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里氏木霉木聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母中高效表达的研究

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里氏木霉木聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母中高效表达的研究

作者：仲伟麒东北农业大学

学位级别：硕士

木聚糖是半纤维素中含量最丰富的一种组分,在植物细胞壁中的含量仅次于纤维素,约占细胞干重的35%。它的存在使谷物中的营养物质不能被充分暴露于动物消化液的表面,进而影响动物的消化吸收,降低了饲料的营养价值。木聚糖酶(1,4-β-D-xyla... 详细信息

木聚糖是半纤维素中含量最丰富的一种组分,在植物细胞壁中的含量仅次于纤维素,约占细胞干重的35%。它的存在使谷物中的营养物质不能被充分暴露于动物消化液的表面,进而影响动物的消化吸收,降低了饲料的营养价值。木聚糖酶(1,4-β-D-xylan xylanohydrlase,EC 3.***.1.8)通过内切方式水解木聚糖分子中的β-1,4-木糖苷键,水解产物以木寡糖和木二糖为主。随着木聚糖酶在造纸、食品、饲料等领域的成功应用,它已成为酶制剂产业的一个重要产品,在生物转化、食品、饲料、医药、能源、造纸、纺织等行业中有着广泛的应用前景,具有很大的商业开发价值。但是目前传统的木聚糖酶生产方法产量较低,限制了其广泛应用,应用基因工程技术可望解决这一问题。本研究以里氏木霉(Trichoderma reesei)QM9414菌株为基因供体,克隆木聚糖酶基因xyn2,分别构建其大肠杆菌表达载体和酵母表达载体,并分别转到大肠杆菌和毕赤酵母中。进一步对表达的木聚糖酶进行酶学分析,为大规模工业生产和应用奠定基础。主要研究结果如下:以木聚糖为诱导剂诱导里氏木霉表达木聚糖酶,确定了最佳诱导时间为72小时,标准状态下最大酶活为6.32IU/ml。里氏木霉木聚糖酶最适pH值为4.0,最适温度为50℃。采用RT-PCR方法克隆到了里氏木霉木聚糖酶基因xyn2。测序得到xyn2基因的序列与GeneBank上编号为U24191的xyn2基因序列完全相同。采用PCR法,以里氏木霉DNA为模板克隆了里氏木霉木聚糖酶基因。测序得到xyn2基因的DNA序列,与xyn2基因的cDNA序列进行了比对,确定了xyn2基因含有一个内含子。构建了xyn2基因的大肠杆菌表达载体pEK1。将pEK1转化至大肠杆菌BL21中,进行诱导表达。IPTG诱导5小时,标准状态下最大酶活为42.28IU/ml。对表达的木聚糖酶性质进行了分析,确定最适pH值为6.5,最适温度为45℃。构建了xyn2基因毕赤酵母表达载体pPIC9-xyn2。摇瓶培养96h标准状态下最大酶活为208.12IU/ml,比出发菌株酶活提高了约33倍。对重组木聚糖酶性质进行了分析,确定最适pH值为5.0,最适温度为55℃。

关键词：里氏木霉木聚糖酶基因克隆毕赤酵母表达

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乳糖酶及其基因工程研究进展

中国乳品工业 2008年第3期36卷 47-50页

作者：仲伟麒宋庆凤程涛李杰东北农业大学生命学院黑龙江哈尔滨150030 东北农业大学食品学院黑龙江哈尔滨150030

人体内乳糖酶缺乏造成乳糖不耐受,在乳和乳制品中添加乳糖酶是解决乳糖不耐受的主要方法。而传统的乳糖酶工业生产方法已经不能满足快速增长的需求。通过基因工程方法大规模生产安全、高纯度的乳糖酶将是未来乳糖酶生产的主要方式。对... 详细信息

人体内乳糖酶缺乏造成乳糖不耐受,在乳和乳制品中添加乳糖酶是解决乳糖不耐受的主要方法。而传统的乳糖酶工业生产方法已经不能满足快速增长的需求。通过基因工程方法大规模生产安全、高纯度的乳糖酶将是未来乳糖酶生产的主要方式。对乳糖酶及其性质进行了简要介绍,在此基础上介绍了基因工程技术生产乳糖酶的研究现状和发展前景,为乳糖酶的研究和生产开拓了思路。

