检索结果-南通市图书馆

白假丝酵母脂肪酶CaLIP10的毕赤酵母优化表达及酶的特性分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

白假丝酵母脂肪酶CaLIP10的毕赤酵母优化表达及酶的特性分析

作者：侯淑琳华南理工大学

学位级别：硕士

脂肪酶具有广泛的理化性质，并在不断增长的现代生物技术中发挥着重要作用，而脂肪酶广泛来源于微生物，因而研究微生物脂肪酶具有重大意义。在本研究中，我们对白假丝酵母Candida albicans脂肪酶基因lip10进行了克隆和定点突变，并在... 详细信息

脂肪酶具有广泛的理化性质，并在不断增长的现代生物技术中发挥着重要作用，而脂肪酶广泛来源于微生物，因而研究微生物脂肪酶具有重大意义。在本研究中，我们对白假丝酵母Candida albicans脂肪酶基因lip10进行了克隆和定点突变，并在毕赤酵母中进行了优化重组表达，对表达产物进行了纯化和酶的特性分析。主要研究内容如下：通过PCR技术进行Calip10基因的克隆和定点突变。以Candida albicansATCC10231基因组为模板，PCR扩增得到脂肪酶基因并测序鉴定，确定该基因为lip10。利用重叠延伸PCR技术对基因lip10两处特殊Ser密码子位点CTG定点突变为普通Ser密码子TCT，以实现lip10在毕赤酵母表达系统中的异源表达。突变之后的lip10基因序列提交GenBank，编号为JN695238。构建毕赤酵母表达质粒pGAPZαA-Calip10和pGAPZαA-Calip10-dm，线性化后导入毕赤酵母进行重组表达，测得突变前后CaLIP10的酶活分别为2.05U/mL和4.92U/mL，突变之后酶活明显提高。采用中心组合设计-响应面分析法，对重组酵母的培养条件进行优化。响应面分析四因素（培养温度、培养基初始pH以及YPD培养基中葡萄糖浓度和酵母提取物浓度）对CaLIP10的酶活产量的影响，得出最优培养条件及培养基配比为：起始pH6.86，温度25.53℃，酵母提取物1.32%和葡萄糖浓度为3.48%，对应预测最大酶活为7.89U/mL，实验验证测得结果为8.06U/mL。实际值与预测值基本一致。优化后酶活（5.19U/mL）提高了55.30%。CaLIP10的纯化及酶的性质研究。采用阳离子交换层析一步法对重组表达的CaLIP10进行纯化，纯化倍数为5.68，回收率达86.01%。对纯化后的CaLIP10进行了酶的性质研究。结果表明，其可水解不同链长对硝基苯酚酯，其中水解pNPC（C8）时表现最大活力。CaLIP10的最适反应温度为25℃，pH为8.0，在碱性低温条件下较稳定。金属离子对CaLIP10酶活都表现不同程度的抑制作用。表面活性剂和有机溶剂会影响CaLIP10的酶活，CaLIP10对乙醇耐受性较好。CaLIP10可水解天然椰子油，可能具sn-2位选择性，对脂肪酸链长短无偏好性。

关键词：白假丝酵母脂肪酶定点突变表达酶的特性

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

人多能干细胞来源的肾定向分化平台的构建

中国生物化学与分子生物学报 2022年第8期38卷 1098-1105页

作者：周冰蕊魏云亮梁婷何生冯志伟靳宁刘志贞赵虹侯淑琳于保锋解军山西医科大学生物化学与分子生物学教研室出生缺陷与细胞再生山西省重点实验室山西医科大学第一医院影像科太原030001

肾是一种重要的人体器官,具有多种生理功能。然而,全球范围内约有10%的人口患有肾疾病。因此,建立一种接近人体肾的结构与功能的模型进行肾疾病的研究是十分必要的。多能干细胞体外定向诱导分化技术的兴起,为再生医学和精准医学领域注... 详细信息

