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岷江百合灰霉菌诱导咖啡酸-O-甲基转移酶（LrCOMT）基因克隆与功能分析

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岷江百合灰霉菌诱导咖啡酸-O-甲基转移酶（LrCOMT）基因克隆与功...

作者：刘萱重庆三峡学院

学位级别：硕士

百合是集药赏食作用于一体的重要花卉植物,作为目前销量最高的五大鲜切花之一,具有较高的经济价值。由于灰霉病的严重侵染,严重影响百合生产销售,造成巨大的经济损失。岷江百合作为一种野生百合资源,因其对干旱、真菌和病毒的良好抗性... 详细信息

百合是集药赏食作用于一体的重要花卉植物,作为目前销量最高的五大鲜切花之一,具有较高的经济价值。由于灰霉病的严重侵染,严重影响百合生产销售,造成巨大的经济损失。岷江百合作为一种野生百合资源,因其对干旱、真菌和病毒的良好抗性而闻名,它的抗逆基因也继而被关注并运用到培育抗病新品种的研究中。目前,关于岷江百合抗病基因的克隆与功能表达分析的研究报道相对较少,特别是在木质素生物合成途径中涉及的抗灰霉病相关基因。本研究利用灰霉菌孢子侵染岷江百合叶片并进行转录组测序,筛选克隆获得差异表达的LrCOMT1和LrCOMT2基因,通过生物信息学分析、亚细胞定位、q RT-PCR、RT-PCR、构建过表达载体和反义表达载体、拟南芥遗传转化、百合叶片瞬时转化以及木质素含量测定等方式对其表达和功能进行初步分析,通过定量分析LrCOMT1和LrCOMT2过表达对木质素生物合成途径及SA/Me JA抗病信号通路标志基因的表达情况,从而阐明岷江百合LrCOMT1和LrCOMT2基因在灰霉菌应答过程中的生物学功能并初步探究其作用机制。主要研究结果如下:1.LrCOMT1和LrCOMT2蛋白结构均以无规则卷曲为主,占比分别为67.64%和63.23%。三级结构分析中,LrCOMT1蛋白以序列同一性为38.17%的（S）-去甲乌药碱6-O-甲基转移酶为模板进行同源建模,LrCOMT2蛋白以序列同一性为54.44%的O-甲基转移酶为模板,并均以2聚体结构形式发挥蛋白功能。保守结构域预测显示LrCOMT1蛋白含保守结构域dimerization2 super family和Ado Met＿MTases super family,LrCOMT2蛋白于含保守结构域dimerization和Ado Met＿MTases super family。2.通过多序列比对和进化树分析发现,LrCOMT1基因不仅与COMT家族相关,还与At ASMT1基因的进化过程相近,而LrCOMT2基因与COMT家族以及At COMT1的进化关系相近;同时通过荧光定量分析发现岷江百合LrCOMT1和LrCOMT2基因在灰霉菌孢子处理4 h后的表达水平显著上升;由此推测LrCOMT1基因和LrCOMT2基因均可能通过木质素生物合成途径抵御灰霉菌的侵染,而LrCOMT1基因可能还参与其他途径。3.通过对岷江百合叶片进行外源激素SA和Me JA胁迫处理,分析LrCOMT1和LrCOMT2基因在岷江百合上的诱导表达情况。结果表明,LrCOMT1基因对外源激素Me JA的响应相对于SA处理更加明显,在Me JA处理24 h后,LrCOMT1基因表达水平显著上调并升至峰值;而LrCOMT2基因对外源激素SA处理相较于Me JA处理的表达量上调更加明显,在SA处理12 h后达到峰值。LrCOMT1和LrCOMT2基因在岷江百合不同组织中的表达情况显示,两个基因均在老茎中的表达量最高,其次为外鳞茎,在根部中的表达量最低。LrCOMT2基因在亚细胞定位结果表明,LrCOMT2-GFP融合蛋白的荧光信号仅在细胞核和细胞膜中进行表达。4.通过构建LrCOMT1和LrCOMT2基因的过表达载体,并利用蘸花法获得异源过表达的转基因拟南芥,筛选至T代纯和的转基因植株经GUS染色鉴定后均呈蓝色,RT-PCR扩增显示出明亮的条带。通过木质素组织化学染色以及含量测定结果显示LrCOMT1和LrCOMT2的过表达转基因拟南芥的木质素沉积均明显高于野生型拟南芥,通过表型观察发现转LrCOMT1基因拟南芥出现叶片卷曲的情况,而转LrCOMT2基因拟南芥叶片无明显表型。5.经灰霉菌侵染后,过表达LrCOMT1和LrCOMT2基因的转基因拟南芥叶片和瞬时过表达的百合叶片的侵染面积均明显小于对照组,而瞬时反义表达后的百合叶片对灰霉菌的抗性能力显著降低。以上结果表明,过表达LrCOMT1和LrCOMT2基因可增强植株抵御灰霉菌侵染的能力。6.通过荧光定量分析LrCOMT1和LrCOMT2基因在木质素生物合成途径中的表达情况,结果显示,转LrCOMT1基因拟南芥株系对木质素生物合成途径中多个相关基因明显上调,其中At4CL1和At CCR1基因上调最为显著,而转LrCOMT2基因拟南芥株系对木质素生物合成途径中At PAL1和At C4H基因上调最为明显,其次为At4CL1、At C3H、At CCR1基因。7.转LrCOMT1和LrCOMT2基因拟南芥在SA/Me JA激素抗病途径中的表达情况显示,转LrCOMT1基因拟南芥株系对SA和Me JA途径基因均无明显影响,转LrCOMT2基因拟南芥对Me JA途径中的At VSP1和At PDF1.2基因显著上调,而对SA途径基因的影响不明显。本研究筛选出对灰霉菌侵染有抵御作用的LrCOMT1和LrCOMT2基因,LrCOMT1基因主要通过木质素生物合成途径对灰霉抗性进行了调控,通过进化树分析

