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甜樱桃bHLH家族转录因子发掘及抗寒功能鉴定

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甜樱桃bHLH家族转录因子发掘及抗寒功能鉴定

作者：沈天娇贵州大学

学位级别：硕士

碱性螺旋-环-螺旋蛋白（bHLH,basic helix-loop-helix）是真核生物中最大的一类转录因子（TF,transcription factor）之一,它可以通过与靶基因中特定序列的相互作用来调节基因表达。bHLH转录因子不仅参与植物的生长代谢和发育过程,在植... 详细信息

碱性螺旋-环-螺旋蛋白（bHLH,basic helix-loop-helix）是真核生物中最大的一类转录因子（TF,transcription factor）之一,它可以通过与靶基因中特定序列的相互作用来调节基因表达。bHLH转录因子不仅参与植物的生长代谢和发育过程,在植物应对非生物胁迫的反应中也起着重要作用。由于bHLH转录因子调节机制的复杂性,目前关于bHLH应答低温的调节机制研究仍然有限,相关报道仅限于拟南芥和其他模式植物。对于大多数非模式植物特别是木本果树bHLH成员的许多生物学功能还需要被深入研究。本研究基于甜樱桃（Prunus avium L.）全基因组数据库信息,对甜樱桃bHLH家族成员进行全面的基本生物学特征分析,发掘低温胁迫响应候选成员,并对其中PavbHLH28和PavbHLH61的功能进行了进一步的验证。主要内容及结果如下:1.从甜樱桃基因组数据库中共鉴定出66个非冗余的bHLH家族候选基因,除了6个成员没有被定位到任何一条染色体上外,其余的60个PavbHLH基因不均匀的分布于甜樱桃的8条染色体上。系统发育分析表明,甜樱桃PavbHLHs分为17个亚家族。基于PavbHLHs的氨基酸序列,我们鉴定到了10个Motif,Motif 1和Motif 2在几乎所有PavbHLH蛋白中高度保守。外显子-内含子分析表明,属于同一亚家族的PavbHLHs具有相似的基因结构。启动子分析发现大部分PavbHLHs启动子区域都包含低温响应元件以及其他非生物胁迫响应元件。此外,蛋白互作网络预测分析发现了几个PavbHLHs可能参与调控低温胁迫反应。2.通过RT-PCR技术对所有PavbHLHs在低温胁迫处理下的表达模式进行分析,结果表明,62个PavbHLH基因在不同的低温处理下均有不同程度的表达,其中约20个PavbHLHs在4℃和10℃处理的早期被快速诱导,达到峰值,随后表达下降,而在16℃处理下表达持续上调。结合qRT-PCR分析的结果,初步确定PavbHLH1,-18,-28,-60,-61,-65和-66可能参与冷胁迫反应调控。3.为了验证PavbHLH28和PavbHLH61的抗寒功能,首先对其进行了全长克隆,PavbHLH28序列全长1328 bp,编码435个氨基酸,蛋白分子量为46.52 kDa,等电点6.30。PavbHLH61序列全长756 bp,编码251个氨基酸,蛋白分子大小为28.18 kDa,等电点为7.05。分别对PavbHLH28和-61构建了GFP融合蛋白,通过瞬时转化技术分别导入拟南芥原生质体和烟草表皮细胞,结果发现PavbHLH28和-61均定位于细胞核,与预测的结果一致。构建了含PavbHLH28和-61的植物超表达载体,通过农杆菌介导的遗传转化,分别获得了超表达PavbHLH28的哥伦比亚拟南芥和超表达PavbHLH61的本氏烟草转基因植株。4.为了筛选与低温响应候选成员PavbHLH61具有相互作用的蛋白,我们构建了诱饵载体pGBKT7-PavbHLH61,首先对其进行自激活及毒性检测,结果发现PavbHLH61不具有自激活活性,对酵母也没有毒害作用。将诱饵载体与cDNA文库质粒共转化酵母菌株,经缺陷性培养基筛选、PCR阳性鉴定以及测序比对分析发现了21个非冗余的蛋白与PavbHLH61存在互作关系。其中PavbHLH162-like和Pav HIPP46-like蛋白可能与PavbHLH61相互作用并在冷应激反应中发挥重要作用。

关键词：甜樱桃 bHLH转录因子全基因组分析低温胁迫表达分析功能验证

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幼儿“自然缺失”应对策略探析

学苑教育 2021年第14期 93-94页

作者：沈天娇江苏省南通市竹行街道星怡幼儿园

"自然缺失症"是幼儿园教育的重要现实问题,教师需要转变教育观念,围绕自然缺失问题展开教育教学研究,给予更为系统的教育设计,以顺利摆脱"自然缺失症"的束缚和影响,为幼儿创设适合的自然实践机会。幼儿对自然有更强烈的期待和向往,教师... 详细信息

"自然缺失症"是幼儿园教育的重要现实问题,教师需要转变教育观念,围绕自然缺失问题展开教育教学研究,给予更为系统的教育设计,以顺利摆脱"自然缺失症"的束缚和影响,为幼儿创设适合的自然实践机会。幼儿对自然有更强烈的期待和向往,教师要有实践教育意识,全面引入自然活动内容,为幼儿提供更多接触自然、认识自然的机会,无疑能够消除"自然缺失症"。

