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亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T多态性对癌基因C-erbB-2 CpG岛甲基化状态的影响及其与肿瘤的关系

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亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T多态性对癌基因C-erbB-2 CpG岛甲...

作者：金中淦江苏大学

学位级别：硕士

目的:研究肿瘤及其相对应的癌旁组织中C-erbB-2基因启动子区域CpG岛的甲基化状态、癌蛋白C-erbB-2表达水平以及肿瘤组织中C-erbB-2基因甲基化状态对癌蛋白表达水平的影响;探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T多态性对肿瘤组织C-er... 详细信息

目的:研究肿瘤及其相对应的癌旁组织中C-erbB-2基因启动子区域CpG岛的甲基化状态、癌蛋白C-erbB-2表达水平以及肿瘤组织中C-erbB-2基因甲基化状态对癌蛋白表达水平的影响;探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T多态性对肿瘤组织C-erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化的影响及其与肿瘤的关系。方法:用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)分析经病理证实的247例肿瘤及其肿瘤旁组织中C-erbB-2基因启动子区域CpG岛的甲基化状态,用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)检测247例肿瘤患者及100例正常对照中MTHFR基因C677T多态性,并用免疫组织化学法(IHC)检测43例结直肠癌及癌旁组织中C-erbB-2蛋白的表达。结果:在研究的所有肿瘤中,癌组织中的C-erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化率明显低于癌旁组织(43.3%vs.69.2%,P=0.000),但未发现癌组织中C-erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化与临床病理参数间的关联。肿瘤患者中MTHFR基因677位点T等位基因频率显著高于正常对照组,677 CT/TT基因型显著增加了肿瘤的风险(OR=1.619,95%CI:1.012-2.588,P=0.043)。肿瘤患者中,CT/TT基因型个体肿瘤组织中C-erbB-2甲基化率低于CC基因型个体(39.4%vs.50.O%),但差异不具有统计学意义(P=0.103);在肿瘤组织发生C-erbB-2甲基化与未甲基化的个体间C、T等位基因的分布差异也不具有显著性意义(P=0.078)。在乳腺癌C-erbB-2启动子区CpG岛发生甲基化的个体中CC基因型和C等位基因的频率显著高于未发生甲基化的个体(P值分别为0.008和0.007)。所检测的43例结直肠癌组织和癌旁组织中,癌蛋白C-erbB-2过度表达率分别为67.4%和27.9%,差异具有统计学意义(P=0.000)。C-erbB-2癌蛋白表达水平与肿瘤分期相关(P=0.010),与年龄(P=0.586)、性别(P=0.739)、肿瘤部位(P=0.05)、组织学分级(P=0.815)、淋巴结转移(P=0.594)等参数均无明显相关。结直肠癌组织中C-erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化状态与癌蛋白表达水平相关(P=0.03,r=0.331)。结论:在癌组织中C-erbB-2基因启动子区CpG岛呈低甲基化状态,MTHFR基因677 CT/TT基因型显著增加了肿瘤的风险;在乳腺癌中,MTHFR基因C677T多态性对C-erbB-2基因启动子区CpG岛的甲基化有明显影响。 C-erbB-2基因启动子区CpG岛的低甲基化可能是结直肠癌组织C-erbB-2癌蛋白过度表达的重要因素之一,有望成为有用的肿瘤分子诊断标记和治疗靶点。

关键词： C-erbB-2基因 CpG岛甲基化甲基化特异性PCR 免疫组织化学亚甲基四氢叶酸还原酶肿瘤

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质谱技术在参考测量程序中的应用进展

中华检验医学杂志 2017年第10期40卷 823-828页

作者：居漪李卿金中淦孙贺伟上海市临床检验中心 200126

检验医学参考体系的建立是常规方法检测结果实现量值溯源的重要途径。完整的参考体系由参考测量程序、参考物质和参考实验室构成。参考测量程序通常为经过充分研究、具有较小的测量不确定度等特征。基于质谱技术在定量分析中的高特异性... 详细信息

检验医学参考体系的建立是常规方法检测结果实现量值溯源的重要途径。完整的参考体系由参考测量程序、参考物质和参考实验室构成。参考测量程序通常为经过充分研究、具有较小的测量不确定度等特征。基于质谱技术在定量分析中的高特异性、高灵敏度的优势，其在检验医学参考测量程序的研究中发挥着重要作用，近40年来，越来越多的被应用于药物、电解质、代谢物和底物、非电解质金属元素、非肽激素、蛋白质和维生素的参考测量程序中，为这些已经明确定义的被测量的精准检测提供了有力保障。

