亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T多态性对癌基因C-erbB-2 CpG岛甲基化状态的影响及其与肿瘤的关系

作     者：金中淦 

作者单位：江苏大学 

学位级别：硕士

导师姓名：朱晴晖

授予年度：2009年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：C-erbB-2基因 CpG岛 甲基化 甲基化特异性PCR 免疫组织化学 亚甲基四氢叶酸还原酶 肿瘤 

摘      要：目的:研究肿瘤及其相对应的癌旁组织中C-erbB-2基因启动子区域CpG岛的甲基化状态、癌蛋白C-erbB-2表达水平以及肿瘤组织中C-erbB-2基因甲基化状态对癌蛋白表达水平的影响;探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T多态性对肿瘤组织C-erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化的影响及其与肿瘤的关系。 方法:用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)分析经病理证实的247例肿瘤及其肿瘤旁组织中C-erbB-2基因启动子区域CpG岛的甲基化状态,用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)检测247例肿瘤患者及100例正常对照中MTHFR基因C677T多态性,并用免疫组织化学法(IHC)检测43例结直肠癌及癌旁组织中C-erbB-2蛋白的表达。 结果:在研究的所有肿瘤中,癌组织中的C-erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化率明显低于癌旁组织(43.3%vs.69.2%,P=0.000),但未发现癌组织中C-erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化与临床病理参数间的关联。肿瘤患者中MTHFR基因677位点T等位基因频率显著高于正常对照组,677 CT/TT基因型显著增加了肿瘤的风险(OR=1.619,95%CI:1.012-2.588,P=0.043)。肿瘤患者中,CT/TT基因型个体肿瘤组织中C-erbB-2甲基化率低于CC基因型个体(39.4%vs.50.O%),但差异不具有统计学意义(P=0.103);在肿瘤组织发生C-erbB-2甲基化与未甲基化的个体间C、T等位基因的分布差异也不具有显著性意义(P=0.078)。在乳腺癌C-erbB-2启动子区CpG岛发生甲基化的个体中CC基因型和C等位基因的频率显著高于未发生甲基化的个体(P值分别为0.008和0.007)。 所检测的43例结直肠癌组织和癌旁组织中,癌蛋白C-erbB-2过度表达率分别为67.4%和27.9%,差异具有统计学意义(P=0.000)。C-erbB-2癌蛋白表达水平与肿瘤分期相关(P=0.010),与年龄(P=0.586)、性别(P=0.739)、肿瘤部位(P=0.05)、组织学分级(P=0.815)、淋巴结转移(P=0.594)等参数均无明显相关。结直肠癌组织中C-erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化状态与癌蛋白表达水平相关(P=0.03,r=0.331)。 结论:在癌组织中C-erbB-2基因启动子区CpG岛呈低甲基化状态,MTHFR基因677 CT/TT基因型显著增加了肿瘤的风险;在乳腺癌中,MTHFR基因C677T多态性对C-erbB-2基因启动子区CpG岛的甲基化有明显影响。 C-erbB-2基因启动子区CpG岛的低甲基化可能是结直肠癌组织C-erbB-2癌蛋白过度表达的重要因素之一,有望成为有用的肿瘤分子诊断标记和治疗靶点。