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淡豆豉中产γ-氨基丁酸微生物对产毒黄曲霉菌的拮抗作用和毒素合成关键基因mRNA表达的影响

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中草药 2024年第5期55卷 1510-1517页

作者：戴家齐贺婧朱晓蓝王立元龙凯周立分杨安金翁美芝谢小梅江西中医药大学江西南昌330004 南昌大学转化医学研究院江西南昌330031 江西中医药大学附属医院江西南昌330006

目的考察从淡豆豉Sojae Semen Praeparatum(SSP)炮制过程中分离的15株产γ-氨基丁酸微生物对产毒黄曲霉菌的拮抗能力并筛选出具有抑制产毒黄曲霉菌生长和降解黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)的高效拮抗菌,探究高效拮抗菌发酵产物对黄... 详细信息

目的考察从淡豆豉Sojae Semen Praeparatum(SSP)炮制过程中分离的15株产γ-氨基丁酸微生物对产毒黄曲霉菌的拮抗能力并筛选出具有抑制产毒黄曲霉菌生长和降解黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)的高效拮抗菌,探究高效拮抗菌发酵产物对黄曲霉毒素(aflatoxins)合成关键基因mRNA表达量的影响。方法运用平板对峙法与十字交叉法检测15株产γ-氨基丁酸微生物及其发酵产物对产毒黄曲霉标准株(简称:产毒标准株)生长的影响,超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测15株菌对AFB1的降解效果,考察其对产毒黄曲霉菌的拮抗能力并筛选出高效拮抗菌;针对高效拮抗菌发酵产物分别运用菌丝干重法检测其对产毒标准株菌丝生长的影响,实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测其对黄曲霉毒素合成关键基因(aflR、aflD、aflM、aflP)mRNA表达的影响。结果15株菌及其发酵产物对产毒标准株的生长抑制率分别在15.88%~56.05%和25.74%~52.12%,对AFB1降解率在2.74%~57.87%,表明它们对产毒黄曲霉菌均有一定的拮抗作用,并筛选出具有高效拮抗作用的黑曲霉菌Aspergillus niger(JC2)和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis(Xd1)。当高效拮抗菌发酵产物加入量为2000µL时,JC2和Xd1对产毒标准株菌丝生长的抑制率分别为73.82%和63.34%,且能明显抑制黄曲霉毒素合成关键基因aflR、aflD、aflM、aflP的mRNA表达。结论淡豆豉炮制中存在既能产γ-氨基丁酸又能明显抑制产毒标准株生长和产毒的拮抗菌,其拮抗作用可能通过抑制产毒标准株菌丝生长和毒素合成关键基因的mRNA表达。

关键词：淡豆豉 γ-氨基丁酸产毒黄曲霉菌黄曲霉毒素拮抗作用高效拮抗菌实时荧光定量PCR

淡豆豉炮制中黄曲霉毒素产毒株的筛选鉴定和产毒能力测定

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中草药 2022年第5期53卷 1411-1417页

作者：李春玲贺婧王立元李翠英龙凯翁美芝冯驰谢小梅江西中医药大学江西南昌330004 南昌大学转化医学研究院江西南昌330031 江西中医药大学附属医院江西南昌330006 广州医科大学附属第六医院泌尿外科广东清远511500

目的对淡豆豉炮制过程中产黄曲霉毒素(aflatoxins,AFTs)的微生物(简称产毒菌)进行筛选鉴定、定量分析和产毒能力测定。方法运用紫外荧光法初筛淡豆豉炮制中各样本的产毒菌并菌落计数;对初筛菌株的18S rDNA序列进行PCR扩增、测序,测序结... 详细信息

目的对淡豆豉炮制过程中产黄曲霉毒素(aflatoxins,AFTs)的微生物(简称产毒菌)进行筛选鉴定、定量分析和产毒能力测定。方法运用紫外荧光法初筛淡豆豉炮制中各样本的产毒菌并菌落计数;对初筛菌株的18S rDNA序列进行PCR扩增、测序,测序结果经NCBI同源性比对、MEGA 7.0软件构建系统发育树进行分子生物学鉴定;应用超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测各产毒菌培养液中AFTs含量,确定各产毒菌的产毒能力。结果紫外荧光法结合分子生物学共筛选鉴定出15株产毒菌株,为黄曲霉和溜曲霉;“黄衣上遍”阶段产毒菌菌落数逐渐增多,至发酵第6天时最多,为1×10^(6.30) CFU/g,进入“再闷”阶段产毒菌数量逐渐减少,从再闷第9天开始至第15天均未检测到产毒菌;经UPLC-MS/MS法确定15株菌中有5株不产毒,10株产毒,且产毒能力各不相同并均低于5 ng/mL,远低于黄曲霉标准株(654.90 ng/mL)。结论淡豆豉炮制过程中存在产AFTs能力不同的黄曲霉、溜曲霉且产毒菌数量呈现先升后降,将为探讨淡豆豉炮制中AFTs消长机制奠定基础,并首次从安全性角度证实了淡豆豉“再闷”的重要性和“再闷”时间的合理性。