关键词：岷江百合咖啡酸-O-甲基转移酶灰霉菌木质素生物合成

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科普助力创新文化建设的机理及实现途径

科普研究 2024年第1期19卷 41-48,105页

作者：刘萱段志伟中国科协创新战略研究院北京100038

科学普及是向社会传递创新文化的重要途径和形式,要实现2035年建成科技强国和国家文化软实力显著增强的总目标,有必要系统分析科学普及参与创新文化建设的机理。本文从辨析面向科技强国的创新文化的内涵及主要特征出发,厘清创新文化的... 详细信息

科学普及是向社会传递创新文化的重要途径和形式,要实现2035年建成科技强国和国家文化软实力显著增强的总目标,有必要系统分析科学普及参与创新文化建设的机理。本文从辨析面向科技强国的创新文化的内涵及主要特征出发,厘清创新文化的社会形成逻辑,探究科学普及助力创新文化建设的实现途径,系统梳理了科学普及在不同阶段参与创新文化建设的作用机理,引入社会互动理论与科学普及模型,构建了科学普及参与创新文化建设的平面机理框架。在此研究结果的基础上,文章从构建科技强国视域的科学普及叙事体系、提升价值认同导向的传播体系效能、丰富以对话为重点的多样化媒介策略三个途径提出建议,为科学普及助力创新文化建设提供参考。

关键词：科学普及创新文化社会互动理论传播模型

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探究现代音乐舞蹈教育的创新路径

音乐世界 2024年第2期 87-90页

作者：刘萱贵州大学音乐学院

本文从多个维度探讨了现代音乐舞蹈教育的创新路径,旨在提升教育质量,培养学生的创新思维和实践能力,为学生打造一个涉及情感、认知和社会互动的综合性学习体验。

关键词：现代音乐舞蹈教育创新路径

利用邻位标记-质谱联用技术发掘冠状病毒HCoV-229E互作宿主因子

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生物化学与生物物理进展 2024年

作者：琚睿霞汪浩勇刘海楠刘萱曹诚湖北工业大学生命科学与健康工程学院军事科学院军事医学研究院

目的通过邻位标记-质谱联用与生信分析结合筛选与人冠状病毒229E(HCoV-229E)核衣壳蛋白(NP)相互作用的潜在宿主因子，并利用免疫共沉淀等技术验证，从而寻找HCoV-229ENP的相互作用蛋白，为揭示病毒复制增殖的分子机制，及不同人冠状病... 详细信息

