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大豆Bowman-Birk胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备与鉴定

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中国食品学报 2020年第7期20卷 216-221页

作者：王耀李燕虹吴佳蓓邢云瑞曹金博陈秀金李兆周邓瑞广胡骁飞河南科技大学食品与生物工程学院食品加工与安全国家级实验教学示范中心河南洛阳471023 河南省农业科学院河南省动物免疫学重点实验室郑州450002

为制备免疫学特性良好的大豆Bowman-Birk胰蛋白酶抑制因子(BBI)单克隆抗体(mAb),以50μg/只的免疫剂量将BBI免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA和间接竞争ELISA试验鉴定多抗血清效价和敏感性。选择血清效价和敏感性较优的小鼠进行细胞融合,... 详细信息

为制备免疫学特性良好的大豆Bowman-Birk胰蛋白酶抑制因子(BBI)单克隆抗体(mAb),以50μg/只的免疫剂量将BBI免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA和间接竞争ELISA试验鉴定多抗血清效价和敏感性。选择血清效价和敏感性较优的小鼠进行细胞融合,多次筛选得到分泌BBI m Ab的稳定杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备BBI mAb并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明:1号小鼠经免疫后效价最高且敏感性最好,半数抑制浓度(IC50)为868.58 ng/mL。经细胞融合筛选得到5株杂交瘤细胞,其中3B7-B10 mAb效价达到1∶4.096×10^5以上,亚型为IgG1型,IC50为83.07 ng/mL,具有亲和力较高且特异性强的优点,表明所制备的mAb免疫学特性良好,能够为建立大豆及其制品中BBI的免疫学检测方法提供良好的抗体基础。

关键词：大豆Bowman-Birk胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体免疫学特性

盐酸可乐定人工抗原的合成及鼠源多抗血清ELISA鉴定

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食品与机械 2021年第7期37卷 76-80,111页

作者：王耀曹金博李铁梅庞杏豪胡骁飞河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471003 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450002 西北农林科技大学动物医学院陕西咸阳712100 中国检验检疫科学研究院北京100176

目的:获得敏感性高,特异性强的新型瘦肉精盐酸可乐定(Clonidine hydrochloride,CLO)鼠源多抗血清。方法:以CLO的衍生物盐酸阿可乐定(Apraclonidine hydrochloride,ACLO)为半抗原,采用戊二醛法将ACLO分别与牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)和鸡卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)偶联,合成免疫抗原CLO-BSA和包被抗原CLO-OVA。采用紫外扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其偶联效果后,免疫BALB/c小鼠,制备多抗血清。利用间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定其免疫学特性。结果:合成的人工抗原免疫效果较好,所获小鼠多抗血清效价均达到1∶12800以上,其中3号小鼠敏感性最好,半数抑制质量浓度(IC_(50))为82.75 ng/mL,与其他几种常见的瘦肉精类药物的交叉反应率均小于0.9%,特异性良好。结论:通过戊二醛法成功合成了高免疫原性的CLO人工抗原,并获得敏感性高,特异性强的CLO鼠源多抗血清。

关键词：盐酸可乐定人工抗原多抗血清 ELISA

强力霉素人工抗原的制备及鼠源多抗的ELISA鉴定

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现代食品科技 2019年第12期35卷 182-188页

作者：曹金博孟继秋李燕虹王耀孙亚宁胡骁飞河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450002 河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471003

为制备强力霉素(Doxycycline,DC)人工抗原并获得免疫学特性良好的DC鼠源多抗血清。本试验采用琥珀酸酣法在DC分子上引入羧基基团,然后采用改进碳二亚胺法(EDC)将其与载体蛋白偶联制备人工抗原,经紫外扫描(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定... 详细信息

