检索结果-南通市图书馆

作者：潘小红西南大学

学位级别：硕士

在全球化石能源匮乏的情形下,微生物胞外多糖(EPS)因其具有优良理化性质和可再生性等优点而被作为不可再生能源的替代品被广泛应用,其需求量和年产值持续快速增长。近年来,硬葡聚糖(scleroglucan,β-(1,3)-(1,6)-glucan)作为多用途的EP... 详细信息

在全球化石能源匮乏的情形下,微生物胞外多糖(EPS)因其具有优良理化性质和可再生性等优点而被作为不可再生能源的替代品被广泛应用,其需求量和年产值持续快速增长。近年来,硬葡聚糖(scleroglucan,β-(1,3)-(1,6)-glucan)作为多用途的EPS而被广泛研究。硬葡聚糖是一种非离子线性多糖,具有独特的三重螺旋结构,具有良好的假塑性、水溶性、生物可降解性、耐高温性、耐盐性、粘度稳定性等特性,还具有抗菌、抗肿瘤和抗病毒活性,被广泛应用于石油、化工、食品、医药等行业,其全球市场正在不断上升。但硬葡聚糖的生产过程存在产量低、能耗高、排放大量废水废渣等问题,实现绿色生产硬葡聚糖迫在眉睫。本研究以微生物代谢工程为技术手段,以实现绿色高效生产硬葡聚糖为目标,开展研究工作。硬葡聚糖生物合成途径的分子机制研究甚少,仅通过转录组学预测了其生物合成途径与相关基因而未实验证实,通过代谢工程菌种改良提高硬葡聚糖产量等研究更未涉及。其中瓶颈在于硬葡聚糖工业生产的主要菌株主要为齐整小核菌(Sclerotium rolfsii),缺乏高质量的基因组数据和有效的遗传转化方法与基因编辑工具系统。本课题组前期工作发现齐整小核菌GME4934基因和GME1658基因表达水平与硬葡聚糖的产量紧密正相关的现象。基于此,本研究对这两个基因的功能进行了探究分析,同时开展了代谢工程菌构建相关的初步工作。主要工作和结果如下:(1)GME4934与GM1658蛋白催化功能鉴定。在大肠杆菌表达系统中,大量表达融合蛋白GME4934-6x His与GME1658-6x His,采用镍柱法对其进行纯化,将纯化产物进行体外催化合成反应后。通过实验发现,本实验所构建的表达菌株p Sr V36(GME4934-6x His)和p Sr V37(GME1658-6x His)目标蛋白能够正确表达,但是表达量很低,蛋白浓度低。将纯化得到的GME4934-6x His进行蛋白催化活性检测,未检测到预期的β-(1,3)-glucan聚合酶的活性。这与GME4934保守结构域预测显示其仅含有一个SMI1＿KNR4结构域一致,猜测GME4934可能参与硬葡聚糖生物合成第四步β-(1,3)-glucan合酶的活性调节。而GME1658-6x His蛋白表达非常困难,可能与其编码序列长达3 kb且含有信号肽有关。(2)GME1658在酿酒酵母中的结构域功能互补验证。在酵母菌株中,负责细胞壁多糖合成的Sc Gas1p和Sc Bgl2p已经被证实分别具有β-(1,3)-glucan合酶功能和β-(1,3)-(1,6)-glucan合酶功能,催化功能结构域分别为Glyco＿hydro＿72和Glyco＿hydro＿17。GME1658结构域预测显示其含有同类的Glyco＿hydro＿31结构域。为证实GME1658的结构域是否具有相似活性,本实验通过将GME1658的Glyco＿hydro＿31回补到gas1Δ和bgl2Δ突变菌株,检测菌株在含有刚果红的培养基上生长表型,进而验证该结构域是否具有相应活性。初步实验表明GME1658的Glyco＿hydro＿31结构域未能回补gas1Δ和bgl2Δ突变菌株的生长缺陷。无法判断GME1658的Glyco＿hydro＿31结构域是否具有催化功能活性。(3)硬葡聚糖代谢工程基础体系的初步构建。本研究首次建立了齐整小核菌电穿孔转化法,并进行了电击参数优化。成功将外源DNA转入野生型齐整小核菌中,转化子在含有抑制浓度杀真菌剂的液体培养和固体培养基中都能够生长。外源片段中的Ds Red红色荧光蛋白在齐整小核菌中可以有效表达,转化子阳性率在50%左右。在场强为2 k V/cm,电击时间为1 ms,DNA/感受态细胞比例为1μg/100 mg湿重,电击次数为1次时,转化效率最高。构建了启动子、终止子、抗性基因、功能基因元件,并对其进行了接口的驯化。利用电击转化法验证抗性基因的可用性。研究测试了五种常用的杀菌剂对齐整小核菌的有效性并确定其有效抑制浓度。然后将含有五种抗性基因表达盒通过电穿孔转化法转入齐整小核菌,实验得到Carboxin、Basta、G418三种抗性基因的转化子,并且三种抗性基因的转化子均检测到红色荧光蛋白的表达,其中Carboxin抗性基因转化子的遗传稳定性最好,能够稳定遗传至第四代。而潮霉素B和中生菌素抗性基因未得到转化子。综合结果表明Carboxin、Basta、G418三种抗性基因可直接用于齐整小核菌。在此基础上,本研究利用Golden Gate DNA组装系统,将基因元件连接,构建了一系列p GT类的转录单元质粒,并对其进行了酶切位点和接口的驯化。然后基于Golden Gate DNA组装系统将转录单元质粒连接构建成含有不同抗性基因和GME493