关键词：淡豆豉炮制过程黄曲霉毒素产毒能力超高效液相色谱-串联质谱技术黄曲霉溜曲霉

淡豆豉炮制过程中不产毒黄曲霉菌的分布特征及其对产毒菌的拮抗作用

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中草药 2023年第6期54卷 1775-1782页

作者：李翠英贺婧戴家齐龙凯王立元周立分杨安金徐佳翁美芝谢小梅江西中医药大学江西南昌330004 南昌大学转化医学研究院江西南昌330031 江西中医药大学附属医院江西南昌330006

目的明确淡豆豉Sojae Semen Praeparatum炮制中不产毒黄曲霉菌Aspergillus flavus的分布特征及其拮抗能力。方法按实验室前期已建立的规范炮制工艺制备淡豆豉,获取淡豆豉炮制中9个不同时间点的样本,各样本用氯硝胺18%甘油培养基(DG-18)... 详细信息

目的明确淡豆豉Sojae Semen Praeparatum炮制中不产毒黄曲霉菌Aspergillus flavus的分布特征及其拮抗能力。方法按实验室前期已建立的规范炮制工艺制备淡豆豉,获取淡豆豉炮制中9个不同时间点的样本,各样本用氯硝胺18%甘油培养基(DG-18)进行培养、分离纯化,经形态学初筛、分子生物学鉴定为黄曲霉菌。通过紫外荧光法初筛和超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)测定黄曲霉菌产毒能力,确定为不产毒黄曲霉菌(简称:不产毒菌)。用平板对峙法检测不产毒菌及其代谢产物对产毒黄曲霉菌标准株(产毒菌)生长的影响。结果从淡豆豉炮制过程中共筛选出21株不产毒菌,其中“黄衣上遍”过程中的第3、6天分别筛选出3、6株,“再闷”过程中的第3、6、9天分别筛选出2、7、3株,再闷第6天筛选到的不产毒菌最多。不产毒菌对产毒菌的生长抑制率在26.75%~36.69%,抑制效果最好的是F6-L8(指第1批在“黄衣上遍”阶段的发酵第6天样品中筛选到的第8株疑似黄曲霉菌),为36.69%,发酵上清液对产毒菌的抑制率在14.29%~43.23%,抑制效果最好的是Z3-X1(指第2批在“再闷”阶段的第3天样品中筛选到的第1株疑似黄曲霉菌),达43.23%。结论淡豆豉炮制过程中存在不产毒黄曲霉菌,且在炮制的不同时间点其数量变化呈现“上升-下降-再上升-再下降”的独特趋势,不产毒菌及其发酵液具有抑制产毒菌生长的作用。为进一步研究不产毒黄曲霉菌在淡豆豉炮制过程中的作用、黄曲霉毒素污染的生物防控提供实验依据。

关键词：淡豆豉黄曲霉毒素不产毒黄曲霉菌超高效液相色谱-串联质谱技术拮抗能力黄衣上遍再闷

案例教学法在“生物化学”课程中的应用与分析——以医学院校为例

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教育教学论坛 2022年第51期 117-120页

作者：翁美芝余英才邓雄伟江西中医药大学中医学院江西南昌330004 江西中医药大学附属南昌市洪都中医院骨伤八科江西南昌330006

“生物化学”在医学院校是基础医学的一门核心课程,因为课程理论性强,内容庞杂且抽象,学生学习兴趣不高,学习主动性不强。针对以上现状,也为适应中医药本科院校培养应用型人才的目标,将案例教学法引入“生物化学”教学,旨在激发学生学... 详细信息

“生物化学”在医学院校是基础医学的一门核心课程,因为课程理论性强,内容庞杂且抽象,学生学习兴趣不高,学习主动性不强。针对以上现状,也为适应中医药本科院校培养应用型人才的目标,将案例教学法引入“生物化学”教学,旨在激发学生学习“生物化学”的热情和兴趣,调动其学习积极性和主动性,改善医学院校“生物化学”课程的教学质量,提高学生综合能力,培养学生的临床思维,培养具有综合素质、全面发展、符合21世纪医学培养目标的医学人才。

