电穿孔法转化齐整小核菌

作     者：潘小红 刘佳宁 罗锋 常鹏 PAN Xiaohong;LIU Jianing;LUO Feng;CHANG Peng

作者机构：西南大学资源环境学院重庆400715 能源生物资源开发重庆市重点实验室重庆400715 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2023年第63卷第4期

页      面：1681-1689页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金(32100092) 重庆市自然科学基金(cstc2021jcyj-msxm X0392) 

主　　题：齐整小核菌 丝状真菌 电穿孔法 转化 

摘      要：【目的】建立齐整小核菌(Sclerotium rolfsii)的电穿孔法转化方案,以实现经济、快速地遗传转化。【方法】将齐整小核菌gpd基因启动子控制的basta抗性基因bar与红色荧光蛋白基因DsRed Max组成的融合蛋白表达盒,通过电击转入野生型齐整小核菌细胞中,筛选转化子并进行PCR与荧光观察验证。在此基础上,测试了不同电压、脉冲时间、外源DNA片段与受体细胞比例等条件下的转化效率,以得到优化的电转化参数。最后,采用优化的条件,尝试转化多种抗性基因与荧光蛋白融合表达盒以测试其可用性。【结果】成功得到了bar、sdhR与aphI基因的转化子。【结论】成功建立了优化的齐整小核菌电穿孔转化法。优化的参数条件为电压2kV/cm、脉冲时间1 ms、DNA/匀浆细胞比例3μg/300 mg,电击1次。