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一种适用于梅花鹿源性产品鉴定的微量组织DNA提取方法的建立

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特产研究 2023年

作者：任雨贺金美伶宋超中国农业科学院特产研究所

为建立一种适宜梅花鹿源性产品分子鉴定的高效、便捷微量组织基因组DNA提取的方法。本研究分别以鲜品梅花鹿茸、风干梅花鹿茸、烘干梅花鹿茸、鲜品梅花鹿鞭、烘干梅花鹿鞭、风干梅花鹿鞭、鲜品梅花鹿肉、干品梅花鹿尾、梅花鹿血为样本... 详细信息

为建立一种适宜梅花鹿源性产品分子鉴定的高效、便捷微量组织基因组DNA提取的方法。本研究分别以鲜品梅花鹿茸、风干梅花鹿茸、烘干梅花鹿茸、鲜品梅花鹿鞭、烘干梅花鹿鞭、风干梅花鹿鞭、鲜品梅花鹿肉、干品梅花鹿尾、梅花鹿血为样本，采用Chelex-100树脂溶液和蛋白酶K结合的方法提取基因组DNA，并检测其浓度与纯度；以此DNA为模板，扩增梅花鹿线粒体DNA的Dloop区特异性基因，并对PCR扩增产物进行琼脂糖核酸电泳及测序。结果表明，基于Chelex-100树脂提取法获得的基因组DNA模板浓度为52.57～63.39 ng/μL,A260/A280比值为1.75～1.96；梅花鹿线粒体特异性基因扩增产物电泳条带清晰，且长度准确；扩增产物测序，相似性大于95%。结论 Chelex-100树脂提取法能够提取微量梅花鹿组织样本基因组DNA，且此方法低价、简便，适用于梅花鹿源性产品的真伪鉴定。

关键词：梅花鹿 Chelex-100树脂提取法 DNA提取源性产品鉴定

人参蛋白质的提取及其对乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤作用研究

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人参蛋白质的提取及其对乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤作用研究

作者：任雨贺长春中医药大学

学位级别：硕士

目的:为了选出人参蛋白质最佳的提取方法,并对比不同生长年份对人参蛋白质含量的影响;研究人参蛋白质对人乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤作用及作用机制。方法:分别采用丙酮沉淀法、聚乙二醇6000沉淀法、聚乙二醇20000沉淀法、酚提取法、Trizo... 详细信息

目的:为了选出人参蛋白质最佳的提取方法,并对比不同生长年份对人参蛋白质含量的影响;研究人参蛋白质对人乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤作用及作用机制。方法:分别采用丙酮沉淀法、聚乙二醇6000沉淀法、聚乙二醇20000沉淀法、酚提取法、Trizol提取法提取人参水溶性蛋白质;并对3年、4年、5年生人参的蛋白质含量进行对比,采用Bradford方法测定蛋白质含量,SDS-PAGE电泳鉴定蛋白分子量;分别采用不同浓度人参蛋白质作用于人乳腺癌细胞MCF-7,利用CCK-8方法测定细胞增殖活性,PI染色及流式细胞术检测细胞周期的变化,显微镜下常光观察及DAPI染色法观察细胞的凋亡形态,Annexin V/FITC双染法进一步检测细胞的凋亡情况,采用QPCR及Western Blot实验检测基因及蛋白水平的影响,并通过细胞划伤愈合实验及Transwell趋化小室实验检测细胞迁移情况,研究人参蛋白质的作用机制。结果:采用丙酮沉淀法提取得到的人参蛋白质纯度最高,电泳条带最清晰完整,且通过对3、4、5年人参蛋白质含量的对比,发现3年生人参的蛋白质含量最低,5年生人参的蛋白质含量最高;活性研究结果表明,人参蛋白质能够显著性抑制MCF-7细胞的增殖,作用24、48、72h的IC值分别为5.21、2.59、1.11mg/ml;人参蛋白质能够将MCF-7细胞周期阻滞在G0/G1期,并能够使MCF-7细胞出现凋亡形态,诱导细胞发生凋亡,其作用机制是通过影响Bax和Bcl-2在基因、蛋白水平的表达,升高Bax/Bcl-2的比率,进而增加线粒体膜的通透性,从而诱导MCF-7细胞凋亡;且人参蛋白质能够有效抑制MCF-7细胞的迁移。结论:丙酮沉淀法是一种较好的适合人参蛋白质提取的方法,且人参的蛋白质含量随生长年份的增长而增高;人参蛋白对人乳腺癌细胞MCF-7具有显著的抗肿瘤作用,作用机制是通过对MCF-7细胞的周期进行调控,从而抑制了肿瘤细胞增殖;并可促进肿瘤细胞凋亡,其机制是通过线粒体途径影响Bax和Bcl-2的基因表达,从而介导肿瘤细胞发生程序性凋亡;同时抑制肿瘤细胞迁移和生长。本实验为人参蛋白质今后在食品、保健品及药品领域的开发应用提供了可靠地研究依据。