目的通过邻位标记-质谱联用与生信分析结合筛选与人冠状病毒229E(HCoV-229E)核衣壳蛋白(NP)相互作用的潜在宿主因子，并利用免疫共沉淀等技术验证，从而寻找HCoV-229ENP的相互作用蛋白，为揭示病毒复制增殖的分子机制，及不同人冠状病毒致病力差异奠定基础。方法研究首先构建了表达HCoV-229EN蛋白与生物素连接酶标签融合蛋白(NP-TurboID)的重组腺病毒Ad-V5-NPHCoV-229E-TurboID(Ad-N)，感染人非小细胞肺癌细胞A549，48小时后添加外源生物素，通过生物素连接酶标记NP相互作用蛋白，利用链霉亲和素交联的磁珠纯化生物素标记蛋白，而后进行无标记(Label-free)蛋白组学质谱分析，筛选出与潜在N蛋白互作的候选蛋白，并通过免疫沉淀和免疫荧光等实验进行验证。结果无标记(Label-free)蛋白组学质谱筛选出584个潜在互作蛋白，从中选取GSK3A和GSK3B进行免疫共沉淀和免疫荧光验证，实验结果表明二者与NPHCoV-229E存在相互作用。结论结果证实，邻位标记-质谱联用技术可以用于病毒-宿主相互作用因子的挖掘，为进一步研究冠状病毒复制、增殖及致病机制奠定了基础。

关键词：邻位标记冠状病毒229E NP TurboID GSK3

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探究式学习在高中音乐教学中的应用分析

中文科技期刊数据库（全文版）教育科学 2024年第2期 104-106页

作者：刘萱辽宁省大连市经济技术开发区第一中学辽宁大连116600

随着新课程改革的颁布与实施,探究式学习在高中音乐教学中的应用愈加广泛,并且能够促进学生的全面发展,提高教学效果。在音乐教学中,学生可以通过探究音乐作品的背景和风格特点,探讨音乐的文化内涵,并尝试创作自己的音乐作品,这些都能... 详细信息

随着新课程改革的颁布与实施,探究式学习在高中音乐教学中的应用愈加广泛,并且能够促进学生的全面发展,提高教学效果。在音乐教学中,学生可以通过探究音乐作品的背景和风格特点,探讨音乐的文化内涵,并尝试创作自己的音乐作品,这些都能够激发学生们对音乐的兴趣,使学习变得更加积极主动。因此,更应该重视探究式学习在音乐教学中的应用,不断探索和改进教学方法。本文将围绕探究式学习在高中音乐教学中的应用展开研究分析。

关键词：探究式学习高中音乐音乐教学

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清代诗词中西流松花江的文学景观

关东学刊 2024年第1期 113-119页

作者：刘萱仪长春理工大学文学院长春130012

近年来,从空间角度研究文学,同时以文学角度重新认识空间的趋向日益突出。但对于古代吉林乡土空间的发掘似乎还有待进一步深入。文章通过对清代咏西流松花江诗词的举隅,分析其中对自然风光的描摹、精神原乡的依归和人民生活的记忆几个... 详细信息

近年来,从空间角度研究文学,同时以文学角度重新认识空间的趋向日益突出。但对于古代吉林乡土空间的发掘似乎还有待进一步深入。文章通过对清代咏西流松花江诗词的举隅,分析其中对自然风光的描摹、精神原乡的依归和人民生活的记忆几个方面的地域书写及其塑造的文学景观,探寻其赋予西流松花江这一吉林重要乡土空间的深厚情感和文化意涵。