关键词：硬葡聚糖齐整小核菌基因功能代谢工程

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基于支架式教学的小学语文延伸性阅读教学策略研究

基于支架式教学的小学语文延伸性阅读教学策略研究

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作者：潘小红西南大学

学位级别：硕士

21世纪教育的核心是教会学生如何学习的能力,联合国教科文组织在《教育—财富蕴藏其中》中提出面向21世纪教育的四大支柱是学会认知、学会做事、学会发展、学会共同生活。(1)教育必须培养出真正适应社会并能为社会所需要的人才。支架式... 详细信息

21世纪教育的核心是教会学生如何学习的能力,联合国教科文组织在《教育—财富蕴藏其中》中提出面向21世纪教育的四大支柱是学会认知、学会做事、学会发展、学会共同生活。(1)教育必须培养出真正适应社会并能为社会所需要的人才。支架式教学作为建构主义的教学模式之一,在教学过程中以学生的自主性和主体性为基础,以提高学生的思维能力和创造能力为主。将支架式教学与小学语文延伸性阅读教学相结合,有助于实现课标的阅读教学目标,完成阅读总量的任务,全面落实素质教育模式,培养全面发展的人。目前,有关支架式教学的研究已取得不错的成果。虽然支架式教学在初高中运用较为普遍,但却较少用于小学语文教学。延伸性阅读是育人育才的重要载体,近年来,在世界各国掀起的教育改革浪潮中都将儿童阅读视为重要的一环。教师若能将支架式教学用在延伸性阅读教学中,将会为学生后续的阅读乃至终身学习打下坚实的基础。研究试图在支架式教学的基础上,从延伸性阅读教学出发,将两者合二为一,提出一些实用和适用的教学策略。帮助学生在没有教师指导的情况下,也能够借助教师在课堂提供的相关延伸性阅读支架,结合相应的延伸性阅读策略与文本进行有效阅读。研究从理论的角度对支架式教学的相关特征、延伸性阅读原则、方式以及对小学语文教材文本特点进行了分析。从必要性和可行性出发,论证了支架式教学用在延伸性阅读中的迫切性,并做了较为完整的论述。论文中采用问卷和访谈调查的方式,结合课堂实录观察,以X小学作为研究对象,对当前一线教师在延伸性阅读教学过程中存在的问题及相应的原因进行了分析。在此基础上,从支架式教学的三大步骤提出了相应的对策。研究正文共分为五个部分:第一部分为理论阐述部分。首先通过文献查阅分析了支架式教学的内涵,详细论述了教师在支架式教学中为学生寻找支架—搭建支架—撤离支架三个步骤。其次,对统编版语文教材文章进行分析和总结概括出体裁的丰富性和多样性、内容的趣味性和知识性及拓展的针对性和多角度性的特点。最后,从延伸性阅读出发,阐述了延伸性阅读的原则和方式。由于延伸性阅读和课外阅读并不完全等同,该部分还对二者进行了区分,以便更好理解延伸性阅读概念。第二部分主要对支架式教学用在小学延伸性阅读教学中的必要性和可行性进行了相应分析。从统编版教材内容、学生延伸性阅读及素质教育三个方面探讨其结合的必要性;从延伸性阅读的框架搭建、学生身心发展特点及新课程标准理论基础三个方面进行了可行性分析。第三、四部分以支架式教学在小学语文延伸性阅读中的运用现状为主题,通过发放问卷的方式对学生的延伸性阅读情况进行相应了解后,再以问卷和访谈的方式对教师的延伸性阅读教学进行了相应的调查。然后从学生延伸性阅读与教师教学两个角度出发,分析其存在的问题。在第四部分重点针对教师存在的问题成因进行了探讨。第五部分是支架式教学在小学语文延伸性阅读教学中的基本策略。教师在掌握相关理论的基础上,从寻找支架、搭建支架、撤离支架三个步骤入手:寻找支架环节要以文定教,拓展延伸;因材施教,因生而异;以趣带读,主动阅读。搭建支架作为延伸性阅读的重点主要从五个方面进行:课堂上要做好导读支架,创设良好的阅读环境;基于教材要选好支架类型,用好教材例子,充分发挥教材的作用;学生方面要符合学生发展的特点,减轻学生压力;同时还要教会学生习得策略支架,养成良好的阅读习惯;最后提供对话交流的平台,师生共读书籍。撤离支架作为延伸性阅读的新起点可以促进学生在有限的时间内进行深度学习以及为终身学习打下坚实的基础。

