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细胞周期分析新方法

分析化学 2019年第9期47卷 1293-1301页

作者：方涵书郎明非孙晶大连大学医学院大连大学环境与化学工程学院

细胞周期是细胞生命活动的基本过程,对细胞周期的分析能更深入地了解疾病发生的本质。目前,分析细胞周期的方法以流式细胞术为主,主要是通过检测细胞内DNA含量和细胞周期特异性蛋白而分析细胞周期。随着分析技术的发展,细胞周期分析在... 详细信息

细胞周期是细胞生命活动的基本过程,对细胞周期的分析能更深入地了解疾病发生的本质。目前,分析细胞周期的方法以流式细胞术为主,主要是通过检测细胞内DNA含量和细胞周期特异性蛋白而分析细胞周期。随着分析技术的发展,细胞周期分析在图像分析、单细胞分析、减少样本量、提高通量等方面不断地提高和改进,近年出现了许多分析细胞周期的新方法,如成像流式细胞术、质谱流式细胞术、微流控技术、拉曼光谱法等,这些方法极大地丰富了细胞周期的检测方法,提高了细胞周期测量的精确度。本文对细胞周期的新分析方法进行了介绍,并对其发展方向进行了展望。

关键词：细胞周期细胞周期蛋白 DNA含量微流控技术流式细胞术评述

COX6B2在胃癌组织中高表达并影响患者的远期预后:基于抑制p53信号调控胃癌细胞的增殖及细胞周期

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南方医科大学学报 2024年第2期44卷 289-297页

作者：沈梦迪赵娜邓晓晶邓敏蚌埠医学院第一附属医院消化内科安徽蚌埠233004 蚌埠医学院安徽省生化药物研究工程中心安徽蚌埠233030

目的分析COX6B2在胃癌组织中的表达对患者远期预后的影响及其作用机制。方法基于公共数据库、患者病历资料分析COX6B2在胃癌和癌旁组织中表达量及其对患者预后的影响;富集分析COX6B2在胃癌中可能发挥的作用;应用慢病毒转染技术干预COX6B... 详细信息

目的分析COX6B2在胃癌组织中的表达对患者远期预后的影响及其作用机制。方法基于公共数据库、患者病历资料分析COX6B2在胃癌和癌旁组织中表达量及其对患者预后的影响;富集分析COX6B2在胃癌中可能发挥的作用;应用慢病毒转染技术干预COX6B2的表达;通过CCK-8、流式细胞术及免疫印迹实验验证其生物学功能。结果TCGA数据库、免疫组化、免疫印迹和荧光定量PCR检测显示,COX6B2在胃癌组织中高表达(P细胞周期的调控等;CCK-8和流式检测显示,上调COX6B2促进细胞增殖,通过增加G1/S期细胞比例调控细胞周期(P细胞中p53和p21的表达(P细胞周期而影响胃癌恶性增殖的过程。

关键词：胃癌 COX6B2 细胞周期细胞增殖远期预后 p53

PCID2在胃癌组织中高表达并通过调控细胞周期进程和增殖影响患者预后

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南方医科大学学报 2024年第2期44卷 324-332页

作者：张诺张震张雨路宋雪张小凤李静左芦根胡建国蚌埠医科大学第一附属医院检验科安徽蚌埠233000 蚌埠医科大学第一附属医院胃肠外科安徽蚌埠233000 蚌埠医科大学第一附属医院炎症相关性疾病基础与转化研究安徽省重点实验室安徽蚌埠233000 蚌埠医科大学第一附属医院中心实验室安徽蚌埠233000 蚌埠医科大学临床医学院安徽蚌埠233000

目的探讨扩增基因PCI结构域2(PCID2)在胃癌中的表达情况及其对细胞周期进程和增殖的影响,并分析其可能的分子机制。方法纳入2012年1月~2016年12月在我院接受胃癌根治术的患者100例,检测胃癌和癌旁组织中PCID2的表达差异;统计学分析PCID... 详细信息

目的探讨扩增基因PCI结构域2(PCID2)在胃癌中的表达情况及其对细胞周期进程和增殖的影响,并分析其可能的分子机制。方法纳入2012年1月~2016年12月在我院接受胃癌根治术的患者100例,检测胃癌和癌旁组织中PCID2的表达差异;统计学分析PCID2表达水平对胃癌进展及术后5年生存率的影响;采用GO富集分析预测PCID2参与胃癌恶性进展的可能作用途径;体外采用慢病毒转染特异性敲低和过表达胃癌细胞系(MGC-803)中PCID2表达,并分析其对细胞增殖及周期的影响;进一步通过裸鼠移植瘤模型进行在体验证;最后通过组织样本分析结合体内外研究,分析PCID2影响胃癌细胞的分子机制。结果相较于癌旁组织,PCID2在胃癌组织中高表达(P细胞周期进程有关(P细胞增殖、G1/S期转变和细胞周期相关蛋白(CyclinD1、CDK6)的表达,而敲低则反之(P细胞周期调控蛋白p27、p16的表达,敲低则相反(P细胞增殖和细胞周期进程。