关键词：参考值参考标准质谱分析法

ID-LC-MS检测血清载脂蛋白A-I和B载脂蛋白的多肽释放研究

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中华检验医学杂志 2018年第11期41卷 870-874页

作者：李卿居漪孙贺伟金中淦上海市临床检验中心参考测量实验室

目的研究质谱技术检测载脂蛋白A-I和载脂蛋白B的多肽释放情况,为准确定量蛋白提供依据。方法方法学研究。确定载脂蛋白A-I和B的目标肽段。以目标肽段为检测对象,用同位素稀释液相色谱串联质谱法测定5份市售人血清样本中的载脂蛋白A-I和B... 详细信息

目的研究质谱技术检测载脂蛋白A-I和载脂蛋白B的多肽释放情况,为准确定量蛋白提供依据。方法方法学研究。确定载脂蛋白A-I和B的目标肽段。以目标肽段为检测对象,用同位素稀释液相色谱串联质谱法测定5份市售人血清样本中的载脂蛋白A-I和B,浓度范围分别为0.90～2.54 g/L和0.54～1.39 g/L。计算不同时间点的多个肽段释放量和速率,并绘制散点图。计算不同样本间,肽段释放量的相关系数R;。结果多数肽段在4 h内即达释放峰值。Apo A-Ⅰ的肽段VQ、DY和VS,以及Apo B的肽段TE和FP生成速度相对较慢。达到峰值后,TEV/SIL-TEV、AK/SILAK和VQ/SIL-VQ的比值相对稳定。对于Apo A-I,不同肽段之间的相关性较高,R;在0. 904～0. 999之间;对于APo B,部分肽段之间的相关性较低,如TG-SV的R;=0. 543 （3 h）。结论Apo A-I和Apo B不同肽段的酶解释放情况不同,合适的选择代表性肽段和酶解条件将有助于准确定量目标蛋白。

关键词：载脂蛋白A-Ⅰ 载脂蛋白B类动力学色谱法,液相串联质谱法同位素标记

超高效液相色谱串联质谱检测α-羟基丁酸方法的建立

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中华检验医学杂志 2019年第1期42卷 57-62页

作者：金中淦宗明傅之妍叶致含范列英上海市临床检验中心 200126 同济大学附属东方医院检验科上海200120

目的建立超高效液相色谱串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测血清α-羟基丁酸(α-HB)的方法。方法方法学建立及评价。使用电喷雾电离源负离子及多反应监测模式检测α-HB,对方法的线性范围、定量下限、精密度、回收率、干扰等进行评估,并检测上海... 详细信息

目的建立超高效液相色谱串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测血清α-羟基丁酸(α-HB)的方法。方法方法学建立及评价。使用电喷雾电离源负离子及多反应监测模式检测α-HB,对方法的线性范围、定量下限、精密度、回收率、干扰等进行评估,并检测上海市东方医院收集的表观健康人群血清标本130份(其中来自男62例,女68例)初步建立该方法的参考区间,用Dixon法判断离群值,采用K-S检验进行数据正态性分析,标准曲线采用一元线性回归分析。结果所建立的方法分析时间为4 min,在0.5~40.0 mg/L浓度范围内线性良好(r=0.999 4);定量下限为0.5 mg/L;批内和批间精密度分别小于4.1%和6.3%;回收率在95.8%~103.8%;溶血样本(血红蛋白浓度约为5 g/L)、脂血样本(三酰甘油浓度约为12 mmol/L)、黄疸样本(总胆红素浓度约为150 μmol/L)对检测无明显干扰,表观健康人群参考区间为1.46~6.48 mg/L。结论本研究建立了UHPLC-MS/MS检测血清α-HB的方法,方法性能满足临床检测,且简便快速,可用于临床样本检测。

关键词：丁酸类色谱法高压液相胰岛素抗药性

同位素稀释液相色谱串联质谱法测定血清17α-羟孕酮候选参考测量程序的研究

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中华检验医学杂志 2022年第5期45卷 449-455页

