人参蛋白质的提取及其对乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤作用研究

作     者：任雨贺 

作者单位：长春中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘淑莹

授予年度：2019年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：人参蛋白质 MCF-7细胞 细胞增殖 细胞周期 细胞迁移 细胞凋亡 作用机制 

摘      要：目的:为了选出人参蛋白质最佳的提取方法,并对比不同生长年份对人参蛋白质含量的影响;研究人参蛋白质对人乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤作用及作用机制。方法:分别采用丙酮沉淀法、聚乙二醇6000沉淀法、聚乙二醇20000沉淀法、酚提取法、Trizol提取法提取人参水溶性蛋白质;并对3年、4年、5年生人参的蛋白质含量进行对比,采用Bradford方法测定蛋白质含量,SDS-PAGE电泳鉴定蛋白分子量;分别采用不同浓度人参蛋白质作用于人乳腺癌细胞MCF-7,利用CCK-8方法测定细胞增殖活性,PI染色及流式细胞术检测细胞周期的变化,显微镜下常光观察及DAPI染色法观察细胞的凋亡形态,Annexin V/FITC双染法进一步检测细胞的凋亡情况,采用QPCR及Western Blot实验检测基因及蛋白水平的影响,并通过细胞划伤愈合实验及Transwell趋化小室实验检测细胞迁移情况,研究人参蛋白质的作用机制。结果:采用丙酮沉淀法提取得到的人参蛋白质纯度最高,电泳条带最清晰完整,且通过对3、4、5年人参蛋白质含量的对比,发现3年生人参的蛋白质含量最低,5年生人参的蛋白质含量最高;活性研究结果表明,人参蛋白质能够显著性抑制MCF-7细胞的增殖,作用24、48、72h的IC值分别为5.21、2.59、1.11mg/ml;人参蛋白质能够将MCF-7细胞周期阻滞在G0/G1期,并能够使MCF-7细胞出现凋亡形态,诱导细胞发生凋亡,其作用机制是通过影响Bax和Bcl-2在基因、蛋白水平的表达,升高Bax/Bcl-2的比率,进而增加线粒体膜的通透性,从而诱导MCF-7细胞凋亡;且人参蛋白质能够有效抑制MCF-7细胞的迁移。结论:丙酮沉淀法是一种较好的适合人参蛋白质提取的方法,且人参的蛋白质含量随生长年份的增长而增高;人参蛋白对人乳腺癌细胞MCF-7具有显著的抗肿瘤作用,作用机制是通过对MCF-7细胞的周期进行调控,从而抑制了肿瘤细胞增殖;并可促进肿瘤细胞凋亡,其机制是通过线粒体途径影响Bax和Bcl-2的基因表达,从而介导肿瘤细胞发生程序性凋亡;同时抑制肿瘤细胞迁移和生长。本实验为人参蛋白质今后在食品、保健品及药品领域的开发应用提供了可靠地研究依据。