甜味蛋白Brazzein在毕赤氏酵母中表达的初步研究

作     者：王长远 张丽萍 刘松财 汤丹 

作者机构：黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319 吉林大学畜牧兽医学院的吉林长春130062 

出 版 物：《中国食品学报》 (Journal of Chinese Institute Of Food Science and Technology)

年 卷 期：2009年第9卷第5期

页      面：43-48页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：黑龙江省自然基金项目(No.C200618) 黑龙江省农垦总局科技攻关项目(No.HNKXIY-08-11A) 

主　　题：Brazzein基因 pGAPZαA表达载体 毕赤酵母 

摘      要：目的:采用pGAPZαA为表达载体,SMD1168毕赤酵母为受体系统,构建分泌型的甜味蛋白Brazzein毕赤酵母重组菌。方法:按照毕赤酵母偏爱密码子设计Brazzein基因,共设计4对引物。在上、下游引物分别引入XbaI与XhoI酶切识别位点,采用SOE-PCR法合成Brazzein基因,构建克隆载体pUC57-Bra与酵母表达载体pGAPZαA-Bra。将重组质粒线性化,电转导入毕赤酵母(Pichia. pastoris SMD1168)中,用高浓度的抗生素Zeocin筛选高拷贝转化子。将重组菌株接种于YPD培养基诱导表达,进行SDS-PAGE分析。结果:成功构建了分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌。SDS-PAGE表明,目标蛋白的相对分子质量与理论值一致,在诱导72h后目的蛋白表达量达0.12g/L。对纯化后的蛋白进行生物活性测定,经鉴定具有一定的甜味,表达的Brazzein蛋白生物学活性良好。