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构建犬声带瘢痕模型及初步筛选声带瘢痕形成相关靶基因

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听力学及言语疾病杂志 2024年第1期32卷 54-59页

作者：黄玉刘豆黄文霞梁耕田武汉大学附属同仁医院(武汉市第三医院)耳鼻咽喉-头颈外科武汉430060

目的采用低温等离子消融术构建犬声带瘢痕模型,并初步筛选出与声带瘢痕形成密切相关的靶基因。方法对4只中华田园犬行低温等离子消融术,损伤左侧声带至肌层,对侧声带不予处理。于术前、术后即刻、术后3周和术后12周对犬双侧声带大体形... 详细信息

目的采用低温等离子消融术构建犬声带瘢痕模型,并初步筛选出与声带瘢痕形成密切相关的靶基因。方法对4只中华田园犬行低温等离子消融术,损伤左侧声带至肌层,对侧声带不予处理。于术前、术后即刻、术后3周和术后12周对犬双侧声带大体形态进行观察,通过HE染色观察声带病理结构变化,透射电镜观察声带超微结构变化。采用高通量测序分析双侧声带基因表达的差异,筛选出显著差异表达的靶基因。结果术后3周术侧声带组织充血肿胀,边缘不齐,可见红色肉芽组织形成;术后12周声带创面局部挛缩凹陷,瘢痕形成;HE染色见瘢痕声带鳞状上皮层明显增厚,纤维层增厚、排列紊乱,局部成团状或束状聚集,肌层亦可见散在的纤维束;透射电镜下见间质增厚、密度不均,细胞肿胀,细胞间界线不清,细胞核增生、线粒体增多,细胞处于活跃状态。高通量测序分析发现众多基因家族参与了声带的瘢痕修复过程,其中密切相关的基因家族有IL家族、趋化因子CCL和CXCL家族、MMPs家族及其抑制剂TIMPs家族、Wnt家族、HSP家族、MAPK家族和TGF-β家族等。结论本研究成功构建了犬声带瘢痕模型,并初步筛选出了与声带瘢痕形成密切相关的靶基因,为声带瘢痕机制的探索提供了一定的参考价值。

关键词：声带瘢痕犬高通量测序靶基因

Lnc-PCIR通过调控PABPC4的泛素化促进喉癌细胞的增殖和迁移

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现代肿瘤医学 2024年第7期32卷 1228-1235页

作者：张杨邓欣欣王珍杨丽萍张莹莹梁耕田武汉大学附属同仁医院(武汉市第三医院)耳鼻咽喉科湖北武汉430060

目的:探究LncRNA RP11-214F16.8(Lnc-PCIR)通过调控多腺苷酸结合蛋白质4[poly(A)-binding protein cytoplasmic 4,PABPC4]的泛素化对喉癌细胞增殖、迁移的影响。方法:利用Human Protein Atlas、GEPIA数据库分析Lnc-PCIR、PABPC4在头颈鳞状细胞癌组织中的水平及患者的总体生存期。选取我院130例喉癌患者的癌及癌旁组织标本,RT-qPCR、Western blot检测组织Lnc-PCIR、PABPC4 mRNA和蛋白水平,并分析Lnc-PCIR水平与患者临床病理参数的关系。将HEP-2、TU212细胞进行不同转染,分为si-Lnc-NC组、si-Lnc-PCIR组、Lnc-NC组、Lnc-PCIR组、si-Lnc-PCIR+NC组、si-Lnc-PCIR+PABPC4组。CCK-8实验、EdU染色和Transwell实验检测细胞增殖和迁移能力;RT-qPCR检测细胞Lnc-PCIR、PABPC4 mRNA水平;HEP-2、TU212细胞分别经放线菌酮(cycloheximide,CHX)、MG132、ML364处理后,Western blot检测细胞PABPC4蛋白水平。20只裸鼠经皮下注射已转染的HEP-2细胞悬液,分为si-Lnc-NC组、si-Lnc-PCIR组;1个月后,测定移植瘤体积、质量和Lnc-PCIR、PABPC4蛋白水平。结果:数据库显示头颈鳞状细胞癌组织中Lnc-PCIR、PABPC4水平高于正常组织,且Lnc-PCIR、PABPC4水平与总体生存期呈负相关(均P<0.05)。与正常组织相比,患者喉癌组织中Lnc-PCIR、PABPC4 mRNA和蛋白水平升高,且Lnc-PCIR水平与患者性别、TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移相关(均P<0.05)。敲低Lnc-PCIR后,细胞Lnc-PCIR、PABPC4蛋白水平降低;细胞培养1 d、2 d、3 d后的OD值、EdU阳性率降低,细胞迁移数减少。而过表达PABPC4能部分逆转敲低Lnc-PCIR对细胞增殖和迁移的影响(均P<0.05);过表达Lnc-PCIR能降低细胞PABPC4泛素化水平(P<0.05)。敲低Lnc-PCIR能抑制小鼠移植瘤生长(P<0.05)。结论:Lnc-PCIR通过调控PABPC4的泛素化促进喉癌细胞的增殖和迁移。