关键词：人参蛋白质 MCF-7细胞细胞增殖细胞周期细胞迁移细胞凋亡作用机制

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人参蛋白质对乳腺癌MCF-7细胞的影响

中成药 2020年第2期42卷 488-491页

作者：任雨贺田静刘淑莹万茜淋长春中医药大学吉林省人参科学研究院吉林长春130117 中国农业科学院特产研究所吉林长春130112 中国科学院长春应用化学研究所吉林长春130022 吉林农业大学食药用菌教育部工程研究中心吉林长春130118

目的研究人参蛋白质对乳腺癌MCF⁃7细胞的影响。方法采用CCK⁃8法测定不同质量浓度(0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mg/mL)人参蛋白质分别作用MCF⁃7细胞24、48、72 h后的细胞增殖抑制;采用流式细胞术检测人参蛋白质处理48 h后细胞的周期... 详细信息

目的研究人参蛋白质对乳腺癌MCF⁃7细胞的影响。方法采用CCK⁃8法测定不同质量浓度(0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mg/mL)人参蛋白质分别作用MCF⁃7细胞24、48、72 h后的细胞增殖抑制;采用流式细胞术检测人参蛋白质处理48 h后细胞的周期;采用DAPI染色法观察人参蛋白质处理48 h后的细胞凋亡形态;Annexin V/FITC双染法检测人参蛋白质处理48 h后的细胞凋亡。结果人参蛋白质能抑制MCF⁃7细胞的增殖,且呈浓度及时间依赖性,作用24、48、72 h后的IC50值分别为5.21、2.60、1.11 mg/mL。人参蛋白质可将MCF⁃7细胞周期阻滞在G1期,并能诱导MCF⁃7细胞的凋亡。结论人参蛋白质对人乳腺癌MCF⁃7细胞具有显著地抗肿瘤作用。

关键词：人参蛋白质人乳腺癌MCF⁃7细胞细胞增殖细胞周期细胞凋亡

人参皂苷Rc、Rd、Re对神经胶质瘤细胞增殖作用的影响

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中成药 2020年第3期42卷 751-754页

作者：田静任雨贺刘淑莹万茜淋长春中医药大学吉林省人参科学研究院吉林长春130117 中国科学院长春应用化学研究所吉林长春130022

目的探究人参皂苷Rc、Rd、Re对神经胶质瘤细胞增殖作用的影响。方法采用CCK-8法分别测定不同浓度人参皂苷Rc、Rd和Re作用SHG-44和U251MG细胞24、48、72 h后对细胞增殖的影响,计算细胞增殖的抑制率。结果人参皂苷Rc(1~100μg/mL)对SHG-4... 详细信息

