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猪δ冠状病毒重庆流行株的诊断与N基因序列分析

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畜禽业 2024年第2期35卷 1-8页

作者：吴学婧于吉锋叶勇刚肖璐毛从剑曹冶康润敏四川省畜牧科学研究院四川成都610066 动物遗传育种四川省重点实验室四川成都610066

2023年重庆市某规模化养猪场猪群发生腹泻疫情,通过临床观察、RT-PCR检测、N基因克隆测序及序列分析对采集的腹泻仔猪肠道组织进行鉴定。结果显示,发病猪水样腹泻,小肠壁变薄、黏膜充血;成功检测到1株猪δ冠状病毒(porcine deltacoronav... 详细信息

2023年重庆市某规模化养猪场猪群发生腹泻疫情,通过临床观察、RT-PCR检测、N基因克隆测序及序列分析对采集的腹泻仔猪肠道组织进行鉴定。结果显示,发病猪水样腹泻,小肠壁变薄、黏膜充血;成功检测到1株猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV),命名为CQ2023株。该毒株N基因序列全长1029 bp,与30株GenBank中登录的参考毒株N基因序列比对显示,核苷酸序列相似性为96.7%~99.4%,其中PDCoV CQ2023株与CHN-HeN06-2022株的相似性最高,为99.4%。遗传进化分析显示PDCoV CQ2023株属于国内流行株,与国内PDCoV毒株CHN-HeN06-2022等处于同一进化分支,亲缘关系最近。该次研究成功鉴定出该猪场腹泻疫情由PDCoV感染引起,并进行了N基因序列分析,为PDCoV的流行病学研究、遗传进化、预防及诊断试剂的研究提供数据支持。

关键词：猪δ冠状病毒诊断 N基因遗传进化分析

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猪链球菌3型的分离鉴定及耐药性分析

黑龙江畜牧兽医 2024年第14期 74-80+126页

作者：毛从剑曹冶于吉锋吴学婧谢晶肖璐叶勇刚叶健强林毅潘梦魏勇李兴玉张先慧曾凯康润敏四川省畜牧科学研究院动物遗传育种四川省重点实验室

为查明四川地区某规模化猪场猪发病死亡原因并进行有效防控，试验采集病死猪肺脏组织样本4份进行细菌的分离，并对分离菌株进行菌落形态观察、革兰氏染色和镜检、猪链球菌的PCR鉴定、血清型鉴定、主要毒力基因检测、药敏试验和耐药基因... 详细信息

为查明四川地区某规模化猪场猪发病死亡原因并进行有效防控，试验采集病死猪肺脏组织样本4份进行细菌的分离，并对分离菌株进行菌落形态观察、革兰氏染色和镜检、猪链球菌的PCR鉴定、血清型鉴定、主要毒力基因检测、药敏试验和耐药基因检测。结果表明：从病料中共分离到4株菌，4株分离菌株在胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)中均呈灰白色、针尖状、圆形的菌落，革兰氏染色后镜检可见呈蓝紫色、圆形或卵圆形、链状排列的革兰氏阳性菌，符合猪链球菌的形态特征，分别命名为SYS9、SYS14、SYS15和SYS16。经猪链球菌的PCR鉴定和血清型鉴定确定4株分离菌株均为猪链球菌3型。4株猪链球菌分为2种毒力基因型，SYS9株的毒力基因型为mrp+epf+sly+fbps+cps-orf2+,SYS14、SYS15和SYS16的毒力基因型为mrp+epf+sly+fbps+cps+orf2+;4株猪链球菌均对四环素和泰乐菌素耐药，且均对阿莫西林(青霉素类药物),氟苯尼考和氯霉素(酰胺醇类药物),利奈唑胺(口恶唑烷酮类药物),头孢匹罗、头孢氨苄和头孢拉定(头孢菌素类药物),环丙沙星和左氟沙星(喹诺酮类药物)敏感。除SYS9株仅对四环素和泰乐菌素耐药外，其余3株菌均为3重或3重以上耐药菌株，其中SYS15株为6重耐药菌株。4株猪链球菌均未检出耐药基因ermA、mefA、msrD、fexA、fexB、aph(3′)-Ⅲa、ant(6′)-Ⅰa、aph(2′)-Ⅰb; SYS9株检出耐药基因tetO和ermB,SYS14株检出耐药基因tetM、tetO、ermB、aac(6′)-aph(2″)和optrA,SYS15株检出耐药基因tetM、tetO、tetL、ermB、aac(6′)-aph(2″)和optrA,SYS16株检出耐药基因tetM、tetO、tetL、ermB、aac(6′)-aph(2″)、optrA和Lsa(E)。说明该规模化猪场猪发病死亡原因为猪链球菌3型感染，可使用青霉素类、酰胺醇类、口恶唑烷酮类、头孢菌素类、喹诺酮类药物进行治疗。