关键词：支架支架式教学统编版延伸性阅读

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基于茶园旱情监测的无线传感器节点能耗检测

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江苏农业科学 2017年第6期45卷 207-210页

作者：潘小红长江大学文理学院湖北荆州434000

针对茶园旱情监测设计适用于无线传感器节点能量检测的功率计,该系统采用AVR系列Mega16单片机,通过测量精密电阻两端的电压差,从而测量出通过节点的电流和加在节点两端的电压,功率计1 s刷新1次显示,实时显示节点当前所消耗的电能和平均... 详细信息

针对茶园旱情监测设计适用于无线传感器节点能量检测的功率计,该系统采用AVR系列Mega16单片机,通过测量精密电阻两端的电压差,从而测量出通过节点的电流和加在节点两端的电压,功率计1 s刷新1次显示,实时显示节点当前所消耗的电能和平均功率。对茶园中节点采用随机部署和确定型部署,并用功率计对2种部署中的节点能量进行测试。结果表明,该系统能以较高精度监测节点的功耗,为今后无线传感器网络的能耗分析提供了数据依据。

关键词：无线传感器节点茶园能量检测功率计

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南浔区发展品质农业的现实基础与对策研究

南浔区发展品质农业的现实基础与对策研究

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作者：潘小红浙江大学

学位级别：硕士

品质是农产品立足市场的根本,农产品品质与食品安全已成为农业发展的核心所在,发展品质农业已成为现代农业发展的重要内容。品质农业是以农业标准化生产为基础,以品牌创建和农产品质量认证为手段,高产、优质、高效、生态、安全的现代农... 详细信息

品质是农产品立足市场的根本,农产品品质与食品安全已成为农业发展的核心所在,发展品质农业已成为现代农业发展的重要内容。品质农业是以农业标准化生产为基础,以品牌创建和农产品质量认证为手段,高产、优质、高效、生态、安全的现代农业发展方式。在新的时代背景下,湖州市牢牢抓住国家农业改革与建设试点契机,对现代农业发展作出了积极探索,提出了“品质农业”的发展理念,大力推进传统农业转型升级,加快建设品质农业,形成现代农业发展新优势。南浔区作为湖州临近上海的前沿阵地,在长三角地理优势明显,具有发展品质农业的良好条件与巨大潜力。论文从背景研究入手,综述了品质农业发展的理论基础与研究概况,提出了发展品质农业的必要性。主要内容是结合地方实际,对南浔区发展品质农业进行了系统的思考和分析,从产业规模、产值、效益、成效、不足等方面分析品质农业发展的现实基础,并进一步分析品质农业发展的前景,在充分借鉴参考国内外发展品质农业经验的基础上,重点从产业结构、发展路径、产业体系、基础条件、技术支撑、监管体系、保障机制等七个方面详细论述,提出南浔区发展品质农业的对策措施。论文的研究将为南浔区农业相关部门出台政策规划、为南浔区以及同类地区农业发展提供参考与借鉴。

关键词：品质农业南浔区现实基础发展问题与对策

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刺葡萄皮色素的提取工艺及应用研究

刺葡萄皮色素的提取工艺及应用研究

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作者：潘小红湖南农业大学

学位级别：硕士

本研究测定了三个湘西刺葡萄皮样品的主要化学成分和色价,确定以白马铺的刺葡萄为原料,采用溶剂提取、微波辅助提取方法对刺葡萄皮色素进行提取工艺参数的研究和优化,对比了不同提取方法对刺葡萄皮色素提取效果的影响,并对刺葡萄皮色素... 详细信息