关键词：清代诗词松花江文学景观

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高职院校提升学生就业创业能力的策略

学园 2024年第1期17卷 63-65页

作者：刘萱甘肃工业职业技术学院甘肃天水741025

经济社会快速发展的背景下,高职院校毕业生面临着就业创业挑战,有效提升高职院校学生的就业创业能力已成为教育工作者普遍关注的问题。通过分析高职院校提升学生就业创业能力的意义,并剖析影响学生就业创业能力提升的因素,提出加强思想... 详细信息

经济社会快速发展的背景下,高职院校毕业生面临着就业创业挑战,有效提升高职院校学生的就业创业能力已成为教育工作者普遍关注的问题。通过分析高职院校提升学生就业创业能力的意义,并剖析影响学生就业创业能力提升的因素,提出加强思想政治教育、提高学生的整体素质,创设良好的教学情境、营造和谐的学习氛围,提供针对性辅导、满足学生的实际需求,建设网络平台、提供资源扶持,深化产教融合、提高学生的职业素养等策略,提升高职院校学生的就业创业能力,促进职业教育的高质量发展。

关键词：高职院校就业创业能力职业培训

尚香之风——宋代七里镇窑与吉州窑香炉的儒禅之辩

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中国陶瓷 2024年第2期60卷 86-90页

作者：刘萱胡雪梅谢高莎赣南师范大学赣州341000

宋代瓷香炉盛极一时,源于尚香之风的风靡。市场上看到的瓷香炉造型黑釉香炉很少,大多是以青白釉色造型出现。黑釉香炉在江西省吉州窑与七里镇窑地区存在一部分。吉州窑与七里镇窑的黑釉香炉,它们在瓷器表层装饰上差别很大但是在形状和... 详细信息

宋代瓷香炉盛极一时,源于尚香之风的风靡。市场上看到的瓷香炉造型黑釉香炉很少,大多是以青白釉色造型出现。黑釉香炉在江西省吉州窑与七里镇窑地区存在一部分。吉州窑与七里镇窑的黑釉香炉,它们在瓷器表层装饰上差别很大但是在形状和构造上相似。摸索宋代吉州窑与七里镇窑黑釉香炉造物心理动机背后产生的不同文化源流,可以通过比较二者在造型、装饰上的区别与联系,剖析其使用黑釉香炉的目的以及与不同接受群体之间的关系。

关键词：宋代吉州窑七里镇窑黑釉香炉

利用邻近标记-质谱联用技术筛选埃博拉病毒相关宿主因子

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生物学杂志 2024年第3期41卷 92-97页

作者：张迅柏宇刘海楠刘萱曹诚安徽大学物质科学与信息技术研究院合肥230601 军事科学院军事医学研究院北京100850

构建VP35与生物素连接酶TurboID融合蛋白,利用埃博拉病毒最小基因组系统(Ebola virus minigenome system, EBOV MG),在细胞中模拟病毒的生命周期和病毒包涵体(virus inlusion body, VIB)的形成过程,通过添加外源生物素,标记VP35相互作... 详细信息

构建VP35与生物素连接酶TurboID融合蛋白,利用埃博拉病毒最小基因组系统(Ebola virus minigenome system, EBOV MG),在细胞中模拟病毒的生命周期和病毒包涵体(virus inlusion body, VIB)的形成过程,通过添加外源生物素,标记VP35相互作用蛋白。定量质谱丰度差异分析筛选出537个潜在的VP35互作蛋白,Gene Ontology(GO)分析发现其中包括大量与RNA结合相关蛋白。从中选取EIF4B和ZNF598进行初步验证,二者均与VP35存在相互作用,且敲低上述基因可显著抑制EBOV转录复制病毒样颗粒(trVLP)的复制效率。结果证实,邻近标记-质谱联用技术可以用于病毒-宿主相互作用蛋白挖掘,为病毒致病机制研究及抗病毒靶点挖掘提供重要手段。

关键词：邻近标记埃博拉病毒病毒包涵体 TurboID VP35