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ERK1/2通路在VEGF促进绵羊卵泡颗粒细胞增殖中的作用

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中国兽医学报 2012年第10期32卷 1532-1535,1559页

作者：曹颖楠刘松财郝林琳姜怀志吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062

选取10只1.5岁成年小尾寒羊母羊,分别取卵泡颗粒细胞并进行培养。设置5个试验组和1个空白对照组,试验组采用不同质量浓度血管内皮生长因子(VEGF)刺激,空白组不添加VEGF。并用MTT检测细胞增殖情况,Western-blotting检测细胞中P-ERK1/2表... 详细信息

选取10只1.5岁成年小尾寒羊母羊,分别取卵泡颗粒细胞并进行培养。设置5个试验组和1个空白对照组,试验组采用不同质量浓度血管内皮生长因子(VEGF)刺激,空白组不添加VEGF。并用MTT检测细胞增殖情况,Western-blotting检测细胞中P-ERK1/2表达水平。MTT比色结果表明,当VEGF质量浓度为5μg/L时对细胞增殖的促进作用最大,且试验组均高于对照组;Western-blotting结果显示,P-ERK1/2表达水平随VEGF的添加而显著增加,并在5μg/L时达到最大值(P0.05)。这说明不同质量浓度VEGF对颗粒细胞增殖的促进作用各不相同,其中以5μg/L的VEGF效果最好。当颗粒细胞培养至48h时,P-ERK1/2表达水平较24h时略有提高,并在5μg/L VEGF刺激时达到最大值。VEGF可能是通过促进P-ERK1/2的表达进而促进颗粒细胞的增殖。

关键词：血管内皮生长因子 ERK1/2通路颗粒细胞

犬IFNα1-THYα1融合蛋白的生物活性检测

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河南农业科学 2010年第5期39卷 112-113页

作者：赵珺刘宇鹏吴琼刘松财长春大学生物科学技术学院吉林长春130022 吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062

用细胞病变抑制试验和E玫瑰花环形成试验检测犬IFNα1-THYα1融合蛋白的生物活性。结果表明,IFNα1-THYα1融合蛋白能够抑制病毒感染的DK细胞,提高玫瑰花环形成率,说明犬IFNα1-THYα1融合蛋白具有一定的犬干扰素α1(IFNα1)与胸腺肽α1... 详细信息

用细胞病变抑制试验和E玫瑰花环形成试验检测犬IFNα1-THYα1融合蛋白的生物活性。结果表明,IFNα1-THYα1融合蛋白能够抑制病毒感染的DK细胞,提高玫瑰花环形成率,说明犬IFNα1-THYα1融合蛋白具有一定的犬干扰素α1(IFNα1)与胸腺肽α1(THYα1)的生物活性。

关键词：犬 IFNα1 THYα1 融合蛋白生物活性

家兔肌肉组织表达外源性生长激素释放因子对增重的影响

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中国兽医学报 2003年第1期23卷 56-58页

作者：张永亮连继勤刘松财冯立文解放军军需大学军事兽医系吉林长春130062

用 Wicks法提取 pc DNA- GRF(1～ 32 )质粒并用 DNA Cacu L ator定量 ,同时制备原生质体。将 5 4只家兔随机分为 9组 ,分别注射质粒 pc DNA- GRF(1～ 32 ) 0 .4(用布比卡因处理 )、0 .4(含 10 %甘油 )、0 .4(含 2 5 %蔗糖 )、0 .2、0 .4... 详细信息

用 Wicks法提取 pc DNA- GRF(1～ 32 )质粒并用 DNA Cacu L ator定量 ,同时制备原生质体。将 5 4只家兔随机分为 9组 ,分别注射质粒 pc DNA- GRF(1～ 32 ) 0 .4(用布比卡因处理 )、0 .4(含 10 %甘油 )、0 .4(含 2 5 %蔗糖 )、0 .2、0 .4、0 .6、0 .8mg及空质粒 0 .1mg和原生质体 1m L( ～组 )。分别于注射后 0、3、8、14、19、2 4、31d称重 ;于注射后 0、3、8、19、31d采血并分离血清 ,测定血清中 GH浓度 ,用 t检验进行统计学分析。结果表明 ,布比卡因处理组注射后 3d内GH浓度升高 6 5 %(P<0 .0 1) ,平均日增重 2 9g(P<0 .0 5 ) ;注射 0 .8mg组 31d平均日增重较对照组多 34 .6 2 %;注射原生质体组 31d平均日增重较对照组多 40 .5 7%(P<0 .0 5 )。 31d后将家兔屠宰 ,取注射部位肌肉提取 DNA和总RNA,用 PCR和 RT- PCR方法分别检测到了 GRF在肌肉中的存在和表达 ;用 EL ISA方法没能检测到血清中的 GRF抗体。