肾是一种重要的人体器官,具有多种生理功能。然而,全球范围内约有10%的人口患有肾疾病。因此,建立一种接近人体肾的结构与功能的模型进行肾疾病的研究是十分必要的。多能干细胞体外定向诱导分化技术的兴起,为再生医学和精准医学领域注入了新的动力。本研究通过在体外条件下模拟体内肾发育的过程,将人多能干细胞包括胚胎干细胞和诱导多能干细胞,通过体外定向诱导分化形成肾的祖细胞,进而建立肾的结构与功能单位:肾元。该研究通过激活WNT信号通路,同时抑制TGF-β信号通路,将人多能干细胞从多能态定向诱导至原条阶段。之后通过细胞自分化的能力使其发育至中间中胚层,再通过激活FGF信号通路,将其分化至肾祖细胞阶段。流式细胞检测结果显示,肾祖细胞占总细胞数的51.5%~61.9%。通过免疫荧光检测发现:分化得到的结构中包含肾小球足细胞、近端小管、远端小管等肾组织结构。该研究建立的肾体外分化方法,具有稳定性好、分化效率高、重复性好的特点。为研究人类肾的早期发育机制,肾疾病模型构建,以及药物筛选提供了一种新的方法。

关键词：人多能干细胞体外诱导分化肾的分化肾元

人分泌型磷脂酶A2 GIIE的E54突变及其对底物选择性的影响

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2021年第7期37卷 2513-2521页

作者：侯淑琳白俊平陆昕张玉龙许婷婷解军山西医科大学基础医学院出生缺陷与细胞再生山西省重点实验室山西太原030001 中国科学院广州生物医药与健康研究院呼吸疾病国家重点实验室广东广州510530

人分泌型磷脂酶A2 GIIE (Human secreted phospholipase A2 GIIE,hGIIE)通过发挥酶催化作用,参与炎症反应和脂代谢过程。为了揭示hGIIE的底物选择机制,文中对hGIIE进行了定点突变,采用毕赤酵母Pichia pastoris重组表达突变体蛋白,然后... 详细信息

人分泌型磷脂酶A2 GIIE (Human secreted phospholipase A2 GIIE,hGIIE)通过发挥酶催化作用,参与炎症反应和脂代谢过程。为了揭示hGIIE的底物选择机制,文中对hGIIE进行了定点突变,采用毕赤酵母Pichia pastoris重组表达突变体蛋白,然后通过阳离子交换和分子排阻两步法纯化蛋白,最后用等温微量热滴定仪测定酶活性。hGIIE的结构分析显示,氨基酸E54可能与GIIE的底物头基选择性有关,经过同源序列比对,拟将E54突变为丙氨酸(A)、苯丙氨酸(F)和赖氨酸(K)。突变体E54A、E54F和E54K在毕赤酵母组成型表达系统中实现重组表达,通过两步纯化,纯度达到90%以上。酶活性实验显示,突变体与底物1,2-二己酰卵磷脂(1,2-dihexanoyl-snglycero-3-phosphocholine,DHPC)和1,2-二己酰磷酸甘油(1,2-dihexyl phosphate glycerol,DHPG)的亲和力发生改变,其中突变体E54K与DHPG的Km值为突变前的0.39倍,亲和力明显增强;突变体E54F与DHPC的Km值为突变前的1.93倍,亲和力明显减弱。hGIIE的E54突变体蛋白与磷脂底物的亲和力发生明显改变,说明E54在hGIIE的磷脂底物选择性水解过程中起重要作用。

关键词：分泌型磷脂酶A2 GIIE 异源表达突变底物选择性

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

叶酸代谢与神经管畸形

生命的化学 2020年第7期40卷 1000-1008页

作者：冯志伟侯淑琳张晓铮李建婷张霆穆箭兵解军山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室太原030001 首都儿科研究所北京100020 美国国立卫生研究院过敏与传染病研究所疟疾和媒介研究实验室马里兰州20852

神经管畸形(neural tube defects,NTDs)是全球发病率排第二位的出生缺陷疾病,主要包括脊柱裂和无脑畸形。NTDs源于胚胎发育期间神经管未能完全闭合,是中枢神经系统的严重出生缺陷。人类NTDs是由遗传、环境以及遗传与环境之间的交互作用... 详细信息

