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TNF-α诱导B16细胞自体吞噬的机制研究

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TNF-α诱导B16细胞自体吞噬的机制研究

作者：鄢文慧天津医科大学

学位级别：硕士

目的在前期研究中发现,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)可以诱导小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡,但是其是否能够诱导B16细胞发生自体吞噬目前尚不明确。因此,在前期研究的基础上,通过相差显微镜观察细胞活性、透射电子显微镜(TEM)观察细胞内是否存在... 详细信息

目的在前期研究中发现,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)可以诱导小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡,但是其是否能够诱导B16细胞发生自体吞噬目前尚不明确。因此,在前期研究的基础上,通过相差显微镜观察细胞活性、透射电子显微镜(TEM)观察细胞内是否存在自体吞噬泡及其数量的变化,分析TNF-a是否能够诱导B16细胞发生自体吞噬;进一步检测自噬相关基因和蛋白的表达变化,分析参与TNF-α诱导的B16细胞自体吞噬的关键因子;并通过检测自噬信号通路上的标志性基因和蛋白的表达,分析TNF-α诱导B16细胞自噬的信号通路,以及各通路对自噬的调控作用。方法1.体外培养小鼠黑色素瘤B16细胞,根据处理方法不同分为对照组、TNF-α处理组(20ng/mlTNF-α处理12h、24h)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)+TNF-α处理组(lOmmol/L3-MA预处理2h,20ng/mlTNF-α处理12h、24h)。2.相差显微镜观察TNF-α处理前后B16细胞的生长状态和细胞活性。***观察TNF-a处理前后B16细胞内自体吞噬泡的变化。4.收取细胞,提取细胞总RNA,聚合酶链式反应(PCR)检测自噬相关基因Atg5、Atg7、Atg12及内质网应激关键基因Chop mRNA的表达变化。5.收取细胞,RIPA裂解液裂解细胞,提取细胞总蛋白,蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测自噬标志性蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬性死亡标志性蛋白Beclinl、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路及磷酸肌醇3激酶(P13K)/蛋白激酶B(PKB,又称Akt)通路关键蛋白核糖体S6蛋白激酶(p70S6K)及Akt磷酸化水平的变化。结果1.与对照组相比,TNF-α处理后的B16细胞出现明显的生长抑制现象,可见部分细胞死亡,TNF-α处理12h后细胞死亡量约10%,24h后死亡量达30%,具有明显的时效关系。2.与对照组相比,TNF-α处理后的B16细胞内,可见许多不同阶段的自体吞噬泡。3.与对照组相比,TNF-α处理12h的B16细胞中,自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ和自噬性死亡标志性蛋白Beclinl的表达显著升高,24h较12h降低但仍高于对照组。3-MA+TNF-α处理组,12h时LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白表达水平较TNF-α处理组12h下降,24h较TNF-α处理组24h升高。4.自噬相关基因Atg5、Atg7、Atg12mRNA在TNF-α处理12h、24h后表达水平均显著升高;内质网应激关键基因Chop mRNA表达显著上调,呈时问依赖性。5.与对照组相比,TNF-α处理组中p70S6K磷酸化水平显著下降,呈时间依赖性;Akt磷酸化水平显著降低,24h较12h升高。3-MA+TNF-α处理组中,p70S6K磷酸化水平在12h较TNF-α处理组升高,24h较TNF-α处理组降低;Akt磷酸化水平较TNF-α处理24h稍低。结论***-α除了可以诱导B16细胞凋亡,还可以诱导B16细胞发生自体吞噬。***-α诱导B16细胞的自噬作用达到一定水平后,自噬体的数量不再增加,自噬体的降解逐渐增多,从而导致自噬体数量下降。***-α可以诱导B16细胞自噬性死亡。***-α通过mTOR通路和PI3K/Akt通路诱导B16细胞自噬。***-α可以导致B16细胞发生内质网应激。有研究发现,内质网应激可以导致细胞自噬。TNF-α是否可以通过内质网应激导致B16细胞自噬有待进一步研究。