关键词：幼儿园自然缺失应对策略

综合康复护理对胃癌手术患者情绪及生活质量的影响

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中国医药指南 2019年第8期17卷 206-207页

作者：沈天娇沈阳市第五人民医院辽宁沈阳110023

目的分析综合康复护理对胃癌手术患者情绪及生活质量的影响。方法将我院收治的60例胃癌手术患者纳入本次研究,入选病例均来自2016年1月～12月,按照随机抽签的方式将其分为甲组(30例)和乙组(30例),甲组行综合康复护理,乙组行常规护理,对... 详细信息

目的分析综合康复护理对胃癌手术患者情绪及生活质量的影响。方法将我院收治的60例胃癌手术患者纳入本次研究,入选病例均来自2016年1月～12月,按照随机抽签的方式将其分为甲组(30例)和乙组(30例),甲组行综合康复护理,乙组行常规护理,对比两组患者的护理效果。结果相比于乙组患者,甲组患者SAS和SDS评分更低,各项生活质量评分更高,P <0.05,组间差异可见统计学意义。结论通过对胃癌手术患者实施综合康复护理干预能显著改善其不良情绪,提升其生活质量。

关键词：胃癌手术综合康复护理情绪生活质量

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学材再建构：有效提升课堂有效性

新课程导学 2022年第25期 59-61页

作者：沈天娇江苏省南通市启秀市北初级中学

数学学材的“再建构”“再创造”是“双减”时代背景下初中数学教学的应然选择。在初中数学教学中，教师要引导学生进行素材重建、方法重塑、结构重组、文化重建，让“学材”更具有现实性、探索性、对话性、互动性、整合性、思想性和生... 详细信息

数学学材的“再建构”“再创造”是“双减”时代背景下初中数学教学的应然选择。在初中数学教学中，教师要引导学生进行素材重建、方法重塑、结构重组、文化重建，让“学材”更具有现实性、探索性、对话性、互动性、整合性、思想性和生命性等特征。“学材再建构”不仅仅应当作为一种教学策略、路径而存在，更应当成为教师的教学思想、观念、理念。通过“学材再建构”，才能充分发挥数学学科育人功能，彰显数学学科的育人价值，提升数学课堂的有效性。

关键词：初中数学学材再建构课堂有效性

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观察原发性肝癌内科护理干预的临床疗效

中国医药指南 2018年第36期16卷 266-267页

作者：沈天娇沈阳市第五人民医院辽宁沈阳110023

目的分析原发性肝癌内科护理干预的临床疗效。方法选取我院收治的58例原发性肝癌患者参与本次研究,入选病例均来自2016年1月至2017年6月,采取随机数字表法将其分为护理组与对照组,每组各29例,对照组行常规护理,护理组在对照组的基础上... 详细信息

目的分析原发性肝癌内科护理干预的临床疗效。方法选取我院收治的58例原发性肝癌患者参与本次研究,入选病例均来自2016年1月至2017年6月,采取随机数字表法将其分为护理组与对照组,每组各29例,对照组行常规护理,护理组在对照组的基础上行内科护理干预,对比两组患者的护理效果。结果护理组患者VAS评分显著低于对照组,各项生活质量评分显著高于对照组。结论通过对原发性肝癌患者实施内科护理干预能有效缓解其疼痛症状,提升其生活质量,值得推广。

关键词：原发性肝癌内科护理干预生活质量疼痛

探讨协同模式在肺癌晚期疼痛患者护理中的临床应用效果

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中国医药指南 2019年第3期17卷 222-223页

作者：沈天娇沈阳市第五人民医院辽宁沈阳110023

目的分析协同模式在肺癌晚期疼痛患者护理中的临床应用效果。方法选取我科收治的64例肺癌晚期疼痛患者参与本次研究,入选病例均来自2016年1月至2017年6月,采取随机抽签的方式将其均分为两组,对照组32例行常规护理,分析组32例在对照组的... 详细信息

目的分析协同模式在肺癌晚期疼痛患者护理中的临床应用效果。方法选取我科收治的64例肺癌晚期疼痛患者参与本次研究,入选病例均来自2016年1月至2017年6月,采取随机抽签的方式将其均分为两组,对照组32例行常规护理,分析组32例在对照组的基础上加用协同护理干预,对比两组患者的护理效果。结果分析组患者疼痛缓解率(93.8%)较对照组(68.8%)更高,社会领域、生理领域、环境领域、心理领域的生活质量评分均较对照组更高,P <0.05,组间差异具有显著性,可见统计学意义。结论对肺癌晚期疼痛患者实施协同护理干预可显著缓解其疼痛症状,改善其生活质量。