关键词：胃癌 PCID2 预后细胞周期增殖

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生物工程学报 2023年第4期39卷 1525-1547页

作者：潘剑锋尚方正马荣戎友俊张燕军内蒙古农业大学动物科学学院内蒙古呼和浩特010018 农业农村部肉羊遗传育种重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古自治区动物遗传育种与繁殖重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古自治区山羊遗传育种工程技术研究中心内蒙古呼和浩特010018

在细胞发育过程中,细胞周期起着至关重要的作用。细胞周期进程主要受细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin dependent kinase,CDK)、周期蛋白和内源性CDK抑制剂(cyclin-dependent kinase inhibitors,CKI)调控。其中,CDK是主要的细胞周期调节因... 详细信息

在细胞发育过程中,细胞周期起着至关重要的作用。细胞周期进程主要受细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin dependent kinase,CDK)、周期蛋白和内源性CDK抑制剂(cyclin-dependent kinase inhibitors,CKI)调控。其中,CDK是主要的细胞周期调节因子,可与周期蛋白结合形成周期蛋白-CDK复合物,从而使数百种底物磷酸化,调控分裂间期和有丝分裂进程。各类细胞周期蛋白的活性异常,可引起不受控制的癌细胞增殖,导致癌症的发生与发展。因此,了解CDK的活性变化情况、周期蛋白-CDK的组装以及CKI的作用,将有助于了解细胞周期进程中潜在的调控过程,为癌症与疾病的治疗和CKI治疗药物的研发提供基础。本文关注了CDK激活和灭活的关键事件,并总结了周期蛋白-CDK在特定时期及位置的调控过程,以及相关CKI治疗药物在癌症及疾病中的研究进展,最后简单阐述了细胞周期进程研究面临的问题和存在的挑战,以期为后续细胞周期进程的深入研究提供参考和思路。

关键词：周期蛋白依赖性激酶周期蛋白周期蛋白依赖性激酶抑制剂癌症细胞周期

中介体复合物亚基8在胃癌中的表达及其对临床预后和细胞周期的影响

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中国医学科学院学报 2023年第6期45卷 886-896页

作者：王秋生张震杨子张小凤葛思堂左芦根蚌埠医学院第一附属医院胃肠外科安徽蚌埠233000 蚌埠医学院第一附属医院中心实验室安徽蚌埠233000 蚌埠医学院第一附属医院炎症相关性疾病基础与转化研究安徽省重点实验室安徽蚌埠233000

目的探讨中介体复合物亚基8(MED8)在胃癌中的表达及其与预后的关系和对细胞周期的影响。方法采用公共数据库分析MED8在胃癌及癌旁组织的表达及其与患者预后的关系,并纳入2012年6月至2017年7月于蚌埠医学院第一附属医院行胃癌根治术的10... 详细信息

目的探讨中介体复合物亚基8(MED8)在胃癌中的表达及其与预后的关系和对细胞周期的影响。方法采用公共数据库分析MED8在胃癌及癌旁组织的表达及其与患者预后的关系,并纳入2012年6月至2017年7月于蚌埠医学院第一附属医院行胃癌根治术的104例患者进行验证。采用受试者工作特征曲线评估MED8对患者术后5年生存率的预测价值;采用生物信息学方法预测MED8在胃癌中的生物学功能;采用慢病毒转染调控胃癌细胞系(MGC-803)中MED8的水平,流式细胞学分析MED8表达水平对MGC-803细胞G1/S期转换的影响。免疫印迹实验检测MED8表达水平对MGC-803细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶4(Cdk4)和G1/S-特异性周期蛋白-D1(CyclinD1)蛋白表达的影响。结果MED8在胃癌组织中高表达与患者不良预后相关(P细胞周期进程。流式细胞实验表明上调MED8表达可促进MGC-803细胞从G1期进入S期(P细胞中Cdk4和CyclinD1蛋白水平均显著升高(P均细胞周期G1/S期转换影响疾病进展及预后。

关键词：胃癌中介体复合物亚基8 生物信息学预后细胞周期

脱醇红酒抑制肝细胞癌的发生和发展:基于诱导细胞周期的阻滞和凋亡

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南方医科大学学报 2023年第8期43卷 1297-1305页