本研究测定了三个湘西刺葡萄皮样品的主要化学成分和色价,确定以白马铺的刺葡萄为原料,采用溶剂提取、微波辅助提取方法对刺葡萄皮色素进行提取工艺参数的研究和优化,对比了不同提取方法对刺葡萄皮色素提取效果的影响,并对刺葡萄皮色素在食品加工中的应用进行了探讨。 1刺葡萄皮主要化学成分的研究刺葡萄皮营养成分丰富:可溶性固形物为11.86%,总糖为9.76%,蛋白质为0.342%,维生素C为9.68mg/100g,分别是对照巨峰的1.2倍、1.51倍、1.47倍和1.61倍;风味成分突出:脂肪含量为0.218%,是对照巨峰的1.5倍;加工及综合利用嫌忌成分低:粗纤维为3.4%,单宁为0.786%,分别是对照巨峰的46%和52%。 2刺葡萄皮色素性质及色价分析 2.1刺葡萄皮色素溶于极性与半极性溶剂中,不溶于非极性溶剂中,是一种水溶性色素。刺葡萄皮色素在0.01%盐酸-甲醇溶液中最大吸收波长为536.0nm,为花色苷特征吸收波长。刺葡萄皮色素的可见光谱分析表明,刺葡萄皮色素在pH1～12的水溶液中以不同的结构形式存在,呈现由红→紫→蓝→绿→黄的花色苷特征颜色变化;当pH≤4时,刺葡萄皮色结构素稳定,具有花色苷的特征吸收峰,当pH＞4时,吸收峰消失。 2.2对比白马铺、高山、木丰三个刺葡萄皮样品与赤霞珠、红提、巨峰的果皮率和色价,刺葡萄果皮率为30.43%,是赤霞珠的1.46倍、红提的5.07倍、巨峰的1.76倍;刺葡萄皮色价为13.00,是赤霞珠的2.43倍、红提的2.87倍、巨峰的22.03倍;提取等量色价的色素,刺葡萄所需的成本分别是赤霞珠、红提、巨峰的14.28%,1.14%和1.11%。 3刺葡萄皮色素提取工艺的研究 3.1溶剂提? 通过对刺葡萄皮色素在不同溶剂、提取时间、提取温度、料液比条件下的单因素试验研究,选择以pH=3.10的盐酸-水溶液为提取剂,以提取温度60℃、40℃,提取时间180min、60min,料液比1:15、1:5,为三元二次旋转正交回归方程的上下水平。运用响应面分析法(RSM)优化刺葡萄皮色素的提取工艺,建立提取温度、提取时间、料液比对色素提取效果影响的回归方程。通过回归分析及试验表明,刺葡萄皮色素提取最优条件是:以pH=3.10的盐酸-水溶液为提取剂,在提取温度为45.7℃,料液比为1:13,提取时间为128.3min,一级提取率为86.12%,花色苷含量为2.2122 mg/g。 3.2微波辅助提取以pH=3.10的盐酸-水溶液为提取剂,设计了以提取功率800W、640W、320W,料液比1:10、1:8、1:5,提取时间180s、140s、160s为微波辅助提取L(3)的三因素三水平试验,结果表明,影响微波辅助提取的主次因素为微波功率＞料液比＞提取时间,且对刺葡萄皮色素的提取效果的影响都达到显著水平(p＜0.05):得微波辅助提取刺葡萄皮色素的最佳工艺:微波功率为640W,料液比为1:8,提取时间为160s,一级提取率为89.97%,花色苷含量为2.3300mg/g。 4刺葡萄皮色素的应用研究 4.1刺葡萄皮色素在酸奶加工中的应用研究研究了刺葡萄皮色素的添加量对酸奶感官、理化性质和乳酸菌数的影响,确定了刺葡萄皮色素浓缩液(花色苷含量为1.0126mg/mL)的最佳添加量为3%(酸奶产品花色苷含量约为3.0378mg/100g),认为刺葡萄皮色素的添加对酸奶风味无不良影响,且在酸奶发酵过程中,可以加速酸奶pH降低、酸度提高的速度。 4.2刺葡萄皮色素在果冻加工中的应用研究探索了刺葡萄皮色素在果冻生产中的添加量及应用条件,研究了刺葡萄皮色素对果冻品质的影响,考察了刺葡萄皮色素在果冻贮藏中的稳定性,确定了刺葡萄皮色素液的最佳添加量为3%(刺葡萄皮色素液的花色苷含量为1.0126mg/mL,果冻产品花色苷含量约为3.0378mg/100g);甜味剂的添加种类和量为:8%白砂糖+2%果葡萄糖浆;酸味剂的添加种类和量为:0.14%柠檬酸+0.01%苹果酸+0.01%乳酸+0.15%柠檬酸钟;刺葡萄皮色素果冻在常温避光、不避光贮藏180d,产品颜色稳定,是一种值得开发的新型、保健果冻。