关键词：猪链球菌3型细菌分离鉴定耐药性耐药基因

羊消化道4种易混淆线虫虫卵的形态学观察与比较

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黑龙江畜牧兽医 2024年第10期 58-64页

作者：叶勇刚魏勇吴学婧肖璐刘济睿曹冶于吉锋李兴玉林毅叶建强潘梦张先惠毛从剑谢晶康润敏四川省畜牧科学研究院动物遗传育种四川省重点实验室成都610066 安宁市动物疫病预防控制中心云南安宁650300

为了方便临床上鉴定羊消化道常见且易混淆线虫虫卵并丰富相关资料,试验从羊消化道中采集疑似捻转血矛线虫、夏伯特线虫、食道口线虫和奥斯特线虫共4种线虫,采用形态学和分子生物学方法鉴定虫种,将4种线虫于体外短暂培养后得到纯种虫卵,... 详细信息

为了方便临床上鉴定羊消化道常见且易混淆线虫虫卵并丰富相关资料,试验从羊消化道中采集疑似捻转血矛线虫、夏伯特线虫、食道口线虫和奥斯特线虫共4种线虫,采用形态学和分子生物学方法鉴定虫种,将4种线虫于体外短暂培养后得到纯种虫卵,通过观察虫卵不同发育阶段的胚胎形态变化获取每种线虫虫卵形态特征,并对虫卵的长径、宽径和长宽比进行测定。结果表明:经鉴定4种线虫分别为捻转血矛线虫、绵羊夏伯特线虫、粗纹食道口线虫和普通奥斯特线虫。4种线虫虫卵初期胚胎多呈收缩状态且形似桑葚,在外观形态上具有相似性,均为双层卵壳,多数对称,少数不对称。捻转血矛线虫虫卵呈短椭圆形,颜色较浅;绵羊夏伯特线虫虫卵呈椭圆形,颜色较捻转血矛线虫虫卵深;粗纹食道口线虫虫卵呈长椭圆形,颜色较捻转血矛线虫虫卵深,与绵羊夏伯特线虫虫卵相近;普通奥斯特线虫虫卵亦呈长椭圆形,颜色与捻转血矛线虫相近,较绵羊夏伯特线虫和粗纹食道口线虫虫卵浅。虫卵在生理盐水中培养1~6 d后,捻转血矛线虫、绵羊夏伯特线虫和普通奥斯特线虫依次进入蝌蚪期和幼虫期,但仅凭肉眼依然难以区分虫卵种类;绵羊食道口线虫未观察到含蝌蚪或含幼虫的虫卵,仅在桑葚期观察到胚胎收缩成1团及分裂成2团或3团不同形态的虫卵。部分粗纹食道口线虫和普通奥斯特线虫虫卵可观察到明显的气室。捻转血矛线虫卵大小为(61.22~102.05)μm×(37.96~69.33)μm,长宽比为1.51;绵羊夏伯特线虫卵大小为(81.89~139.14)μm×(43.97~90.60)μm,长宽比为1.57;粗纹食道口线虫卵的大小为(84.57~104.59)μm×(40.86~59.18)μm,长宽比为1.83;普通奥斯特线虫卵大小为(82.83~117.22)μm×(41.70~71.79)μm,长宽比为1.76。说明4种线虫虫卵的外观形态虽有细微差异,但没有特征性标识,临床上易造成误判,因此采用分子生物学方法进行鉴定更为可靠。

