大鼠听泡原代成骨细胞分离培养及鉴定

作     者：黄玉 刘豆 黄文霞 梁耕田 Huang Yu;Liu Dou;Huang Wenxia;Liang Gentian

作者机构：武汉大学附属同仁医院(武汉市第三医院)耳鼻咽喉-头颈外科武汉430060 

出 版 物：《听力学及言语疾病杂志》 (Journal of Audiology and Speech Pathology)

年 卷 期：2023年第31卷第5期

页      面：439-443页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100213[医学-耳鼻咽喉科学] 10[医学] 

基　　金：武汉市科技局知识创新专项曙光计划(2022020801020554) 武汉市卫健委青年项目(WX21Q24) 武汉市卫健委面上项目(WX21A10) 武汉市卫健委面上项目(WX18C05) 

主　　题：大鼠 听泡 成骨细胞 鼓室硬化 

摘      要：目的对SD大鼠听泡的原代成骨细胞进行分离培养及鉴定。方法选取6只出生24 h的SD乳鼠,从颞区无菌分离出听泡组织,经0.25%胰蛋白酶和I型胶原酶消化后接种培养;待生长融合至80%密度时,进行传代培养,于倒置显微镜下观察原代及传代成骨细胞的生长状态,并用EDU法分析其增殖趋势。对生长良好的细胞进行成骨诱导分化,并用ALP试剂盒和茜素红试剂盒进行染色分析,鉴定分化效果。结果大鼠听泡原代及传代成骨细胞培养中,细胞均贴壁良好、生长旺盛,第2 d分别可融合生长至50%、30%的密度,第4 d分别可融合生长至80%、70%的密度,形态呈现多样化。EDU法检测分析见:第1~4 d细胞增殖比均维持在较高水平,从第5 d起呈直线下降趋势。经诱导分化后,细胞生长状态良好,形态依旧多样化,早期以梭形为主,中后期形态较为丰腴。分化后2周,ALP染色见大量细胞胞质呈现深蓝色;第15 d经茜素红染色便可见局部出现橙红色钙化结节。结论通过胰酶联合胶原酶两步消化法,成功地从SD乳鼠听泡中分离出原代成骨细胞,所得细胞生长及传代能力强,经诱导分化后具备良好的成骨活性,为鼓室硬化等疾病的体外研究提供可能。