关键词：刺葡萄花色苷提取微波酸奶果冻

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高中文言文教学现状与对策研究 ——以广东韶关市区的全国示范高中为例

高中文言文教学现状与对策研究 ——以广东韶关市区的全国示范高...

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作者：潘小红重庆师范大学

学位级别：硕士

高中文言文教学是高中语文教学的重要组成部分。本文以广东韶关市区的四所国家级示范高中（广东韶关一中、广东北江中学、韶关市田家炳中学、韶关市第二中学）为例，对高中文言文教学进行了调查研究，并在此基础上探析教学策略。文章分... 详细信息

高中文言文教学是高中语文教学的重要组成部分。本文以广东韶关市区的四所国家级示范高中（广东韶关一中、广东北江中学、韶关市田家炳中学、韶关市第二中学）为例，对高中文言文教学进行了调查研究，并在此基础上探析教学策略。文章分为三大部分。第一部分阐述了与本人研究课题的提出相关的几个方面。一是文言文概念的界定：1、文言文的内涵。2、文言文的特点：①古旧典雅，超越生活;②语言简洁，微言大义;③意蕴丰富，不易理解。二是文言文的价值：1、文言文具有传承中华文化、历史的价值。2、文言文具有提升语文素养的价值。3、文言文在教学中越来越受到重视：①文言文在高中语文教材中的比重不轻;②文言文教学时间在高中语文课时中的比重大;③文言文分值在高中语文考试卷中的比重大。三是研究综述及本文研究方向提出的必要性：1、研究综述。2、本课题研究的特点、意义。3、本课题的研究方法。第二部分是调查内容和结果梳理。在对师生进行问卷调查和对课堂进行实地调研的基础上，本人对高中文言文教学现状进行了梳理，梳理结果如下：1、学生认为文言文重要，但学习兴趣不浓、行动怠慢。2、教师的“教”呈现出多样化：①教师的教学观念多样化;②教师的教学方法多样化;③教师教学价值取向的多样化。3、高中文言文教学目标与初中脱节，目标设置过于理想化。4、师生相互要求高。第三部分是在对教学现状进行梳理的基础上，探析教学策略。主要提出了以下几点：1、树立正确的文言文教学观念：①系统观;②生活观;③操作观;④生本观。2、确定文言文的教学价值、教学目标。3、促使教学实践指向实效：①教师研读文本，既要能钻进去，也要能跳出来;②要从整体上把握文本，重视文意勾连;③重视初高中文言文教学的衔接;④文言文教学生活化、趣味化;⑤避免探究姿态的表象化，回归语文本色。

关键词：高中文言文教学现状调查研究对策

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如何加快县级行外汇业务发展

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现代金融 2007年第10期 20-21页

作者：潘小红丁霞农业银行通州市支行

近年来,县域经济与外部经济的关联日益紧密,不少地方把发展外向经济作为增强地方经济活力、发展全地区经济的重要举措来抓,外向型经济正成为下一轮县域经济发展的制高点。县域外向型经济的发展需要金融的支持,农行作为县域中的大型金融... 详细信息

近年来,县域经济与外部经济的关联日益紧密,不少地方把发展外向经济作为增强地方经济活力、发展全地区经济的重要举措来抓,外向型经济正成为下一轮县域经济发展的制高点。县域外向型经济的发展需要金融的支持,农行作为县域中的大型金融机构,更应该顺应经济发展的趋势,抓住这大好的机会,扩大对此经济增长点的投入,在促进县域外向型经济发展的同时,为自身的发展寻求新的机遇,最终达到双赢的目的。如何才能在众多的金融机构竞争中赢得外汇业务市场?加大金融改革力度,提高自身外汇业务的竞争力成为至关重要的因素。

关键词：外汇业务客户经理国际业务部

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微波消解-电感耦合等离子体质谱快速测定葡萄籽提取物微量元素的研究