关键词：生物化学教学方法案例教学法传统教学法

淡豆豉炮制过程中产纤溶酶微生物的筛选和鉴定

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中草药 2020年第24期51卷 6221-6228页

作者：翁美芝邓雄伟王立元苏明声周丽谢小梅江西中医药大学江西南昌330004 江西中医药大学附属南昌市洪都中医院江西南昌330006

目的筛选和鉴定淡豆豉炮制过程中产纤溶酶的优势菌株。方法按《中国药典》2020年版制备淡豆豉;采用酪蛋白平板法和纤维蛋白平板法分别对淡豆豉炮制不同时间点样本中产纤溶酶的微生物进行初筛和复筛;将产纤溶酶微生物分别接种在特定的液... 详细信息

目的筛选和鉴定淡豆豉炮制过程中产纤溶酶的优势菌株。方法按《中国药典》2020年版制备淡豆豉;采用酪蛋白平板法和纤维蛋白平板法分别对淡豆豉炮制不同时间点样本中产纤溶酶的微生物进行初筛和复筛;将产纤溶酶微生物分别接种在特定的液体培养基中培养,获得纯种发酵液,用纤维蛋白平板法测定发酵液的纤溶酶活力;应用16S rDNA和18S rDNA通用引物分别对产纤溶酶细菌和真菌进行PCR扩增、对扩增产物进行测序,测序结果通过NCBI同源性比对、MEGA4.1软件构建系统发育树进行分子生物学鉴定。结果筛选获得3种产纤溶酶细菌,分别为枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis、嗜麦芽窄食单胞菌Stenotrophomonas maltophilia、微球菌Micrococcus。纤维蛋白平板法测定纯种发酵液纤溶酶活力的结果显示,嗜麦芽窄食单胞菌所产纤溶酶活力最高,达527.49 IU/mL。结论淡豆豉炮制过程中存在高产纤溶酶的优势菌株,淡豆豉的溶栓作用值得进一步研究。为揭示淡豆豉炮制中纤溶酶形成机制奠定基础。

关键词：淡豆豉纤溶酶优势微生物系统发育树菌种鉴定酪蛋白平板法纤维蛋白平板法枯草芽孢杆菌嗜麦芽窄食单胞菌微球菌

Kidd血型抗-JK^a致1例疑难配血结果分析

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实验与检验医学 2014年第2期32卷 222-223页

作者：熊莉翁美芝何华庆江西省血液中心江西南昌330077

Kidd血型系统是目前认知已较为清楚的人类红细胞血型系统之一，JKa抗原在20世纪50年代首次被发现。由于该系统抗体性质的特殊性和复杂性，在临床上常导致严重的迟发性溶血输血反应，引起急性溶血性输血反应亦偶见报道。笔者在输血前疑... 详细信息

Kidd血型系统是目前认知已较为清楚的人类红细胞血型系统之一，JKa抗原在20世纪50年代首次被发现。由于该系统抗体性质的特殊性和复杂性，在临床上常导致严重的迟发性溶血输血反应，引起急性溶血性输血反应亦偶见报道。笔者在输血前疑难交叉配血的抗体检测中发现抗-JKa抗体，并对其血型进行检测，现将结果报告如下。

关键词： Kidd血型系统抗-JK^a 交叉配血不规则抗体

体现“以学生为中心”的教学法在《生物化学》教学中的应用及评价

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亚太教育 2016年第28期 98-99页

作者：翁美芝舒青龙郑里翔江西中医药大学

为践行"以学生为中心"的教育理念,笔者在中医专业本科生中采用了案例教学法、翻转课堂和科学前沿进课堂等以学生为中心的教学方法,并与传统课堂讲授进行比较。结果发现案例教学法、翻转课堂和科学前沿进课堂三种教学方法,在激发学习兴... 详细信息

为践行"以学生为中心"的教育理念,笔者在中医专业本科生中采用了案例教学法、翻转课堂和科学前沿进课堂等以学生为中心的教学方法,并与传统课堂讲授进行比较。结果发现案例教学法、翻转课堂和科学前沿进课堂三种教学方法,在激发学习兴趣、获取新知识和自主学习能力培养等方面,均显著优于传统的课堂讲授法。