关键词：协同模式肺癌晚期疼痛生活质量

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丁香壳聚糖复合剂对樱桃番茄苗期生理的影响

唐山师范学院学报 2013年第5期35卷 46-48页

作者：李长彬沈天娇唐山市开滦第二中学河北唐山063000 哈尔滨医科大学预防医学学院黑龙江哈尔滨150081

考察了壳聚糖叶面喷施、丁香提取液叶面喷施以及不同复配浓度的丁香壳聚糖复合剂叶面喷施方式对樱桃番茄苗期生理的影响。结果表明,丁香与壳聚糖复合剂处理可显著提高樱桃番茄苗期叶片的叶绿素、可溶性糖、可溶性蛋白、过氧化氢酶活性,... 详细信息

考察了壳聚糖叶面喷施、丁香提取液叶面喷施以及不同复配浓度的丁香壳聚糖复合剂叶面喷施方式对樱桃番茄苗期生理的影响。结果表明,丁香与壳聚糖复合剂处理可显著提高樱桃番茄苗期叶片的叶绿素、可溶性糖、可溶性蛋白、过氧化氢酶活性,过氧化物酶活性以及脯氨酸含量。确定了壳聚糖、丁香叶面喷施处理的最佳浓度配比。

关键词：壳聚糖丁香提取液樱桃番茄苗期生理

甜樱桃GH3基因家族全基因组鉴定与表达分析

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园艺学报 2021年第12期48卷 2360-2374页

作者：侯黔东沈天娇余欢欢仇志浪文壮张惠敏吴亚维文晓鹏贵州大学生命科学学院农业生物工程研究院山地植物资源保护与保护种质创新教育部重点实验室山地生态与农业生物工程协同创新中心贵阳550025 贵州大学林学院贵州省森林资源与环境研究中心贵阳550025 贵州省农业科学院果树研究所贵阳550006

以甜樱桃(Prunus avium L.)为材料,对IAA酰胺合成酶(Gretchen Hagen 3,GH3)基因家族全基因组进行鉴定及生物信息分析;同时,分析其在不同组织中的表达及对外源GA3、ABA、MeJA、IAA的响应。结果表明,甜樱桃基因组中共存在8个GH3基因,根据... 详细信息

以甜樱桃(Prunus avium L.)为材料,对IAA酰胺合成酶(Gretchen Hagen 3,GH3)基因家族全基因组进行鉴定及生物信息分析;同时,分析其在不同组织中的表达及对外源GA3、ABA、MeJA、IAA的响应。结果表明,甜樱桃基因组中共存在8个GH3基因,根据在染色体的位置依次命名为Pav GH3.1~PavGH3.8,编码区长度为1 683~1 851 bp,预测大多数基因定位在叶绿体中;PavGH3外显子数3或4,且有较多保守基序;除5号和7号染色体外,其他染色体均有分布;启动子存在ABA、MeJA等6种激素响应元件;PavGH3在进化上分为2组,且PavGH3.5和PavGH3.6与拟南芥GH3一些成员存在共线性。表达分析显示,PavGH3.2、PavGH3.6和PavGH3.7为3个主要表达基因。PavGH3.4和PavGH3.5在第2次生理落果中较第1次上调表达,与正常果实相比,第1次生理落果中PavGH3.5和PavGH3.7下调表达,PavGH3.4和PavGH3.6上调表达。PavGH3.2、PavGH3.3、PavGH3.6和PavGH3.7为主要响应激素的基因。推测PavGH3基因家族广泛参与甜樱桃的生长发育,且可能与落果关系密切。

关键词：甜樱桃 IAA酰胺合成酶基因家族生长素响应表达分析

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二氢杨梅素对4种植物油脂抗氧化作用研究

中国油脂 2017年第6期42卷 89-92页

作者：石治敏杨丽丽沈天娇刘梅赵丽闵敬植余正文贵州师范大学生命科学学院贵阳550001

研究二氢杨梅素(DMY)对植物油脂抗氧化作用。采用紫外可见分光光度计和烘箱强化贮藏法,考察DMY对DPPH自由基清除能力和对山茶油、亚麻籽油、紫苏籽油和油酸的抗氧化作用。结果表明:DMY对DPPH自由基清除能力明显高于TBHQ、BHT、BHA和TP;... 详细信息

研究二氢杨梅素(DMY)对植物油脂抗氧化作用。采用紫外可见分光光度计和烘箱强化贮藏法,考察DMY对DPPH自由基清除能力和对山茶油、亚麻籽油、紫苏籽油和油酸的抗氧化作用。结果表明:DMY对DPPH自由基清除能力明显高于TBHQ、BHT、BHA和TP;当抗氧化剂添加量为0.05%时,不同抗氧化剂在山茶油和油酸中抗氧化作用强弱顺序为TBHQ>DMY>BHA>BHT>TP;不同抗氧化剂在紫苏籽油和亚麻籽油中抗氧化作用强弱顺序为TBHQ>BHA>BHT>DMY>TP;DMY还能协助增强其他抗氧化剂的作用;DMY对4种植物油脂抗氧化效果强弱顺序为山茶油>油酸>亚麻籽油>紫苏籽油。

关键词：二氢杨梅素 DPPH自由基清除能力抗氧化作用