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西南林业大学学报（自然科学） 2022年第3期42卷 108-115页

作者：方岚潘小红云南省食品药品审核查验中心云南昆明650106 湖南省药品检验检测研究院湖南长沙410001

采用高压微波消解,建立葡萄籽提取物微量元素ICP-MS检测方法,并对葡萄籽中47种微量元素进行测定,应用芹菜成分分析标准物质对该方法进行验证。结果表明:该方法线性关系良好,相关系数为0.995 9~0.999 9,微量元素的检出限小于0.1μg/L。... 详细信息

采用高压微波消解,建立葡萄籽提取物微量元素ICP-MS检测方法,并对葡萄籽中47种微量元素进行测定,应用芹菜成分分析标准物质对该方法进行验证。结果表明:该方法线性关系良好,相关系数为0.995 9~0.999 9,微量元素的检出限小于0.1μg/L。测定值均在标准值范围内,连续测定6次相对标准偏差(RSD)为0.1%~5.4%,回收率为82.7%~112.8%。11批葡萄籽提取物中,K、Ca、Mg、Na、Fe元素含量高,Al、Mn、Ni、Cu、B、Zn、Rb、Sr、Sn、Ba、Mo元素相对较高,Pb、As、Hg、Cd、Cr及15种稀土元素含量较低。验证结果表明,该方法专属性强、灵敏度高。

关键词：微波消解电感耦合等离子体质谱葡萄籽测定方法提取物微量元素

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化学发光法测定樟树果红色素抗氧化活性的研究

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食品工业 2012年第5期33卷 125-129页

作者：张航航潘小红永州职业技术学院永州425006 湖南省食品药品检验研究院长沙410001

采用化学发光法研究了樟树果实红色素(RPCF)的抗氧化活性及其对DNA损伤的保护作用。运用Pyrogallol-Luminol化学发光体系测定了RPCF对超氧阴离子的清除作用,CuSO4-Phen-VC-H2O2体系测定了RPCF对羟基自由基的清除作用,H2O2-Luminol体系... 详细信息

采用化学发光法研究了樟树果实红色素(RPCF)的抗氧化活性及其对DNA损伤的保护作用。运用Pyrogallol-Luminol化学发光体系测定了RPCF对超氧阴离子的清除作用,CuSO4-Phen-VC-H2O2体系测定了RPCF对羟基自由基的清除作用,H2O2-Luminol体系测定了RPCF对双氧水的清除作用,CuSO4-Phen-VC-H2O2-DNA测定了RPCF对体外DNA损伤的保护作用。试验结果表明RPCF有较好的清除活性氧和保护DNA损伤的活性,其清除.O2-、.OH、H2O2能力及对DNA损伤的保护作用的半抑制浓度(IC50)分别为0.207,0.383,0.227和0.401 mg/mL。

关键词：樟树果实红色素化学发光法抗氧化活性保护DNA损伤

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电穿孔法转化齐整小核菌

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微生物学报 2023年第4期63卷 1681-1689页

作者：潘小红刘佳宁罗锋常鹏西南大学资源环境学院重庆400715 能源生物资源开发重庆市重点实验室重庆400715

【目的】建立齐整小核菌(Sclerotium rolfsii)的电穿孔法转化方案,以实现经济、快速地遗传转化。【方法】将齐整小核菌gpd基因启动子控制的basta抗性基因bar与红色荧光蛋白基因DsRed Max组成的融合蛋白表达盒,通过电击转入野生型齐整小... 详细信息

【目的】建立齐整小核菌(Sclerotium rolfsii)的电穿孔法转化方案,以实现经济、快速地遗传转化。【方法】将齐整小核菌gpd基因启动子控制的basta抗性基因bar与红色荧光蛋白基因DsRed Max组成的融合蛋白表达盒,通过电击转入野生型齐整小核菌细胞中,筛选转化子并进行PCR与荧光观察验证。在此基础上,测试了不同电压、脉冲时间、外源DNA片段与受体细胞比例等条件下的转化效率,以得到优化的电转化参数。最后,采用优化的条件,尝试转化多种抗性基因与荧光蛋白融合表达盒以测试其可用性。【结果】成功得到了bar、sdhR与aphI基因的转化子。【结论】成功建立了优化的齐整小核菌电穿孔转化法。优化的参数条件为电压2kV/cm、脉冲时间1 ms、DNA/匀浆细胞比例3μg/300 mg,电击1次。

关键词：齐整小核菌丝状真菌电穿孔法转化

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