神经管畸形(neural tube defects,NTDs)是全球发病率排第二位的出生缺陷疾病,主要包括脊柱裂和无脑畸形。NTDs源于胚胎发育期间神经管未能完全闭合,是中枢神经系统的严重出生缺陷。人类NTDs是由遗传、环境以及遗传与环境之间的交互作用引起的。叶酸作为一碳代谢的重要物质,可以降低神经管畸形的发病率,但其具体作用机制还不清楚。本文将从代谢途径、相关基因、动物模型等方面回顾叶酸对NTDs发生影响的研究进展,旨在为探索NTDs的发病机制及预防NTDs的发生提供研究思路。

关键词：神经管畸形叶酸代谢基因多态性小鼠模型

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

试析中国宪政思想之特点

消费导刊 2008年第1期 135-135页

作者：侯淑琳北京帮安迪控制工程技术有限公司

一、宪政的内涵中国有关"宪政"之说几乎是纯粹的舶来品。亚里士多德说:"……政体(宪法)为城邦一切政治组织的依据,其中尤其着重于政治所由以决定的‘最高治权’的组织",历来被认为是宪政概念的最早渊源。宪政概念在西方的发展,经历了漫... 详细信息

一、宪政的内涵中国有关"宪政"之说几乎是纯粹的舶来品。亚里士多德说:"……政体(宪法)为城邦一切政治组织的依据,其中尤其着重于政治所由以决定的‘最高治权’的组织",历来被认为是宪政概念的最早渊源。宪政概念在西方的发展,经历了漫长的历史变迁。

关键词：宪政思想亚里士多德历史变迁有限政府中国舶来品法治宪法原理主要体现政治组织

多阶段均值—标准差投资组合时间一致性策略研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

华南师范大学学报（自然科学版） 2024年第2期56卷 91-99页

作者：张鹏崔淑琳华南师范大学经济与管理学院广州510006

文章运用标准差度量投资组合的风险,考虑交易成本、借贷约束和阈值约束等情况,提出了具有Vasicek随机利率和风险偏好的多阶段均值-标准差投资组合模型(V-M-SD)。基于博弈论的方法,将该模型转化为时间一致的动态优化问题,并使用离散近似... 详细信息

文章运用标准差度量投资组合的风险,考虑交易成本、借贷约束和阈值约束等情况,提出了具有Vasicek随机利率和风险偏好的多阶段均值-标准差投资组合模型(V-M-SD)。基于博弈论的方法,将该模型转化为时间一致的动态优化问题,并使用离散近似迭代法求解满足时间一致性的最优投资组合。最后,实证分析借贷约束、阈值约束和风险规避系数对V-M-SD模型的最优时间一致性策略的影响。研究发现,当其他约束条件保持不变时,在一定的阈值范围内,投资组合的终期财富分别与借贷约束、阈值约束、风险规避系数正相关、正相关、负相关;投资组合的单位风险水平分别与借贷约束、阈值约束、风险规避系数负相关、负相关、正相关。

关键词：多阶段投资组合均值-标准差时间一致性策略 Vasicek随机利率离散近似迭代法

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

论中国特色家庭教育学自主知识体系构建

湖北民族大学学报(哲学社会科学版) 2024年

作者：朱旭东国建文侯淑晶北京师范大学教育学部儿童发展与家庭教育研究院北京师范大学教师教育研究中心

中国特色家庭教育学是一门立足中国本土家庭、符合中国家庭实际、围绕国家战略需要展开与家庭教育相关的理论研究和实践工作的交叉学科。构建中国特色家庭教育学自主知识体系,有助于推动中国特色家庭教育学学科建设、促进社会主义现代... 详细信息