目的探究人参皂苷Rc、Rd、Re对神经胶质瘤细胞增殖作用的影响。方法采用CCK-8法分别测定不同浓度人参皂苷Rc、Rd和Re作用SHG-44和U251MG细胞24、48、72 h后对细胞增殖的影响,计算细胞增殖的抑制率。结果人参皂苷Rc(1~100μg/mL)对SHG-44细胞抑制增殖作用较弱,人参皂苷Rc(12.5~200μg/mL)对U251MG细胞抑制增殖作用也较弱;人参皂苷Rd(100μg/mL)处理SHG-44细胞72 h后,细胞增殖抑制率可达(97.28±0.94)%;人参皂苷Rd(200μg/mL)对处理U251MG细胞24、48、72 h后,细胞增殖抑制率分别为(94.51±1.86)%、(93.86±0.40)%、(95.32±0.68)%;人参皂苷Re(200.00μg/mL)作用U251MG细胞72 h后,细胞增殖抑制率为(51.96±2.36)%。结论人参皂苷Rd具有抑制人神经胶质瘤SHG-44和U251MG细胞增殖作用,起到显著的抗肿瘤作用。

关键词：人参皂苷Rc 人参皂苷Rd 人参皂苷Re 神经胶质瘤细胞细胞增殖

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不同人参炮制品的挥发性成分研究

食品安全质量检测学报 2022年第8期13卷 2687-2693页

作者：赵卉冯志伟崔丽丽宋超王兆森苏丽敏陈曦孙紫薇任雨贺中国农业科学院特产研究所长春130112 吉林参王植保科技有限公司白山134500

目的阐明不同人参炮制品中挥发性成分(volatile compounds,VOC)的差异。方法采用顶空固相微萃取(headspace solid-phase microextraction,HS-SPME)与气相色谱-质谱法(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)相结合的分析方法,测定生晒参(dried raw ginseng,DRG)、红参(red ginseng,RG)、模压红参(moulded red ginseng,MRG)中的挥发性成分含量,并通过主成分分析(principal component analysis,PCA)对3种炮制品进行评价。结果质谱结果鉴定出38种成分,主要是萜烯类、萜烯醇类和烷烃类。生晒参、红参和模压红参的α-甘香烯、β-人参烯、β-古芸烯、β-合金欢烯、α-新丁香三环烯、β-石竹烯、γ-榄香烯、香树烯等共有峰明显,也同时存在差异性成分,如佛术烯、α-马榄烯、喇叭烯、β-花柏烯、杜松醇。主成分分析得分图显示3种炮制品在主成分空间中的分布十分分散,说明生晒参、红参和模压红参的挥发性成分有差异。结论 3种人参炮制品挥发性成分的物质组成相同,倍半萜类是其挥发性成分的主要物质。经过加热倍半萜类结构相似的化合物可以相互转化,具体成分和含量有一定差异。

关键词：生晒参红参模压红参挥发性成分主成分分析顶空固相微萃取

2015年版《中国药典》(一部)含丹参成方制剂的归类分析

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中成药 2018年第12期40卷 2770-2775页

作者：任雨贺田静刘淑莹万茜淋长春中医药大学吉林省人参科学研究院吉林长春130117 中国科学院长春应用化学研究所吉林长春130022

本文从选材、剂型、提取方法、功能主治、注意事项等方面,对2015年版《中国药典》(一部)含丹参成方制剂进行归类分析,发现该类制剂共有146种。其中,选材除丹参单独与其他药物配伍外,还有与其他参类共同入药;味数以15味以下为主;大多采... 详细信息

本文从选材、剂型、提取方法、功能主治、注意事项等方面,对2015年版《中国药典》(一部)含丹参成方制剂进行归类分析,发现该类制剂共有146种。其中,选材除丹参单独与其他药物配伍外,还有与其他参类共同入药;味数以15味以下为主;大多采用水煎法提取丹参中有效成分(67种);剂型大多为片剂(35种)和胶囊剂(46种);用法大多为口服(143种);功效大多用于活血化瘀,可为丹参及其配伍应用的深入研究提供理论依据。