关键词：羊消化道线虫虫卵形态学捻转血矛线虫绵羊夏伯特线虫粗纹食道口线虫普通奥斯特线虫

猪流行性腹泻病毒和猪德尔塔冠状病毒双重TaqMan荧光RT-PCR检测方法的建立与应用

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中国动物传染病学报 2023年

作者：李金海李兴玉康润敏肖璐于吉锋叶勇刚林毅谢晶曹冶潘梦四川省畜牧科学研究院华派生物集团西昌学院动物科学学院

本研究旨在建立一种能同时检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)和猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacortonavirus，PDCoV)的双重TaqMan荧光RT-PCR方法。根据PEDV的N基因和PDCoV的M基因，设计合成特异性引物及TaqMan探针，通过反应条件和反应体系优化，建立快速检测PEDV和PDCoV的双重TaqMan荧光RT-PCR方法，对该方法的灵敏性和特异性进行评价。结果表明，该方法的检测灵敏度可达10 TCID50/ml；当PEDV和PDCoV病毒液效价在101～106TCID50/ml范围内时，建立的标准曲线Ct值与病毒液浓度的常用对数呈现良好的线性相关；与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PRoV)、猪伪狂犬病毒(PRV)等常见病原不发生交叉反应，具有很好的特异性。用建立的方法对2021-2022年收集的236份临床腹泻样品进行检测，PEDV阳性率45.76%(108/236)，PDCoV阳性率14.41%(34/236)，其中PDCoV和PEDV混合感染阳性率5.08%(12/236)，本研究建立的双重TaqMan荧光RT-PCR方法可实现PEDV和PDCoV的同时鉴别检测，为实验室快速鉴别诊断猪病毒性腹泻提供了有效的技术支持。

关键词：猪流行性腹泻病毒猪德尔塔冠状病毒双重TaqMan荧光RT-PCR

诃子等中药组合对猪呼吸系统疾病病原菌体外抑制作用研究

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中兽医医药杂志 2023年第3期42卷 45-49页

作者：曹冶谢晶康润敏于吉锋四川省畜牧科学研究院四川成都610066 动物遗传育种四川省重点实验室四川成都610066

猪呼吸系统疾病一般由病毒和细菌混合感染引起,严重影响生猪健康,目前主要采用大剂量抗生素来治疗病猪,但易产生副作用。筛选适宜中药来治疗猪呼吸系统疾病是养猪业发展的迫切需求。本研究将中药诃子、余甘子用中性去离子水索氏提取4~6... 详细信息

猪呼吸系统疾病一般由病毒和细菌混合感染引起,严重影响生猪健康,目前主要采用大剂量抗生素来治疗病猪,但易产生副作用。筛选适宜中药来治疗猪呼吸系统疾病是养猪业发展的迫切需求。本研究将中药诃子、余甘子用中性去离子水索氏提取4~6 h,螃蟹甲、多刺绿绒蒿用无水乙醇索氏提取6 h,蒸干溶剂,收率分别为10.0%、10.5%、11.0%和10.0%。将诃子、余甘子用水稀释,螃蟹甲、多刺绿绒蒿用5%吐温80溶液稀释,得到药物储存液,采用试管法测定诃子及其与其他中药组合对猪呼吸系统疾病病原菌(A族乙型溶血性链球菌、猪链球菌、波氏杆菌、多杀性巴氏杆菌及副猪嗜血杆菌)的最低抑菌浓度。结果显示,诃子对猪呼吸系统疾病病原菌有较强的抑菌作用,余甘子、螃蟹甲、多刺绿绒蒿与诃子的多种药物组合也有较强的抑菌作用,大多数能协同诃子抑制猪呼吸系统疾病常见病原菌,其作用强弱顺序为诃子/余甘子/多刺绿绒蒿(3∶1∶1)>诃子/余甘子/螃蟹甲(3∶1∶1)>诃子/螃蟹甲(2∶1)>诃子>诃子/多刺绿绒蒿(2∶1)>诃子/余甘子(1∶1)。这些药物组合可为猪呼吸系统疾病防治药物的研发提供参考。