关键词：家兔肌肉组织表达外源性生长激素释放因子增重影响

甜味蛋白Brazzein在毕赤氏酵母中表达的初步研究

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中国食品学报 2009年第5期9卷 43-48页

作者：王长远张丽萍刘松财汤丹黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319 吉林大学畜牧兽医学院的吉林长春130062

目的:采用pGAPZαA为表达载体,SMD1168毕赤酵母为受体系统,构建分泌型的甜味蛋白Brazzein毕赤酵母重组菌。方法:按照毕赤酵母偏爱密码子设计Brazzein基因,共设计4对引物。在上、下游引物分别引入XbaI与XhoI酶切识别位点,采用SOE-PCR法合... 详细信息

目的:采用pGAPZαA为表达载体,SMD1168毕赤酵母为受体系统,构建分泌型的甜味蛋白Brazzein毕赤酵母重组菌。方法:按照毕赤酵母偏爱密码子设计Brazzein基因,共设计4对引物。在上、下游引物分别引入XbaI与XhoI酶切识别位点,采用SOE-PCR法合成Brazzein基因,构建克隆载体pUC57-Bra与酵母表达载体pGAPZαA-Bra。将重组质粒线性化,电转导入毕赤酵母(Pichia. pastoris SMD1168)中,用高浓度的抗生素Zeocin筛选高拷贝转化子。将重组菌株接种于YPD培养基诱导表达,进行SDS-PAGE分析。结果:成功构建了分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌。SDS-PAGE表明,目标蛋白的相对分子质量与理论值一致,在诱导72h后目的蛋白表达量达0.12g/L。对纯化后的蛋白进行生物活性测定,经鉴定具有一定的甜味,表达的Brazzein蛋白生物学活性良好。

关键词： Brazzein基因 pGAPZαA表达载体毕赤酵母

慢病毒介导的生长抑素shRNA对BHK-21细胞生长的影响

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中国兽医学报 2011年第7期31卷 1003-1006页

作者：李壮刘松财张永亮王楠郝林琳吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 华南农业大学动物科学学院广东广州510642 中国兽医药品监察所北京100081

采用慢病毒介导的shRNA沉默细胞自身生长抑素(SS)的表达,同时,以pcDNA3.1-SS(pSS)真核表达载体转染细胞作为阳性对照,研究SS对BHK-21细胞的抑制增殖作用,同时观察SS是否具有促进细胞凋亡的作用。MTT法绘制细胞生长曲线可知,pSS转染细胞... 详细信息

采用慢病毒介导的shRNA沉默细胞自身生长抑素(SS)的表达,同时,以pcDNA3.1-SS(pSS)真核表达载体转染细胞作为阳性对照,研究SS对BHK-21细胞的抑制增殖作用,同时观察SS是否具有促进细胞凋亡的作用。MTT法绘制细胞生长曲线可知,pSS转染细胞的生长受到明显抑制,抑制效率为9.63%(P<0.05);而LV-sh2组细胞的生长密度是对照组细胞的117.33%(P<0.05),表明SS对细胞的增殖具有抑制作用。流式细胞检测细胞凋亡表明,pSS转染组和LV-shRNA感染组凋亡细胞含量分别是对照组凋亡细胞含量的1.97倍(P<0.05)和24.30%(P<0.05),表明SS通过诱导细胞凋亡发挥抑制细胞增殖的作用。本研究为SS及其类似物作为治疗药物的进一步开发应用提供了理论依据。

关键词：生长抑素慢病毒载体细胞增殖细胞凋亡

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梅花鹿S100A4基因的克隆及原核表达

中国病原生物学杂志 2013年第3期8卷 242-244页

作者：张英李莉郝林琳刘松财于浩吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062

目的构建梅花鹿S100A4基因重组质粒,并进行原核表达,为研究S100A4蛋白在鹿茸发生中的作用机制奠定基础。方法梅花鹿锯茸血细胞中提取总RNA并进行反转录,用设计的特异性引物扩增梅花鹿S100A4基因,PCR产物克隆到pMD18-T载体并测序。将扩增... 详细信息