关键词： TNF-α B16细胞自体吞噬 mTOR通路 PI3K/Akt通路内质网应激

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41例白塞病回顾性临床研究

华中科技大学学报（医学版） 2005年第6期34卷 780-783页

作者：舒展李家文鄢文慧华中科技大学同济医学院附属协和医院皮肤科武汉430022

目的加强对白塞病的认识,提高临床诊治水平。方法对41例白塞病患者的临床资料进行回顾性分析。结果白塞病发病率男女之比为1∶1.16;最常见症状依次是口腔溃疡(95.12%)、皮肤损害(70.73%)、生殖器溃疡(48.78%),其余症状相对较少;实验室... 详细信息

目的加强对白塞病的认识,提高临床诊治水平。方法对41例白塞病患者的临床资料进行回顾性分析。结果白塞病发病率男女之比为1∶1.16;最常见症状依次是口腔溃疡(95.12%)、皮肤损害(70.73%)、生殖器溃疡(48.78%),其余症状相对较少;实验室检查和病理检查无特异性。皮肤针刺反应阳性(56.10%)是较特异的检查指标。诊断分型完全型13例(31.71%),不全型28例(68.29%)。结论白塞病以女性青壮年多见。临床表现以口腔、皮肤、生殖器受累常见。诊断主要靠临床症状,皮肤针刺反应阳性有辅助诊断意义。白塞病治疗目前尚无统一方法,糖皮质激素、免疫抑制剂等治疗能很好地控制病情。

关键词：自塞病临床研究

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协同创新人才培养模式的SWOT分析

继续医学教育 2020年第4期34卷 64-65页

作者：鄢文慧天津医科大学第二医院人力资源部天津300211

医院经过长期发展,已形成较成熟的人力资源管理模式,协同创新有助于优化人才队伍的年龄结构、学历结构和职称结构,打造在各学科有较高影响力的人才队伍,实现资源优化配置,以提升医院竞争力和影响力。

关键词：人才培养协同创新 SWOT分析

xCT缺陷的Sut黑色素细胞蛋白质组学研究

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国际生物医学工程杂志 2011年第3期34卷 140-144页

作者：时黎明赵立平何璐鄢文慧乔海晅天津医科大学生物医学工程学院 300070 天津医科大学康复与运动医学系 300070 天津医科大学基础医学院 300070

目的为研究xCT缺陷引起细胞生长抑制的机理提供理论依据。方法提取xCT缺陷的Sut黑色素细胞和野生型Mela黑色素细胞2组细胞总蛋白，分别进行二维凝胶电泳，分离2组细胞总蛋白。以Mela细胞做对照，以PDQuest软件分析Sut细胞蛋白质表达谱... 详细信息

目的为研究xCT缺陷引起细胞生长抑制的机理提供理论依据。方法提取xCT缺陷的Sut黑色素细胞和野生型Mela黑色素细胞2组细胞总蛋白，分别进行二维凝胶电泳，分离2组细胞总蛋白。以Mela细胞做对照，以PDQuest软件分析Sut细胞蛋白质表达谱的变化。选择部分表达量明显变化的蛋白质进行质谱分析，将质谱分析结果输入MASCOT软件，在SWISS-PROT数据库中搜索，鉴定出差异蛋白质。结果和野生型Mela细胞相比，Sut细胞中有20个蛋白质发生了明显变化，其中10个蛋白质表达上调，10个蛋白质表达下调，分别选取上调蛋白质点和下调蛋白质点各4个进行鉴定。鉴定结果显示表达量上调的蛋白质为：Tubulin alpha—lb，S100-A6，Nucleoside，S-formylglutathione；表达量下调的蛋白质为：Calumenin，NDRG1，DPYSL2，14ku未知蛋白。结论获得了一些与xCT缺陷相关的蛋白质，为研究xCT缺陷引起的Sut细胞生长抑制机理提供理论依据。

