析乙型肝炎病毒(HBV)复制及其编码的X基因(HBx)表达对细胞基因表达谱的影响,特别是免疫相关基因表达水平的变化。方法通过慢病毒和pcDNA瞬时转染过表达HBx基因,利用RNA-Seq和RT-qPCR等方法检测免疫相关基因的表达水平,并在HBV复制细胞系中进行验证。结果 HBV复制和HBx表达可以剂量依赖性抑制免疫检查点程序性死亡分子1(PD-1)配体基因(PD-L1/CD274)的表达,而HBx基因的H-box突变体的表达失去该抑制效应。结论HBV/HBx具有抑制PD-L1/CD274基因表达的能力,在病毒感染的急性期解除抗原特异性T细胞激活的检查点,活化细胞毒性T细胞,这可能导致T细胞对高度复制的细胞进行攻击和清除,帮助病毒进入较低复制状态,达到病毒-宿主的平衡状态并奠定HBV慢性感染的基础。

关键词：肝炎病毒,乙型 HBx 免疫检查点 PD-L1/CD274

走向可持续更新：英国城市更新法规体系演进脉络、逻辑和启示

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自然资源学报 2025年第1期 58-73页

作者：林赛南唐萧萧武汉大学城市设计学院湖北省人居环境工程技术研究中心

城市更新作为中国存量转型时期的重要战略，需要完整的法规体系支撑更新行动的有序开展。英国城市更新有较长的历史进程，能够为中国提供镜鉴。基于历史制度主义理论框架，参考英国政府官方网站发布的第一手资料，对20世纪60年代以来英... 详细信息

城市更新作为中国存量转型时期的重要战略，需要完整的法规体系支撑更新行动的有序开展。英国城市更新有较长的历史进程，能够为中国提供镜鉴。基于历史制度主义理论框架，参考英国政府官方网站发布的第一手资料，对20世纪60年代以来英国城市更新法规体系的历史脉络进行了梳理，剖析其变迁背后的结构、历史、行动者逻辑。最后立足中国发展目标，提出完善城市更新体系的建议：完善“主干法+配套法”的更新法律体系，将可持续发展纳入政策顶层设计，更新模式转向“有为政府，多方参与”，鼓励以社区为核心的可持续微更新。与英国相比，中国在制度、公共利益和资金模式等方面具有特殊性，吸收国际经验，对完善和创新面向可持续更新的法规体系具有重要意义。

关键词：城市更新城市更新法规英国国际经验历史制度主义可持续更新

重述与赓续:近十年国产动画电影的叙事范式探析

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当代文坛 2025年第1期 140-145页

作者：石竹青任子钰辽宁师范大学影视艺术学院

中国动画艺术诞生之始,便肩负着描绘时代风貌、传递民族情感的重要使命。其特有的想象力,使作品具有能穿越时空的鲜活艺术形态。中国动画的叙事策略决定着动画作品的质量与形态。置身于当下的创作语境,动画从业者们通过对文本与形象、... 详细信息

中国动画艺术诞生之始,便肩负着描绘时代风貌、传递民族情感的重要使命。其特有的想象力,使作品具有能穿越时空的鲜活艺术形态。中国动画的叙事策略决定着动画作品的质量与形态。置身于当下的创作语境,动画从业者们通过对文本与形象、空间及精神价值的创造性续写再述中国故事,其影像表达独具中国美学元素与意境生成,以及烛照历史与现实的伦理与哲思,实现了人生观、价值观乃至世界观的叙事呈现。如何坚守动画艺术的本真与纯粹,勇于探索形式与风格融合的新境界,成为动画创作者们面临的重要课题。

关键词：国产动画文本改编叙事空间时代精神

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