关键词：乳糖酶基因工程乳糖不耐受

黑龙江省2010-2019年猩红热流行病学调查分析

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中国卫生工程学 2020年第6期19卷 865-866,869页

作者：苏怡仲伟麒朱玉良黑龙江省疾病预防控制中心传染病预防控制所黑龙江哈尔滨150000

目的分析黑龙江省2010-2019年猩红热发病流行特征,为做好本地猩红热传染病预防控制工作及开展相关研究提供科学依据。方法采用描述性流行病学方法,对中国传染病报告信息管理系统报告的黑龙江省2010-2019年猩红热病例资料进行整理,分析... 详细信息

目的分析黑龙江省2010-2019年猩红热发病流行特征,为做好本地猩红热传染病预防控制工作及开展相关研究提供科学依据。方法采用描述性流行病学方法,对中国传染病报告信息管理系统报告的黑龙江省2010-2019年猩红热病例资料进行整理,分析发病数、发病率、地区、季节和人群分布特征。结果2010-2019年共报告猩红热病例34456例,年平均发病率为9.02/10万。其中2011年报告发病数最多(7283例),发病率最高(19.01/10万);2013年发病率最低(5.77/10万),猩红热的发病呈整体下降趋势。从月份分布看,全年均有发病而且呈现出较为典型的双峰型特征。猩红热病例主要是学生(14201例,41.21%),其次是幼托儿童(11399例,33.08%)。大多数猩红热病例为3~9岁(29807例,86.51%)。2010-2019年黑龙江省13个地级市均有病例报告,年平均发病率在3.99/10万~18.95/10万之间。结论2010-2019年黑龙江省猩红热发病率呈下降趋势,但全省13个地级市均有病例报告;发病病例主要是学生,其次是幼托儿童;托幼机构和小学是疫情防控的重点场所。

关键词：猩红热流行特征预防控制

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性病门诊梅毒患者治疗后转归情况分析

中国艾滋病性病 2016年第4期22卷 279-281页

作者：赵延明谢艳光仲伟麒张东金巍王晓杰黑龙江省性病防治中心哈尔滨150001

目的研究梅毒血清固定患者与血清转阴患者临床情况的关系。方法选取就诊于黑龙江省性病防治中心性病门诊的梅毒患者197例,借助梅毒患者血清固定调查记录表及血清阴转调查记录表收集资料,进行血清固定与血清转阴患者的临床分析。结果197... 详细信息

目的研究梅毒血清固定患者与血清转阴患者临床情况的关系。方法选取就诊于黑龙江省性病防治中心性病门诊的梅毒患者197例,借助梅毒患者血清固定调查记录表及血清阴转调查记录表收集资料,进行血清固定与血清转阴患者的临床分析。结果197例梅毒患者主要集中在20-49岁,有37例发生血清固定（占18.78%）,其中一期梅毒血清固定率8.57%,二期梅毒血清固定率11.76%,潜伏梅毒血清固定率27.66%。在临床治疗中,133例应用青霉素治疗者中,形成血清固定19例（14.29%）;25例用头孢曲松钠治疗者中,形成血清固定3例（12.00%）;39例应用多西环素治疗者中,形成血清固定15例（38.46%）。结论潜伏梅毒血清固定率最高,梅毒血清固定发生与疾病分期有关,青霉素与头孢曲松钠治疗本病均有良好疗效,其中青霉素仍为治疗梅毒的首选药物。血清固定与性别、年龄关系不密切。加强对梅毒的早期筛查和及早规范治疗,是减少梅毒血清固定的关键措施。

关键词：梅毒患者血清固定血清转阴临床分析

不同感染状态下梅毒患者血清INF-γ和IL-10检测与分析

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中国公共卫生管理 2016年第2期32卷 234-236页