关键词：蛋白质组学 Sut黑色素细胞 xCT

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重症医学科住院医师规范化培训满意度分析

继续医学教育 2022年第12期36卷 61-64页

作者：鄢文慧蔡晓强刘婧天津医科大学第二医院教学办公室天津300211

目的重症医学科专业在住院医师规范化培训中启动较晚,通过研究天津医科大学第二医院重症医学科住院医师培训现状,推动重症医学科专业基地的建设和快速发展。方法选取2021年1—12月轮转重症医学科的住院医师60名,采用问卷调查方法,对结... 详细信息

目的重症医学科专业在住院医师规范化培训中启动较晚,通过研究天津医科大学第二医院重症医学科住院医师培训现状,推动重症医学科专业基地的建设和快速发展。方法选取2021年1—12月轮转重症医学科的住院医师60名,采用问卷调查方法,对结果进行因子分析,确定培训管理、指导医师水平和核心胜任力提升三个维度,并进行非参数检验和回归分析,探索住院医师对重症医学科的培训满意度。结果住院医师对科室薪酬待遇的满意度得分最低,对指导医师水平的满意度最高,住院医师的性别、人员类型对培训满意度的影响差异无统计学意义(P>0.05),不同学历对核心胜任力提升差异有统计学意义(P<0.05)。培训管理、指导医师水平、核心胜任力提升均对培训满意度呈现出显著的正向影响关系。结论住院医师对薪酬待遇关注度较高,医院住院医师绩效考核方案亟需精细化,提升住院医师积极性。教学方法及内容需要进一步调整,针对重症医学科专业特点,开展特色教学活动,住院医师核心胜任力提升既是住院医师自身的要求,又是培训质量衡量的标准。

关键词：住院医师规范化培训重症医学科培训满意度培训管理指导医师水平核心胜任力

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住院医师规范化培训线上师资培训探索与实践

继续医学教育 2022年第5期36卷 53-56页

作者：鄢文慧蔡晓强刘婧天津医科大学第二医院教学办公室天津300211

目的探索住院医师规范化培训线上师资培训效果及师资培训体系。方法根据师资培训考试结果的信度和效度、试题的难度和区分度,分析师资培训的效果。结果考试结果的信度和效度良好,试题的难度和区分度较好,课程4试题难度较高,课程5难度较... 详细信息

目的探索住院医师规范化培训线上师资培训效果及师资培训体系。方法根据师资培训考试结果的信度和效度、试题的难度和区分度,分析师资培训的效果。结果考试结果的信度和效度良好,试题的难度和区分度较好,课程4试题难度较高,课程5难度较低,课程5和课程8的区分度较低。结论师资对于过程考核方面的内容掌握程度较好,但对形成性评价掌握较差,需要在日后的师资培训中再进行强化,逐步建立线上理论培训—线下观摩竞赛—专家督导强化的师资培训体系。

关键词：住院医师规范化培训师资培训培训体系教学能力线上培训培训效果

新形势下公立医院的人才梯队建设——以某大型公立医院为例

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继续医学教育 2020年第4期34卷 65-67页

作者：蔡晓强张玉静鄢文慧天津医科大学第二医院人力资源部天津300211

党的十八大报告指出:“广开进贤之路,广纳天下英才,是保证党和人民事业发展的根本之举。”随着《中共中央国务院关于深化医药卫生体制改革的意见》的实施推广,公立医院想要发展壮大,在保证其公益性前提下,人才梯队建设尤为重要。结合某... 详细信息

党的十八大报告指出:“广开进贤之路,广纳天下英才,是保证党和人民事业发展的根本之举。”随着《中共中央国务院关于深化医药卫生体制改革的意见》的实施推广,公立医院想要发展壮大,在保证其公益性前提下,人才梯队建设尤为重要。结合某大型公立医院实际情况,对新形势下公立医院的人才梯队建设问题进行讨论。

关键词：公立医院人才梯队人才引进人才培养

TNF-α诱导B16细胞自体吞噬的作用研究

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国际生物医学工程杂志 2012年第3期35卷 151-154,I0003页