关键词：以学生为中心生物化学教学改革效果评价

等待肾移植患者体内预存HLA抗体特点及致敏因素分析

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中国输血杂志 2014年第4期27卷 383-386页

作者：翁美芝孙瑜吴红肖莉熊莉李国良江西省血液中心江西南昌330077

目的分析研究等待肾移植手术的患者体内预存群体反应性抗体(PRA)特点及其产生原因。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测1 618名等待肾移植患者PRA,根据患者原有的输血史、妊娠史和移植史,将其分为5组:未输血未妊娠组(n=804);单纯输血组(... 详细信息

目的分析研究等待肾移植手术的患者体内预存群体反应性抗体(PRA)特点及其产生原因。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测1 618名等待肾移植患者PRA,根据患者原有的输血史、妊娠史和移植史,将其分为5组:未输血未妊娠组(n=804);单纯输血组(n=330);单纯妊娠组(n=229);输血合并妊娠组(n=196);有移植史组(n=59)。结果 1 618名等待肾移植患者中,未输血未妊娠组、单纯输血组、单纯妊娠组、输血合并妊娠组和有移植史组PRA阳性率分别为5.97%、18.18%、22.71%、48.47%和76.27%。患者出现频率较高的HLAⅠ类抗体有抗-A2、-A23、-A66和-B7等,HLAⅡ类抗体有抗-DR52、-DR53、-DQ5和-DQ6等。有移植史组患者产生DR53和DR52抗体的频率较高,占HLAⅡ类抗体总数的19.32%。结论不同个体对相同致敏因素反应不同;在相同致敏因素存在的情况下,男性和女性患者PRA阳性率差异无统计学意义;输血史、妊娠史和移植史可协同提高致敏率;抗体产生的频率与抗原频率分布不相一致;HLAⅡ类抗体中,DR52和DR53抗体的产生与移植物失功存在一定关联性。

关键词：肾移植群体反应性抗体致敏因素人类白细胞抗原

花椒对利血平所致虚寒证大鼠骨骼肌Cox4i1表达及甲基化的影响

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中华中医药杂志 2018年第4期33卷 1532-1537页

作者：章明翁美芝吴超周莹黄鑫尹春胜彭淑红朱卫丰江西中医药大学南昌330004

目的:探讨热性中药花椒对利血平所致虚寒证大鼠骨骼肌Cox4i1表达及甲基化的影响。方法:利血平作用于SD雄性大鼠造成虚寒证模型后,用花椒水煎剂按0.54、5.40g/kg剂量灌胃大鼠12d,取骨骼肌;Elisa法测定COX4I1蛋白浓度;Real-time PCR法检... 详细信息

目的:探讨热性中药花椒对利血平所致虚寒证大鼠骨骼肌Cox4i1表达及甲基化的影响。方法:利血平作用于SD雄性大鼠造成虚寒证模型后,用花椒水煎剂按0.54、5.40g/kg剂量灌胃大鼠12d,取骨骼肌;Elisa法测定COX4I1蛋白浓度;Real-time PCR法检测大鼠骨骼肌中Cox4i1、Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b、Tet1、Tet2和Tet3基因m RNA表达水平;BSP法检测Cox4i1基因DNA甲基化状态;Western blot法检测骨骼肌中TET3和DNMT3A蛋白表达情况。结果:模型组COX4I1蛋白量和m RNA水平均比空白组显著增加(P<0.01);花椒低、高剂量组能显著降低模型组大鼠Cox4i1 m RNA水平(P<0.01,P<0.05)。模型组Cox4i1甲基化频率有降低趋势,且接近显著水平;花椒低剂量组能显著增加Cox4i1甲基化频率(P<0.05)。模型组Dnmt1、Tet1、Tet2 m RNA水平显著增加(P<0.05);花椒低剂量组能显著降低Dnmt3a、Dnmt3b、Dnmt1、Tet1、Tet2和Tet3 m RNA水平(P<0.05,P<0.01);花椒高剂量组能显著降低Dnmt3b、Tet3、Tet2 m RNA水平(P<0.05,P<0.01)。花椒高、低剂量组对于DNMT3A和TET3蛋白表达量均未有显著影响。结论:低剂量花椒可能通过同时降低DNA甲基化酶和去甲基化酶的表达水平,而发挥甲基化的作用,使Cox4i1 DNA甲基化频率增加,从而使m RNA水平降低。

关键词：花椒虚寒证 Cox4i1 DNA甲基化利血平 DNA去甲基化