作者：虞科颖孙贺伟金中淦张素洁李卿居漪上海市临床检验中心参考测量实验室上海200126

目的研究1种基于液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术的血清17α-羟孕酮(17α-OHP)候选参考测量程序并对其进行评价。方法2019年12月,取上海市临床检验中心员工体检留存的血清标本,采用正己烷乙酸乙酯混合液(体积比3∶2)提取加入同位素内标... 详细信息

目的研究1种基于液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术的血清17α-羟孕酮(17α-OHP)候选参考测量程序并对其进行评价。方法2019年12月,取上海市临床检验中心员工体检留存的血清标本,采用正己烷乙酸乙酯混合液(体积比3∶2)提取加入同位素内标的血清样本,C18反向色谱柱分离,正离子电喷雾质谱仪检测,参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)C62-A文件对建立的候选参考方法进行校准曲线、检测限与定量限、基质效应、不精密度、正确度、特异性、携带污染、线性范围等基本分析性能验证。结果17α-OHP的线性范围为0.21~119.67μg/L。检测限和定量限分别为5.218 ng/L、0.116μg/L。3种不同比例(50∶50、80∶20、20∶80)的血清与溶液混合物的相对基质效应分别为-0.02%、-0.40%、-0.90%。批内变异系数(CV)在0.164、14.81、81.63μg/L浓度处分别为1.73%~2.11%、0.98%~1.71%、0.47%~0.87%,批间CV在上述3个浓度点处分别为1.82%、1.03%、0.80%。加标样本平均回收率在0.5、20、100μg/L处分别为100.4%、101.7%、102.8%;检测中国计量科学研究院标准参考物质GBW09829,结果均在规定的不确定度范围内。无携带污染和特异性干扰。结论成功建立了基于同位素稀释LC-MS/MS技术的血清17α-OHP候选参考测量程序。该候选参考测量程序有着良好的精密度和准确度,能用于常规临床检验方法的量值溯源。

关键词： 17-α-羟孕酮质谱分析法放射性同位素稀释技术参考测量程序

同型半胱氨酸同位素稀释液相色谱串联质谱参考测量程序的建立及应用

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中华检验医学杂志 2019年第10期42卷 858-863页

作者：金中淦张素洁居漪李卿孙贺伟唐立萍虞啸炫上海市临床检验中心上海200126

目的建立同位素稀释液相色谱串联质谱(isotope dilution chromatography tandem mass spectrometry,ID-LC/MS)测定人血清同型半胱氨酸(Hcy)参考方法,并运用于临床实验室室间质评(external quality assessment,EQA)样本靶值的确立。方法参照国际检验医学溯源联合委员会(the Joint Committee for Traceability in Laboratory Medicine,JCTLM)推荐方法,建立本实验室Hcy参考方法,并对所建方法的精密度、正确度、特异性、残留、基质效应等进行评估,并将建立的参考方法用于上海地区2018年度第二次EQA样本Hcy靶值的确立。结果该方法3 d 3批次检测12.5μmol/L和37.4μmol/L样本,批间CV分别为1.03%和2.10%,精密度较好;检测美国国家标准和技术研究院(National Institute of Standards and Technology,NIST)标准参考物质(standard reference material,SRM)1955均在规定的不确定度范围内;无基质效应和携带污染。2018年第二次EQA数据显示国产试剂组均值低于参考方法赋值结果,进口试剂组均值高于参考方法赋值结果。结论建立的ID-LC/MS/MS测定血清Hcy参考方法精密度、正确度、特异性均较好,无分析物残留,有望在临床实验室Hcy测定的量值溯源中发挥一定作用。

关键词：室间质评国产试剂进口试剂 LC/MS/MS 美国国家标准标准参考物质靶值检验医学

瓜氨酸化波形蛋白对类风湿关节炎患者外周血来源树突状细胞的干预作用

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中华风湿病学杂志 2011年第12期15卷 834-838,I0001页

作者：宗明张慧孙立山金中淦范列英上海市东方医院检验科 200120 上海市临床检验中心

目的探讨波形蛋白瓜氨酸化前后在体外对类风湿关节炎（RA）患者外周血来源树突状细胞（DCs）的细胞形态、表型和功能的影响。方法分离外周血单个核细胞（PBMCs），粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）和白细胞介素（IL）-4体外培... 详细信息