作者：兰玉王凯风蓝智贤周何琪孙剑器官衰竭防治国家重点实验室广东省病毒性肝炎研究重点实验室南方医科大学南方医院感染内科广东广州510515

目的探讨脱醇红酒对肝细胞癌(HCC)发生发展的抑制作用,并初步探索其可能的机制。方法不同浓度的脱醇红酒(0、5、10、25、50和100μL/mL)处理人肝癌细胞(Huh7,HepG2和SK-Hep-1)后,采用CCK-8和克隆形成实验分别检测各组细胞的增值活性和... 详细信息

目的探讨脱醇红酒对肝细胞癌(HCC)发生发展的抑制作用,并初步探索其可能的机制。方法不同浓度的脱醇红酒(0、5、10、25、50和100μL/mL)处理人肝癌细胞(Huh7,HepG2和SK-Hep-1)后,采用CCK-8和克隆形成实验分别检测各组细胞的增值活性和克隆形成能力。构建裸鼠皮下瘤模型,分为实验组(脱醇红酒,300μL/d)和对照组,干预4周后对比两组肿瘤体积。构建化学诱导小鼠肝癌模型,分为实验组(脱醇红酒,300μL/d)和对照组,干预6周后对比两组肝脏肿瘤数量、最大肿瘤直径和肝体比。脱醇红酒(75μL/mL)处理48 h后,利用RNA-seq对Huh7细胞转录组测序,基因集富集分析(GSEA)观察基因集及通路的变化;流式细胞术检测脱醇红酒(75μL/mL)干预后Huh7细胞周期和凋亡变化。结果在体外,脱醇红酒呈浓度和时间依赖性地抑制肝癌细胞的增殖活性,呈浓度依赖性地抑制其克隆形成能力。在体内,相比于对照组,脱醇红酒显著抑制实验组裸鼠皮下瘤的体积(P细胞内有634个基因上调和478个基因下调(|log2FC|≥2,Q≤0.05)。基因集富集分析发现,脱醇红酒能够诱导细胞周期通路相关基因集显著下调(包括E2F Targets、G2M Checkpoint、MYC Targets等)和细胞凋亡通路相关基因集上调;流式细胞检测结果表明,脱醇红酒的干预使Huh7细胞G1期阻滞,同时诱导细胞凋亡。结论脱醇红酒对HCC的发生发展具有抑制作用,其机制可能与细胞周期和凋亡相关通路介导的肝癌细胞G1期阻滞和细胞凋亡有关。

关键词：脱醇红酒肝细胞癌多酚 RNA-seq 细胞周期细胞凋亡

葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基通过诱导细胞周期阻滞抑制肝癌细胞增殖

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中华肝脏病杂志 2022年第2期30卷 213-219页

作者：林雪潘璇明彭梓珂汪凯唐霓重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016 重庆市育才中学校重庆400050

目的葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基(G6PC)重组腺病毒,探究G6PC对肝癌细胞增殖及细胞周期调控的影响。方法构建重组腺病毒AdG6PC,将Huh7细胞及SK-Hep1细胞设为Mock组、AdGFP组、AdG6PC组。采用细胞增殖实验及克隆形成实验观察其对肝癌细胞增... 详细信息

目的葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基(G6PC)重组腺病毒,探究G6PC对肝癌细胞增殖及细胞周期调控的影响。方法构建重组腺病毒AdG6PC,将Huh7细胞及SK-Hep1细胞设为Mock组、AdGFP组、AdG6PC组。采用细胞增殖实验及克隆形成实验观察其对肝癌细胞增殖的影响,transwell实验及划痕实验观察其对肝癌细胞侵袭和迁移的影响,细胞周期流式分析过表达G6PC对肝癌细胞增殖周期的影响,蛋白质印迹法检测过表达G6PC对肝癌细胞周期蛋白表达的影响。结果成功构建重组腺病毒AdG6PC。Huh7细胞及SK-Hep1细胞增殖实验示AdG6PC组增殖细胞数明显低于其他2组(P细胞中过表达G6PC可明显抑制肝癌细胞的增殖能力;transwell实验结果表明细胞AdG6PC组细胞迁移数明显少于其他2组(P细胞侵袭和迁移。细胞周期流式分析表明,过表达G6PC显著抑制huh7细胞的G1/S期的转变。蛋白质印迹法结果示过表达G6PC可下调细胞增殖周期相关蛋白的表达。结论G6PC通过抑制肝癌细胞周期G1/S期转换及相关周期蛋白的表达抑制肝癌细胞增殖,同时G6PC也可抑制肝癌细胞迁移。

关键词：肝细胞癌细胞增殖细胞周期葡萄糖-6-磷酸酶催化亚基

细胞周期偶联的归巢CRISPR生成条形码技术的研究

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细胞周期偶联的归巢CRISPR生成条形码技术的研究

作者：刘絮吟中国科学技术大学

学位级别：硕士

不断发展的细胞谱系示踪技术帮助解答了从水蛭卵裂的固定模式到肿瘤中克隆竞争力差异等诸多生物问题。利用CRISPR/Cas9,可在细胞基因组指定位点处逐渐引入的多样性突变以作为记录细胞谱系的条形码,在追踪过程结束后可通过测序读取并依... 详细信息

