梅花鹿S100A4基因的克隆及原核表达

作     者：张英 李莉 郝林琳 刘松财 于浩 

作者机构：吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2013年第8卷第3期

页      面：242-244页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：长春市科技计划项目(No.11KZ55) 

主　　题：梅花鹿 S100A4基因 克隆 表达 

摘      要：目的构建梅花鹿S100A4基因重组质粒,并进行原核表达,为研究S100A4蛋白在鹿茸发生中的作用机制奠定基础。方法梅花鹿锯茸血细胞中提取总RNA并进行反转录,用设计的特异性引物扩增梅花鹿S100A4基因,PCR产物克隆到pMD18-T载体并测序。将扩增的S100A4基因片段和原核表达质粒pET-28a(+)分别用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切并连接,再将重组质粒转入BL21(DE3),用TPIG表达菌株进行诱导表达。结果序列分析显示,梅花鹿S100A4基因与牛S100A4基因同源性最高,为98.4%。酶切鉴定显示,表达梅花鹿S100A4基因重组质粒pET28a-S100A4构建成功,SDS-PAGE电泳检测表达蛋白分子质量单位为12ku,与预期值相符。结论构建了梅花鹿S100A4基因重组质粒,并在大肠埃希菌中成功表达梅花鹿S100A4蛋白,为研究S100A4蛋白在鹿茸生长过程中的作用机制奠定了基础。