作者：赵延明谢艳光仲伟麒宋潇张东黑龙江省皮肤病防治所黑龙江哈尔滨150001

目的通过临床问卷方式统计梅毒患者临床资料,分析不同感染状态下的流行病学特征,借助血清INF-γ和IL-10水平变化,探讨机体免疫学与血清指标固定的关系,为细胞因子应用临床治疗提供支持。方法借助问卷调查表,了解不同感染状态下的梅毒患... 详细信息

目的通过临床问卷方式统计梅毒患者临床资料,分析不同感染状态下的流行病学特征,借助血清INF-γ和IL-10水平变化,探讨机体免疫学与血清指标固定的关系,为细胞因子应用临床治疗提供支持。方法借助问卷调查表,了解不同感染状态下的梅毒患者流行病学特征及免疫情况;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测4组人群血清INF-γ和IL-10水平变化。结果梅毒感染者以中青年为主,男女性别无明显差别,有固定性伴侣的占57.78%,治疗方式上大多采用青霉素治疗(66.67%),非青霉素治疗中采用头孢治疗的共9例(45%),梅毒感染者中同时伴有慢性传染病感染史、过敏性疾病史与免疫性疾病史方面例数较少。4组血清INF-γ表达中,潜伏组最高,以下依次为早期转阴组、血清固定组,正常组最低,其中两两比较,差异均有统计学意义(P0.05)外,余两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论梅毒感染者存在免疫失衡与免疫抑制,因此临床治疗时除早期足量和正规驱梅,还可采用联合免疫调节剂,调节机体和增强机体免疫,加快梅毒螺旋体的清除。

关键词：梅毒血清固定免疫细胞因子 INF-γ IL-10

2016—2020年黑龙江省生肉制品致病菌污染状况监测分析

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中国公共卫生管理 2021年第4期37卷 534-536页

作者：薛成玉仲伟麒闫军郑晓华董锐白晶李鑫黑龙江省疾病预防控制中心黑龙江哈尔滨150036

目的了解2016—2020年黑龙江省生肉制品中致病菌污染状况,为食源性疾病防控提供科学依据,为我省食品安全预警提供可靠数据。方法在黑龙江省13个地市流通环节和餐饮环节采集生禽肉与生畜肉,依据《中华人民共和国国家标准:食品微生物学检... 详细信息

目的了解2016—2020年黑龙江省生肉制品中致病菌污染状况,为食源性疾病防控提供科学依据,为我省食品安全预警提供可靠数据。方法在黑龙江省13个地市流通环节和餐饮环节采集生禽肉与生畜肉,依据《中华人民共和国国家标准:食品微生物学检验》及《国家食品安全风险监测工作手册》制定的标准,对样本进行多种致病菌检测,并对监测结果进行分析。结果从917份食品中,共检出阳性样品281份,总阳性率为30.64%,其中沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、致泻大肠埃希氏菌、空肠弯曲菌、产气荚膜梭菌、小肠结肠炎耶尔森菌的平均检出率依次为16.28%、15.34%、11.68%、11.55%、6.26%、4.03%。生禽肉制品致病菌平均检出率为40.32%,明显高于生畜肉制品的19.48%,二者之间比较差异有统计学意义(χ^(2)=46.622,P<0.005)。结论黑龙江省生肉制品存在不同程度食源性致病菌污染,尤其是生禽肉制品。为了减少我省食源性疾病的发生,建议有关部门加强肉与肉类制品在包装、贮存、运输和烹饪过程中的监督管控,制定相应措施,保障公众的食品安全和身体健康。

关键词：生肉制品致病菌污染监测

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性病门诊就诊人员梅毒检测情况分析

中国农村卫生 2017年第3期9卷 60-60,59页

作者：宋潇仲伟麒谢艳光黑龙江省皮肤病防治所黑龙江哈尔滨150001

目的:了解性病门诊就诊人员的梅毒检测情况,为梅毒的预防与控制工作提供可靠依据。方法:选取2014年1月~2015年12月期间我所性病门诊就诊的500例就诊人员进行TRUST血清学检测,对其梅毒感染情况进行总结分析。结果:500例就诊人员的梅毒阳... 详细信息