关键词： Lnc-PCIR 多腺苷酸结合蛋白质4 泛素化喉癌

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颈部巨大囊实性畸胎瘤一例

中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2010年第7期45卷 604-606页

作者：童永青戴杰梁耕田温州医学院附属台州医院口腔颌面外科 317000 温州医学院附属台州医院耳鼻咽喉科 317000

患儿女，8个月。第二胎足月顺产，出生即被发现右颈部肿物约8cm×7cm×6cm，转颈及呼吸未见明显影响，初步诊断为颈部畸胎瘤。心脏超声提示房间隔缺损（缺损直径3mm）当时考虑患儿年龄太小，营养不良，房间隔缺损，手术风险大，未行治疗。

关键词：颈部畸胎瘤颈部肿物囊实性房间隔缺损足月顺产初步诊断心脏超声营养不良

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大鼠听泡原代成骨细胞分离培养及鉴定

听力学及言语疾病杂志 2023年第5期31卷 439-443页

作者：黄玉刘豆黄文霞梁耕田武汉大学附属同仁医院(武汉市第三医院)耳鼻咽喉-头颈外科武汉430060

目的对SD大鼠听泡的原代成骨细胞进行分离培养及鉴定。方法选取6只出生24 h的SD乳鼠,从颞区无菌分离出听泡组织,经0.25%胰蛋白酶和I型胶原酶消化后接种培养;待生长融合至80%密度时,进行传代培养,于倒置显微镜下观察原代及传代成骨细胞... 详细信息

目的对SD大鼠听泡的原代成骨细胞进行分离培养及鉴定。方法选取6只出生24 h的SD乳鼠,从颞区无菌分离出听泡组织,经0.25%胰蛋白酶和I型胶原酶消化后接种培养;待生长融合至80%密度时,进行传代培养,于倒置显微镜下观察原代及传代成骨细胞的生长状态,并用EDU法分析其增殖趋势。对生长良好的细胞进行成骨诱导分化,并用ALP试剂盒和茜素红试剂盒进行染色分析,鉴定分化效果。结果大鼠听泡原代及传代成骨细胞培养中,细胞均贴壁良好、生长旺盛,第2 d分别可融合生长至50%、30%的密度,第4 d分别可融合生长至80%、70%的密度,形态呈现多样化。EDU法检测分析见:第1~4 d细胞增殖比均维持在较高水平,从第5 d起呈直线下降趋势。经诱导分化后,细胞生长状态良好,形态依旧多样化,早期以梭形为主,中后期形态较为丰腴。分化后2周,ALP染色见大量细胞胞质呈现深蓝色;第15 d经茜素红染色便可见局部出现橙红色钙化结节。结论通过胰酶联合胶原酶两步消化法,成功地从SD乳鼠听泡中分离出原代成骨细胞,所得细胞生长及传代能力强,经诱导分化后具备良好的成骨活性,为鼓室硬化等疾病的体外研究提供可能。

关键词：大鼠听泡成骨细胞鼓室硬化

RANTES、IL-1β与内毒素在分泌性中耳炎中耳积液中表达及意义

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RANTES、IL-1β与内毒素在分泌性中耳炎中耳积液中表达及意义

2005年浙江省耳鼻咽喉科学术会议

作者：梁耕田浙江省台州医院耳鼻咽喉科

目的:探讨分泌性中耳炎中耳积液中内毒素(endotoxin,ET)、白细胞介素1-β(interleukinl-beta, IL-1β)和正常T细胞表达和分泌,活化时调节的趋化因子(Regulated upon Activation,Normal T Expressed and Secreted,RANTES)的表达以及它们在分泌性中耳炎发病中的作用。方法:对53例72 耳分泌性中耳炎患者行鼓膜穿刺,获得的中耳积液标本行细菌培养,然后采用鲎试验动态浊度法、

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小儿食管光滑异物不同取出方法的临床分析

小儿食管光滑异物不同取出方法的临床分析

华东六省一市耳鼻咽喉-头颈外科学术会议暨2008年浙江省耳鼻咽喉-头颈外科学术年会

作者：梁耕田浙江省台州医院耳鼻咽喉科

儿童食管异物是本科常见急诊之一,国内外资料报道异物种类主要以玩耍时的光滑物品居多,针对此类异物多数学者仍传统使用硬式食管镜或电子胃镜取出,近有报导应用Foley管治疗小儿光滑食管异物具有操作简便、无需全身麻醉等优点。自2003年...