中国特色家庭教育学是一门立足中国本土家庭、符合中国家庭实际、围绕国家战略需要展开与家庭教育相关的理论研究和实践工作的交叉学科。构建中国特色家庭教育学自主知识体系,有助于推动中国特色家庭教育学学科建设、促进社会主义现代化强国所需要的高质量家庭教育体系建设、保障家校社协同育人工作的有序开展。中国特色家庭教育学的学科体系要构建具有内在一致性的家庭教育知识体系,建立健全学科内外部建制;学术体系建设要注重学术研究理论与方法的主体性和原创性跟进;话语体系建设要凝练中国特色家庭教育的标识性概念,实现政策话语、学术话语和实践话语的交互生成。

关键词：中国特色家庭教育学自主知识体系学科体系学术体系话语体系

循环剪切作用下含可燃冰砂土-开采井界面强度弱化细观机制

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国石油大学学报（自然科学版） 2024年第3期48卷 91-100页

作者：张玉侯劲宇栾雅琳陶子卓李建威东北大学深部工程与智能技术研究院辽宁沈阳110819 中国石油大学(华东)储运与建筑工程学院山东青岛266580 中冶赛迪工程技术股份有限公司重庆400013

含可燃冰砂土呈现埋藏浅、未成岩和强度低的特性。波浪循环荷载作用下含可燃冰砂土-开采井界面弱化特征显著,直接影响井口稳定。采用离散元方法,通过设置波浪循环荷载引起的井筒运动,研究含可燃冰砂土-开采井界面循环剪切力学特性,并从... 详细信息

含可燃冰砂土呈现埋藏浅、未成岩和强度低的特性。波浪循环荷载作用下含可燃冰砂土-开采井界面弱化特征显著,直接影响井口稳定。采用离散元方法,通过设置波浪循环荷载引起的井筒运动,研究含可燃冰砂土-开采井界面循环剪切力学特性,并从细观角度揭示界面宏观弱化机制。结果表明:可燃冰赋存导致含可燃冰砂土-开采井界面呈显著的强度弱化及剪胀体变特征,且可燃冰饱和度越高,弱化及剪胀越显著;原因在于近井区域含可燃冰砂土在循环剪切作用下形成胶结失效区域,大部分颗粒失去胶结约束,同时少部分胶结未失效的可燃冰颗粒与邻近颗粒形成较大粒径团簇,这些颗粒和团簇翻滚错动且无法充分传递荷载,导致界面产生强度弱化和剪胀体变;法向应力与剪切振幅的增大均会加剧界面试样可燃冰颗粒的胶结失效发展,强度弱化现象更为严重。

关键词：含可燃冰砂土-开采井界面循环剪切界面弱化胶结作用离散元

维普期刊数据库博看期刊

考虑安全裕度的多方竞争电网扩展规划方法研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

电测与仪表 2024年

作者：陈永淑洪海生唐娴周先华李荣琳广东电网有限责任公司广州供电局

电网扩展时往往在多方案下进行，不同方案给电网带来的收益与安全裕度并不一致。因此，提出一种平衡电网安全与投资收益的多方竞争规划方法。建立含多个投资人的电网扩展规划数学模型，采用纳什均衡的概念对电网规划博弈建模为具有平衡... 详细信息

电网扩展时往往在多方案下进行，不同方案给电网带来的收益与安全裕度并不一致。因此，提出一种平衡电网安全与投资收益的多方竞争规划方法。建立含多个投资人的电网扩展规划数学模型，采用纳什均衡的概念对电网规划博弈建模为具有平衡约束的平衡问题（equilibrium problem with equilibrium constraints， EPEC）。通过一系列线性化，将EPEC建模为混合整数线性规划问题。将能源短缺概率作为安全裕度评估标准，用于建模电网规划博弈中不确定运行参数的风险。通过安全裕度建模，可以得到在不同风险水平下的电网规划博弈的纳什均衡。电网投资博弈的结果可能不同于社会效益最大化基准模式。设计了支持预算机制来激励投资方，使得电网规划博弈的结果尽可能接近社会效益最大化结果。在两种规模的系统上对所提出的方法进行了评估，测试结果表明，所提出的方法可以使非合作博弈的均衡点向社会成本较小的点靠拢，验证了其有效性。

关键词：电网规划电力安全多方竞争纳什均衡