目的探讨波形蛋白瓜氨酸化前后在体外对类风湿关节炎（RA）患者外周血来源树突状细胞（DCs）的细胞形态、表型和功能的影响。方法分离外周血单个核细胞（PBMCs），粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）和白细胞介素（IL）-4体外培养制备未成熟DCs（imDCs），分别用脂多糖、瓜氨酸化波形蛋白（cVim）和波形蛋白刺激培养的imDCs，磷酸盐缓冲液（PBS）作为阴性对照，流式细胞仪检测DCs表面标志CD14、CD80、CD83、CD86、主要组织相容性复合体（MHC）Ⅰ、MHCⅡ表达变化。将实验组获得的DCs和同种异体T细胞进行混合淋巴细胞反应，通过单溶液细胞增殖分析（MTS）法检测T细胞的增殖情况。采用t检验。结果以阴性对照组imDCs的各个免疫表型阳性率作为1，脂多糖能显著诱导RA—imDCs表面MHCII、CD80、CD83、CD86表达（1．07±0．14，1．25±0．13，1．90±1．08，2．44±0．65，P均〈O．05）；cVim诱导MHCⅡ（1．18±0．09）、CDS3（1．97±0．99）表达水平上调（P〈0．05，P〈0．01）；波形蛋白对MHCⅡ及CD83、CD86表达无影响（0．95±0．11，0．90±0．29，1．04±0．06），仅抑制CD80表达（0．82±0．18，P〈0．01）。与脂多糖组相比，cVim组的MHCII表达水平显著增高（P〈O．05），而CDS0、CD86（0．83±0．36、1．32±0．15）的表达水平则低于脂多糖组（P〈0．01，P〈0．05）；eVim组MHCⅡ和CD83的表达水平显著高于波形蛋白组（P均〈O．05）。混合淋巴细胞反应显示经脂多糖和cVim诱生的DCs对同种异体T细胞具有明显刺激增殖作用，且随着DCs细胞浓度的增加而作用增强；波形蛋白诱生的DCs则无刺激增殖作用。结论cVim可诱导imDCs成熟，并且能够提高细胞表面共刺激分子的表达。

关键词：波形蛋白树突细胞关节炎类风湿瓜氨酸化

结直肠癌C-erbB-2基因启动子CpG岛甲基化状态及其与C-erbB-2蛋白表达的关系

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检验医学 2008年第6期23卷 594-599页

作者：金中淦袁亚陆青杨惠黎朱晴晖江苏大学基础医学与医学技术学院江苏镇江212013 上海市普陀区人民医院上海200060

目的了解结直肠癌组织C-erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化状态、C-erbB-2蛋白表达水平及两者之间的关系。方法取经病理确诊的43例结直肠癌组织和相应癌旁组织,分别用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和免疫组织化学法(IHC)检测C-erbB-2启动... 详细信息

目的了解结直肠癌组织C-erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化状态、C-erbB-2蛋白表达水平及两者之间的关系。方法取经病理确诊的43例结直肠癌组织和相应癌旁组织,分别用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和免疫组织化学法(IHC)检测C-erbB-2启动子区CpG岛的甲基化和C-erbB-2蛋白表达水平。结果癌组织和癌旁组织中C-erbB-2启动子区CpG岛甲基化率分别为44.2%和74.4%,差异具有统计学意义(P=0.004)。癌组织和癌旁组织中C-erbB-2蛋白过度表达率分别为67.4%和27.9%,差异具有统计学意义(P=0.000)。C-erbB-2蛋白表达水平与肿瘤分期相关。结直肠癌组织C-erbB-2启动子区CpG岛甲基化状态与C-erbB-2蛋白表达水平呈显著相关(r=0.331,P=0.03)。结论结直肠癌中C-erbB-2基因启动子区CpG岛的低甲基化可能在C-erbB-2蛋白过度表达中起一定作用,有望成为有用的肿瘤分子诊断标记和治疗靶点。

关键词： C-erbB-2基因 CpG岛甲基化甲基化特异性聚合酶链反应免疫组织化学结直肠癌

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乳酸细菌葡聚糖蔗糖酶的研究应用与进展

检验医学教育 2005年第2期12卷 30-32页

作者：宗明金中淦徐兰何清黄锡全江苏大学医学技术学院

该文主要介绍乳酸细菌葡聚糖蔗糖酶的分子生物学结构及特性,概述其研究现状和在生产上的应用前景。

关键词：乳酸细菌葡聚糖蔗糖酶基因结构葡聚糖蔗糖酶蔗糖酶葡聚糖分子生物学结构