儿童食管异物是本科常见急诊之一,国内外资料报道异物种类主要以玩耍时的光滑物品居多,针对此类异物多数学者仍传统使用硬式食管镜或电子胃镜取出,近有报导应用Foley管治疗小儿光滑食管异物具有操作简便、无需全身麻醉等优点。自2003年来,我们分别应用以上三种方法治疗183例小

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细胞因子及白细胞介素-1β与内毒素在分泌性中耳炎中耳积液中的表达及意义

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临床耳鼻咽喉科杂志 2004年第7期18卷 411-413页

作者：梁耕田崔永华魏明辉刘争王春芳华中科技大学附属同济医院耳鼻咽喉科深圳市红十字会医院耳鼻咽喉科

目的 :探讨分泌性中耳炎 (SOM )中耳积液中内毒素 (ET)、白细胞介素 1β(IL 1β)、正常T细胞表达和分泌、活化时调节的趋化因子 (RANTES)的表达以及它们在SOM发病中的作用。方法 :对 5 3例 72耳SOM患者行鼓膜穿刺 ,获得的中耳积液标本... 详细信息

目的 :探讨分泌性中耳炎 (SOM )中耳积液中内毒素 (ET)、白细胞介素 1β(IL 1β)、正常T细胞表达和分泌、活化时调节的趋化因子 (RANTES)的表达以及它们在SOM发病中的作用。方法 :对 5 3例 72耳SOM患者行鼓膜穿刺 ,获得的中耳积液标本行细菌培养 ,然后采用鲎试验动态浊度法、放射免疫法以及双夹心抗体酶联免疫吸附法检测中耳积液中ET、IL 1β和RANTES的浓度。结果 :①中耳积液中ET、IL 1β和RANTES阳性率分别为 80 .9%、77.8%和 70 .8% ,平均浓度为 (35 .2± 5 1.6 )EU/ml,(1.10± 0 .84 ) μg/L ,(0 .5 2± 0 .4 3) μg/L。②三者在黏液性积液中的含量高于浆液组 (P <0 .0 5 ) ;病程长者 ,ET、RANTES浓度也较高 (P <0 .0 5 ) ;细菌培养阳性中耳积液中三者的浓度亦明显高于细菌培养为阴性的积液 (P <0 .0 1)。③积液中ET含量与IL 1β呈显著正相关性 (r =0 .74 ,P <0 .0 1) ,IL 1β与RANTES之间也呈显著正相关 (r =0 .4 8,P <0 .0 1)。结论 :ET、IL 1β与RANTES参与了SOM发病的免疫机制 ,与鼓室内炎症反应的迁延。

关键词：中耳炎,伴渗出液内毒素白细胞介素1 趋化因子类

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鼻中隔偏曲对中耳压力的影响

鼻中隔偏曲对中耳压力的影响

2005年浙江省耳鼻咽喉科学术会议

作者：梁耕田浙江省台州医院耳鼻咽喉科

为探讨鼻中隔偏曲对中耳压力的影响,我们对31例行鼻中隔粘膜下切除术患者手术前后的鼻气道阻力(NAR)及中耳压力(MEP)进行了测定和相关性研究.发现术前NAR,湍流系数K2明显高于正常(P<0.05)并与MEP相关。术后NAR,K2,MEP显著下降(P<0.05),...

为探讨鼻中隔偏曲对中耳压力的影响,我们对31例行鼻中隔粘膜下切除术患者手术前后的鼻气道阻力(NAR)及中耳压力(MEP)进行了测定和相关性研究.发现术前NAR,湍流系数K2明显高于正常(P<0.05)并与MEP相关。术后NAR,K2,MEP显著下降(P<0.05),而且NAR,K2的变

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内毒素在分泌性中耳炎致病机理中作用

内毒素在分泌性中耳炎致病机理中作用

2005年浙江省耳鼻咽喉科学术会议

作者：梁耕田浙江省台州医院耳鼻咽喉科

中耳腔感染被认为是分泌性中耳炎(secretory otitis media,SOM)发病的主要原因之一,细菌即使在死亡后,其内毒素成分仍有致病作用。本文简述了内毒素的一般特性、内毒素与细菌的关系及它对中耳粘膜形态上的影响,并重点综述了内毒素触发...

中耳腔感染被认为是分泌性中耳炎(secretory otitis media,SOM)发病的主要原因之一,细菌即使在死亡后,其内毒素成分仍有致病作用。本文简述了内毒素的一般特性、内毒素与细菌的关系及它对中耳粘膜形态上的影响,并重点综述了内毒素触发产生细胞因子的信号转导途径,展望了围绕

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