不断发展的细胞谱系示踪技术帮助解答了从水蛭卵裂的固定模式到肿瘤中克隆竞争力差异等诸多生物问题。利用CRISPR/Cas9,可在细胞基因组指定位点处逐渐引入的多样性突变以作为记录细胞谱系的条形码,在追踪过程结束后可通过测序读取并依此重建细胞谱系发育树。该技术目前已广泛应用于探索组织器官形成,疾病发生与演变,损伤修复与再生等科学问题,取得了无数令人瞩目的成果。然而CRISPR谱系示踪技术在记录容量与记录时长等方面仍面临瓶颈,难以长期追踪和精确重建复杂的多细胞发育过程,阻碍了对关键的调控和命运决定节点的深入了解。对此,研究者采取了增加记录位点数,药物诱导控制作用起始及改变核酸酶种类等方式,在不同程度上改善了谱系记录能力。其中,通过改造向导RNA令其可以在自身基因座位点处反复作用以引发多轮突变的归巢CRISPR谱系示踪技术脱颖而出。本文中,我们向归巢CRISPR系统中引入细胞周期关联控制,来应对当前方法中CRISPR系统持续活跃导致的信息记录容量快速衰减和记录噪声干扰问题。我们构建并验证了 6种可在自身基因组座位处产生突变的归巢向导RNA,并选取Cas9蛋白降解、mRNA转录与降解三个环节,分别尝试与细胞周期振荡器关联。我们将Geminin片段引入Cas9降解控制,证实了融合蛋白具有核酸酶活性并与归巢向导RNA兼容。Cas9hGem融合蛋白在某些程度上能够特异性地偏好S/G2/M期而在G0/G1期受到削弱,证实了细胞周期偶联降解Cas9的可行性。另一方面,我们发现CCNE1或MKI67启动子片段均可引起下游荧光素酶报告基因在不同细胞周期的特异性表达。其中,MKI67启动子片段开启转录水平相对更高,但CCNE1启动子作用窗口更窄,存在G1/S期的表达峰。我们还进一步探索了 CDK1、TOP2A、UBE2C及FBXO5四种基因的3’端非翻译区对细胞周期偶联的表达调控,结果排除了该策略调控mRNA降解的可行性。本文的研究初步探索了运用细胞周期偶联来控制归巢CRISPR谱系示踪系统的可行性,验证了候选的归巢向导RNA产生谱系标记码的能力,为深入探索干细胞分化及肿瘤发展等体内外应用提供了一个新的方法学框架。

关键词：谱系示踪归巢CRISPR 细胞周期蛋白表达调控

姜黄素对人急性髓系白血病细胞株K562增殖、凋亡及细胞周期的影响

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中国实验血液学杂志 2022年第5期30卷 1343-1347页

作者：李莹莹刘红春张倾冯睿婷宋银森明亮郑州人民医院转化医学研究中心河南郑州450000 郑州大学第一附属医院检验科河南郑州450002

目的:探讨姜黄素对人急性髓系白血病细胞株K562增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法:取对数生长期人急性髓系白血病K562细胞,用MTT法测定细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法和Weste... 详细信息

目的:探讨姜黄素对人急性髓系白血病细胞株K562增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法:取对数生长期人急性髓系白血病K562细胞,用MTT法测定细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法和Western blot分别检测Bax、BCL-2和Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果:姜黄素10、20和40μmol/L组培养24 h和48 h细胞增殖抑制率均高于对照组(姜黄素0μmol/L),且细胞增殖抑制率呈浓度-时间依赖性(r=0.879,r=0.914)。姜黄素10、20和40μmol/L组G_(0)/G_(1)细胞比例和细胞凋亡率均高于对照组,且呈药物浓度依赖性(r=0.856,r=0.782)。姜黄素10、20和40μmol/L组Bax和Caspase-3 mRNA表达高于对照组,而BCL-2 mRNA表达低于对照组,且呈药物浓度依赖性(r=0.861,r=0.748,r=-0.817)。姜黄素10、20和40μmol/L组Bax蛋白表达灰度值高于对照组,而BCL-2和Caspase-3蛋白表达灰度值低于对照组,且呈药物浓度依赖性(r=0.764,r=-0.723,r=-0.831)。结论:姜黄素可抑制人急性髓系白血病细胞株K562细胞增殖,将细胞周期阻滞于G_(0)/G_(1)期,促进细胞凋亡,且通过调控Bax、BCL-2和Caspase-3而诱导K562细胞凋亡。

关键词：姜黄素急性髓系白血病 K562细胞增殖细胞周期凋亡