目的:了解性病门诊就诊人员的梅毒检测情况,为梅毒的预防与控制工作提供可靠依据。方法:选取2014年1月~2015年12月期间我所性病门诊就诊的500例就诊人员进行TRUST血清学检测,对其梅毒感染情况进行总结分析。结果:500例就诊人员的梅毒阳性检出率为24.60%,其中,女性的梅毒阳性检出率较男性更高(P<0.05),未婚者的梅毒阳性检出率较已婚者更高(P<0.05)。结论:性病门诊就诊人员的梅毒阳性检出率较高,应加强对性病门诊的梅毒筛查及防控,并加大安全性行为的宣传力度。

关键词：性病门诊梅毒检测

黑龙江省2019年肠炎沙门菌分子流行病学特征分析

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中国公共卫生管理 2020年第6期36卷 846-848页

作者：高飞张剑峰李敬晶仲伟麒李鑫郑晓华董锐谢平会闫军黑龙江省疾病预防控制中心黑龙江哈尔滨150030

目的对2019年黑龙江省食源性疾病监测哨点医院分离的肠炎沙门菌菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)试验,并对其分子流行病学特征进行分析,查找可疑危险因素,为相关部门制定政策和采取防控措施提供参考依据。方法参照《2019年国家食源性疾病... 详细信息

目的对2019年黑龙江省食源性疾病监测哨点医院分离的肠炎沙门菌菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)试验,并对其分子流行病学特征进行分析,查找可疑危险因素,为相关部门制定政策和采取防控措施提供参考依据。方法参照《2019年国家食源性疾病监测工作手册》,采用限制性内切酶XbaⅠ对40株肠炎沙门菌开展PFGE分子溯源分析,最后利用BioNumerics软件对PFGE图谱进行聚类分析。结果2019年黑龙江省食源性疾病监测分离的肠炎沙门菌指纹图谱型别相对集中,哈尔滨市、齐齐哈尔市、大庆市、双鸭山市、鹤岗市、大兴安岭地区的菌株谱型相似度较高,均呈现出2019年黑龙江省的肠炎沙门菌优势图谱。结论需要继续对食源性疾病来源的肠炎沙门菌进行监测,重点关注优势谱型肠炎沙门菌的变化趋势,识别和分析肠炎沙门菌的跨区域传播,有效控制暴发,为食源性疾病的防控工作指明方向。

关键词：肠炎沙门菌分子流行病学特征溯源分析

FQ-PCR在生殖器疱疹病毒感染检验中的应用价值

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世界最新医学信息文摘 2016年第24期16卷 135-135页

作者：宋潇仲伟麒谢艳光赵延明黑龙江省皮肤病防治所

目的探究FQ-PCR在生殖器疱疹病毒感染检验中的应用价值。方法随机的选取在我所性病门诊就诊的30例疑似生殖器疱疹病毒感染患者作为观察组研究对象,并且在同时期内随机的选取30例正常健康者作为对照组研究对象,两组均进行FQ-PCR检测,观... 详细信息

目的探究FQ-PCR在生殖器疱疹病毒感染检验中的应用价值。方法随机的选取在我所性病门诊就诊的30例疑似生殖器疱疹病毒感染患者作为观察组研究对象,并且在同时期内随机的选取30例正常健康者作为对照组研究对象,两组均进行FQ-PCR检测,观察比较两组患者的检测结果。结果观察组30例患者的检测结果显示:17例患者生殖器疱疹病毒感染检验呈阳性,阳性检出率为56.67%(17/30),而且在这17例阳性标本中,男性尿道试子有3例,有皮损组织液的患者有9例,女性宫颈分泌物5例;对照组30例患者均无检测出生殖器疱疹病毒感染阳性。结论检测疑似生殖器疱疹病毒感染患者可以更加直观的检测出患者的实际病毒感染状况,而且在有皮损组织患者中,阳性检出率更为的凸显,FQ-PCR图像的清晰度及准确度更改,有利于生殖期孢疹病毒感染的早期治疗。

关键词： FQ-PCR 生殖器疱疹病毒感染检验应用价值