关键词：诃子猪呼吸系统疾病病原菌体外抑菌作用

整合宏基因组学分析生猪养殖粪污发酵过程中耐药基因的动态变化

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西南农业学报 2023年第3期36卷 655-664页

作者：赵素君曹冶李江凌张金灵刘锐王秋实于吉锋四川省畜牧科学研究院成都610066 动物遗传育种四川省重点实验室成都610066

【目的】探究生猪养殖粪污在堆肥过程中耐药基因的消减规律。【方法】以猪粪和菌渣为发酵原料,进行有氧堆肥处理,在堆肥第1、4、8、12、16、22、29天,进行上、中、下分层多点采样,提取总DNA构建文库,经定量和检测合格后,进行宏基因组测... 详细信息

【目的】探究生猪养殖粪污在堆肥过程中耐药基因的消减规律。【方法】以猪粪和菌渣为发酵原料,进行有氧堆肥处理,在堆肥第1、4、8、12、16、22、29天,进行上、中、下分层多点采样,提取总DNA构建文库,经定量和检测合格后,进行宏基因组测序分析。通过宏基因组学方法对堆肥过程中耐药基因的动态变化进行分析。【结果】堆肥期间共发现613个耐药基因,分别对32类抗生素产生耐药。其中,丰度较高的抗生素分别为青霉烷类抗生素(Penam)、头孢菌素类抗生素(Cephalosporin)、氨基糖苷类抗生素(Aminoglycoside antibiotic)、磷霉素类抗生素(Fosfomycin)、糖肽类抗生素(Glycopeptide antibiotic)和四环素类抗生素(Tetracycline antibiotic),这与现实中常用的抗生素种类相吻合。分析发现耐药基因的消减出现2个峰值,第一个峰值出现在试验起始时,在第4天迅速下降,然后在第12天(对照组)和第8天(实验组)达到第二个峰值,随着细菌的自然凋亡,耐药基因的丰度又下降到低值,慢慢消减下去。【结论】在堆肥过程中,生猪养殖粪污中耐药基因丰度呈现波动式消减。

关键词：宏基因组学粪污发酵耐药基因

中药诃子、余甘子对奶牛乳房炎病原菌体外抑制作用的研究

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中国奶牛 2023年第2期 39-42页

作者：曹冶谢晶康润敏于吉锋四川省畜牧科学研究院成都610066 动物遗传育种四川省重点实验室成都610066

将中药诃子、余甘子用中性去离子水索氏提取4~6h,蒸干水分,得到深棕色的物质,收率分别为10%和10.5%。将其用水稀释,得到本次参试的药物贮存液,采用试管法测定它们以及1:1和2:1混合物对奶牛乳房炎病原菌(金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假... 详细信息

将中药诃子、余甘子用中性去离子水索氏提取4~6h,蒸干水分,得到深棕色的物质,收率分别为10%和10.5%。将其用水稀释,得到本次参试的药物贮存液,采用试管法测定它们以及1:1和2:1混合物对奶牛乳房炎病原菌(金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、假单胞杆菌、产肠毒素型大肠杆菌(ETEC)以及这四种等量混合菌)的最低抑菌浓度。结果显示,诃子、余甘子对这四种病菌均有较强的抑菌作用。1:1混合时,两种药物对于金黄色葡萄球菌、假单胞杆菌的抑制有协同作用,对于ETEC的抑制有拮抗作用;对于金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和四种菌的等量复混菌无相互作用。2:1混合时,两种药物对于假单胞杆菌的抑制有协同作用,对于ETEC的抑制无相互作用;对于金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和四种菌复混菌的抑制有相加作用。