目的构建梅花鹿S100A4基因重组质粒,并进行原核表达,为研究S100A4蛋白在鹿茸发生中的作用机制奠定基础。方法梅花鹿锯茸血细胞中提取总RNA并进行反转录,用设计的特异性引物扩增梅花鹿S100A4基因,PCR产物克隆到pMD18-T载体并测序。将扩增的S100A4基因片段和原核表达质粒pET-28a(+)分别用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切并连接,再将重组质粒转入BL21(DE3),用TPIG表达菌株进行诱导表达。结果序列分析显示,梅花鹿S100A4基因与牛S100A4基因同源性最高,为98.4%。酶切鉴定显示,表达梅花鹿S100A4基因重组质粒pET28a-S100A4构建成功,SDS-PAGE电泳检测表达蛋白分子质量单位为12ku,与预期值相符。结论构建了梅花鹿S100A4基因重组质粒,并在大肠埃希菌中成功表达梅花鹿S100A4蛋白,为研究S100A4蛋白在鹿茸生长过程中的作用机制奠定了基础。

关键词：梅花鹿 S100A4基因克隆表达

Brazzein基因的合成及pGAPZαA-Bra表达载体的构建

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安徽农业科学 2008年第15期36卷 6230-6232页

作者：王长远张丽萍刘松财汤丹黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319 吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062

[目的]为Brazzein基因在酵母SMD1168中转化和表达奠定基础。[方法]利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)合成Brazzein基因,将其连接到pMD18-T载体上,构建克隆载体pMD18-T-Bra。分别用XhoI和XbaI限制内切酶对克隆质粒pMD18-T-Bra和酵母表达载体pGAPZαA进行酶切,并在T4DNA连接酶作用下,将回收的目的基因连接到pGAPZαA载体上,构建重组质粒pGAPZαA-Bra。[结果]通过PCR扩增获得了约188 bp的Brazzein类似物的编码序列,将其克隆到pMD18-T质粒,用XhoI和XbaI双酶切后,连接到pGAPZαA载体,成功构建了重组表达载体pGAPZαA-Bra。Brazzein基因其中各碱基未发生突变,整个表达载体阅读框正确无误。[结论]利用基因工程的方法生产Brazzein是可行的。

关键词： Brazzein 克隆 pGAPZαA-Bra表达载体

松子壳多糖对CDV和CPV的体外抗病毒活性

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中国兽医学报 2009年第9期29卷 1111-1114页

作者：母连志张永亮张明军李莉张英刘松财吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062

选用犬瘟热病毒(CDV)和犬细小病毒(CPV)标准株,体外分别以Vero和F81为受体细胞,以不同剂量的松子壳多糖和不同顺序作用于病毒复制周期的各个阶段。以病毒半数感染量(TCID50),细胞病变(CPE),MTT法作为评价松子壳多糖体外抗病毒活性的指... 详细信息

选用犬瘟热病毒(CDV)和犬细小病毒(CPV)标准株,体外分别以Vero和F81为受体细胞,以不同剂量的松子壳多糖和不同顺序作用于病毒复制周期的各个阶段。以病毒半数感染量(TCID50),细胞病变(CPE),MTT法作为评价松子壳多糖体外抗病毒活性的指标。结果表明,在预防给药、治疗给药、混合给药方法中,不同浓度的松子壳多糖均可不同程度地抑制病毒的致细胞病变作用,松子壳多糖最低质量浓度31.2 mg/L仍具有抗2种病毒作用,细胞存活率均在49.08%以上,且预防给药法和混合给药法的抗病毒效果要优于治疗法。

关键词：松子壳多糖犬细小病毒犬瘟热病毒抗病毒作用

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犬脾特异性转移因子的生物学活性检测

中国兽医学报 2011年第12期31卷 1769-1772页

作者：张英刘一诺李莉马强房希碧官员刘松财吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062

采用冻融—透析法提取了免疫犬的特异性转移因子(STF),以健康非免疫犬的非特异性转移因子(NSTF)为对照,对2种转移因子的理化学特性和免疫活性进行了检测与分析。结果表明,2种转移因子的理化学性质相似,STF含有的蛋白量低而核酸量高,而N... 详细信息

采用冻融—透析法提取了免疫犬的特异性转移因子(STF),以健康非免疫犬的非特异性转移因子(NSTF)为对照,对2种转移因子的理化学特性和免疫活性进行了检测与分析。结果表明,2种转移因子的理化学性质相似,STF含有的蛋白量低而核酸量高,而NSTF含有的蛋白量高而核酸量低。E-玫瑰花环试验表明,STF和NSTF均可增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,增加E-玫瑰花环的形成率,表明TF具有免疫增强作用,其中STF的效果明显高于NSTF(P0.05)。生理盐水组和正常小鼠的外周血淋巴细胞转化表现与免疫抑制小鼠基本一致,犬脾STF、NSTF和PHA对生理盐水组和正常小鼠的淋巴细胞均表现出一定的免疫增强活性,而且犬脾STF、NSTF免疫增强作用显著高于PHA组(P<0.01)。

关键词：犬特异性转移因子非特异性转移因子 E-玫瑰花环 MTT 免疫活性