作者：鄢文慧赵立平乔海晅天津医科大学生物医学工程学院 300070

目的研究肿瘤坏死因子a（TNF-a）诱导小鼠黑色素瘤B16细胞自体吞噬和自噬性死亡的作用.方法体外培养小鼠黑色素瘤B16细胞,TN F-a（20ng/ml）处理后不同时间点（12、24h）分别收取细胞,相差显微镜观察TNF-α处理前后B16细胞的生存状态,... 详细信息

目的研究肿瘤坏死因子a（TNF-a）诱导小鼠黑色素瘤B16细胞自体吞噬和自噬性死亡的作用.方法体外培养小鼠黑色素瘤B16细胞,TN F-a（20ng/ml）处理后不同时间点（12、24h）分别收取细胞,相差显微镜观察TNF-α处理前后B16细胞的生存状态,透射电子显微镜（TEM）观察TNF-a处理前后B16细胞内双层膜结构自体吞噬泡的情况,反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹分析自噬标记物微管相关蛋白1轻链3（LC3]和Beclin1以及自噬相关基因（Atg）Atg5、Atg7、Atg12表达的变化,以LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值作为自噬活性的指标,以Beclin1作为自噬性死亡的指标.结果TNF-a处理B16细胞24 h后自体吞噬泡数量增多.与对照组相比,TNF-α持续作用可以诱导自噬标记物LC3-Ⅱ和自噬性死亡标记物Beclin1蛋白表达增高,并且呈时间依赖性；同时自噬相关基因Atg5、Atg7 、Atg12 mRNA的表达在TNF-a处理12、24h后显著增高.结论TNF-α除了可以诱导B16细胞凋亡,还可诱导B16细胞发生自体吞噬并导致自噬性死亡.

关键词：肿瘤坏死因子-α B16细胞自体吞噬

轻烧温度及球磨工艺对盐湖Mg(OH)_(2)制备镁砂烧结行为影响

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硅酸盐学报 2024年第9期52卷 3003-3011页

作者：徐义彪李亚伟鄢文周芬武汉科技大学省部共建耐火材料与冶金国家重点实验室武汉430081 武汉钢铁集团耐火材料有限责任公司武汉430082

以盐湖氢氧化镁为原料,经650、750、850℃和950℃保温1 h轻烧,随后将轻烧MgO团聚体球磨(0.5、1.0、3.0、5.0、12.0、24.0 h)破碎,压制成型后于1600℃保温3 h制备了烧结镁砂,探讨了轻烧温度及球磨时间对镁砂显微结构及烧结性能的影响。... 详细信息

以盐湖氢氧化镁为原料,经650、750、850℃和950℃保温1 h轻烧,随后将轻烧MgO团聚体球磨(0.5、1.0、3.0、5.0、12.0、24.0 h)破碎,压制成型后于1600℃保温3 h制备了烧结镁砂,探讨了轻烧温度及球磨时间对镁砂显微结构及烧结性能的影响。结果表明:随轻烧温度由650℃升高到850℃,轻烧MgO团聚体内微晶平均尺寸由138 nm增加至180 nm,尽管微晶活性降低,但残余氢氧化镁减少,镁砂致密性呈增大趋势。轻烧温度升高至950℃,MgO微晶平均尺寸迅速增加至320 nm,活性大幅降低,镁砂晶粒尺寸及致密性显著降低。球磨工艺可以有效破坏轻烧MgO团聚体,其平均尺寸球磨0.5 h后由55.90μm迅速降至2.69μm,并随研磨时间增加至12 h逐渐降至1.72μm,但进一步增加球磨时间团聚体尺寸基本不变。MgO团聚体的破坏减少了生坯中大气孔,提高了晶粒接触程度及传质速率,促进了晶粒长大及样品致密化。850℃制备的轻烧MgO球磨12 h压制的生坯,经1600℃保温3 h烧结,可制备平均晶粒30.4μm,体积密度达3.42 g/cm3的致密镁砂。

关键词：盐湖氢氧化镁烧结镁砂轻烧温度晶粒尺寸致密化