关键词： 2015年版《中国药典》(一部) 丹参成方制剂

2015年版《中国药典》一部中含三七成方制剂的归纳与分析

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中成药 2019年第5期41卷 1135-1139页

作者：田静任雨贺苏蕊刘淑莹万茜淋长春中医药大学吉林省人参科学研究院吉林长春130117 中国科学院长春应用化学研究所吉林长春130022

本文对2015年版《中国药典》一部中含三七成方制剂的中药味数、剂型、制备方法、功能与主治、注意事项等方面进行归纳综述,发现共收载成方制剂98种,中药味数以15味以下居多,剂型以胶囊剂(38种)、片剂(21种)为主,服用方法大多为口服(91... 详细信息

本文对2015年版《中国药典》一部中含三七成方制剂的中药味数、剂型、制备方法、功能与主治、注意事项等方面进行归纳综述,发现共收载成方制剂98种,中药味数以15味以下居多,剂型以胶囊剂(38种)、片剂(21种)为主,服用方法大多为口服(91种),制法以将三七粉碎成细粉直接入药(67种)为主,功能主治主要为活血化瘀、消肿止痛、散瘀止血。由此认为,可根据2015年版《中国药典》一部中含三七成方制剂来挖掘新的临床应用,并开发相关新药。

关键词：三七成方制剂 2015年版《中国药典》一部

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香菇多糖的药理活性研究进展

中国药房 2018年第8期29卷 1140-1144页

作者：万茜淋任雨贺刘淑莹长春中医药大学/吉林省人参科学研究院长春130117 中国科学院长春应用化学研究所长春130022

目的:为香菇多糖的相关中药制剂及其他功能产品的研发和应用提供参考。方法:以"香菇多糖""药理活性""作用机制""Lentinan""Pharmacological action"等为关键词,检索在Pub Med、中国期刊全文数据库、万方数据库等数据库中收录的1969-201... 详细信息

目的:为香菇多糖的相关中药制剂及其他功能产品的研发和应用提供参考。方法:以"香菇多糖""药理活性""作用机制""Lentinan""Pharmacological action"等为关键词,检索在Pub Med、中国期刊全文数据库、万方数据库等数据库中收录的1969-2017年发表的关于香菇多糖药理活性的研究文献,对其研究进展进行总结和综述。结果与结论:共获得国内、外文献61篇。研究结果显示,香菇多糖表现出免疫调节、抗肿瘤、抗菌和抗病毒、抗寄生虫、神经系统保护和抗抑郁、抗疲劳、抗氧化和抗衰老、抗辐射等多方面的药理活性。其具有广阔的应用前景,但相关的药理作用机制很多仍不明确,亟待进一步的基础研究揭示。对香菇多糖各方面药理作用机制的深入研究,将为香菇多糖的相关中药制剂及其他功能产品的研发和应用提供重要的理论指导和参考依据。

关键词：香菇多糖药理活性作用机制研究进展

液相色谱-串联质谱法测定鹿肉中诺氟沙星的不确定度评估

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特产研究 2023年

作者：郭鸿莹赵天星王玉方崔丽丽任雨贺毕融冰张馨月殷帆赵卉中国农业科学院特产研究所

采用液相色谱串联质谱法测定鹿肉中诺氟沙星的残留量，对其试验过程中的重要环节和结果进行不确定度评估。分析了其不确定度的来源，建立不确定度的数学模型。结果表明，当鹿肉中诺氟沙星的含量为97.9μg/kg时，其扩展不确定度为1.08μg... 详细信息

采用液相色谱串联质谱法测定鹿肉中诺氟沙星的残留量，对其试验过程中的重要环节和结果进行不确定度评估。分析了其不确定度的来源，建立不确定度的数学模型。结果表明，当鹿肉中诺氟沙星的含量为97.9μg/kg时，其扩展不确定度为1.08μg/kg(K=2)。其不确定度的主要来源为样品称量和样品中添加回收率，在实际试验操作中，要提高检测人员的操作技能，增加平行样品的测定，定期校准仪器，并确保其精度和灵敏度，以确保试验结果更加真实可靠。

关键词：鹿肉诺氟沙星液相色谱-串联质谱法不确定度