关键词：诃子余甘子奶牛乳房炎病原菌体外抑菌作用

15株四川地区猪圆环病毒3型全基因序列的克隆与分析

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中国动物传染病学报 2022年

作者：肖璐周泷吴学婧于吉锋谢晶李兴玉叶勇刚魏勇林毅曹冶潘梦叶健强毛从剑康润敏四川省畜牧科学研究院动物遗传育种四川省重点实验室西南民族大学畜牧兽医学院

为了解四川省地区猪圆环病毒3型（PCV3）流行毒株的分子及遗传变异规律，试验采用生物学软件，设计3对特异性引物对从四川地区部分养殖场猪群中收集的15份PCV3阳性样品进行分段扩增、全基因序列遗传变异分析。结果表明：PCR分段扩增分... 详细信息

为了解四川省地区猪圆环病毒3型（PCV3）流行毒株的分子及遗传变异规律，试验采用生物学软件，设计3对特异性引物对从四川地区部分养殖场猪群中收集的15份PCV3阳性样品进行分段扩增、全基因序列遗传变异分析。结果表明：PCR分段扩增分别得到大小为623 bp、803 bp和753 bp的条带，阳性克隆菌测序结果与GenBank中PCV3的同源性均大于98.6%；15株样品毒株的全基因核苷酸序列的同源性为98.1%～99.8%，推导氨基酸序列的同源性为95.8%～99.2%，由Cap基因的遗传进化分析发现从四川地区获取的15株PCV3毒株属于3a和3b两个亚群。说明四川地区流行的PCV3毒株至少存在 3a和3b 2个亚群，该亚群的其变异程度低、较为保守。

关键词：猪圆环病毒3型(PCV3) 序列分析遗传变异流行病学

中药余甘子对猪腹泻病原菌体外抑制作用的研究

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畜禽业 2023年第9期34卷 1-5页

作者：曹冶谢晶康润敏于吉锋吴学婧四川省畜牧科学研究院四川成都610066 动物遗传育种四川省重点实验室四川成都610066

猪腹泻病一般由病毒和细菌混合感染引起,严重影响生猪健康,目前主要采用大剂量抗生素来进行治疗,但易产生副作用。寻找中药来替代抗生素治疗猪腹泻病,是生猪养殖业发展的大方向和迫切需求。研究将中药余甘子、诃子用中性去离子水索氏提... 详细信息

猪腹泻病一般由病毒和细菌混合感染引起,严重影响生猪健康,目前主要采用大剂量抗生素来进行治疗,但易产生副作用。寻找中药来替代抗生素治疗猪腹泻病,是生猪养殖业发展的大方向和迫切需求。研究将中药余甘子、诃子用中性去离子水索氏提取4~6h,螃蟹甲、多刺绿绒蒿用无水乙醇索氏提取6h,蒸干溶剂,收率分别为10.5%、10%、11%和10%。将余甘子、诃子用水稀释,螃蟹甲、多刺绿绒蒿用5%吐温80水溶液稀释得到试验用药物贮存液,采用试管法测定余甘子及它与其他中药的组合对猪腹泻病原菌(大肠杆菌,猪霍乱沙门氏菌,以及这2种细菌混合菌)的最低抑菌浓度,结果显示:余甘子对猪腹泻病原菌有较强的抑菌作用。诃子、螃蟹甲、多刺绿绒蒿与余甘子的多种药物组合也有较强的抑菌作用,多数能协同余甘子抑制猪腹泻常见病原菌。

关键词：余甘子猪腹泻病原菌体外抑菌作用