为制备强力霉素(Doxycycline,DC)人工抗原并获得免疫学特性良好的DC鼠源多抗血清。本试验采用琥珀酸酣法在DC分子上引入羧基基团,然后采用改进碳二亚胺法(EDC)将其与载体蛋白偶联制备人工抗原,经紫外扫描(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定其偶联效果,以30μg/只的剂量(人工抗原)免疫4只BALB/c小鼠,并对所获鼠源多抗血清采用间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定其免疫学特性。结果表明,人工抗原偶联效果良好,免疫的4只小鼠多抗血清效价均达到1:12800,且均有抑制效果,其中4号小鼠产生的多抗血清效果最佳,半数抑制浓度(IC50)为24.75ng/mL,与土霉素、金霉素、四环素的交叉反应率分别为3.4%、3.8%、3.0%,与其他兽药及载体蛋白的交叉反应率均小于0.3%,特异性良好。本试验成功合成DC人工抗原并获得免疫学特性良好的DC鼠源多抗血清,为后期单克隆抗体的制备及免疫学快速检测方法的建立奠定良好基础。

关键词：强力霉素人工抗原多抗血清 ELISA

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免疫分析技术在草甘膦残留检测中的应用

中国免疫学杂志 2018年第2期34卷 291-295页

作者：李燕虹王耀裴亚峰樊振江曹金博吴佳蓓河南科技大学食品与生物工程学院/食品加工与安全国家实验教学示范中心洛阳471023 漯河食品职业学院漯河462300

草甘膦作为一种高效除草剂,越来越广泛地被应用于农业生产。与此同时,草甘膦的残留问题及其潜在危害也逐渐引起人们密切关注。近年来,针对草甘膦残留的检测方法已成为研究热点,其中荧光免疫、酶联免疫吸附、免疫传感器等免疫分析方法因... 详细信息

草甘膦作为一种高效除草剂,越来越广泛地被应用于农业生产。与此同时,草甘膦的残留问题及其潜在危害也逐渐引起人们密切关注。近年来,针对草甘膦残留的检测方法已成为研究热点,其中荧光免疫、酶联免疫吸附、免疫传感器等免疫分析方法因具有灵敏、特异、快速的特点而发展迅速。本文主要对草甘膦残留的免疫分析技术进行综述,为草甘膦残留快速检测深入研究提供参考。

关键词：草甘膦残留免疫分析

免疫分析技术在“新型瘦肉精”残留检测中的应用

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食品与发酵工业 2019年第6期45卷 231-235页

作者：王耀曹金博陈曦李燕虹陈秀金李兆周邓瑞广胡骁飞河南科技大学食品与生物工程学院食品加工与安全国家级实验教学示范中心河南洛阳471023 河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002

近年来,一些"新型瘦肉精"药物被非法用于畜禽养殖,如苯乙醇胺A、赛庚啶、可乐定等,该类药物添加在饲料和动物饮水中能有效促进禽畜生长,提高瘦肉率,降低养殖成本,但其在肉制品中的残留会对人体产生蓄积毒性。免疫分析技术利用高亲和力... 详细信息

近年来,一些"新型瘦肉精"药物被非法用于畜禽养殖,如苯乙醇胺A、赛庚啶、可乐定等,该类药物添加在饲料和动物饮水中能有效促进禽畜生长,提高瘦肉率,降低养殖成本,但其在肉制品中的残留会对人体产生蓄积毒性。免疫分析技术利用高亲和力抗体对抗原进行特异识别,灵敏度高,是目前快速检测方法研究的热点之一,已在"传统瘦肉精"的快速检测中成熟应用,但其在"新型瘦肉精"快速检测中的应用仍处于起步阶段。该文对免疫分析技术在"新型瘦肉精"残留检测中的应用进行综述,并对其未来发展方向进行展望。

关键词：新型瘦肉精免疫分析应用

免疫分析技术在四环素类抗生素残留检测中的应用

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饲料工业 2019年第12期40卷 53-59页

作者：曹金博王耀胡骁飞邓瑞广李燕虹孟继秋古绍彬河南科技大学食品与生物工程学院食品加工与安全国家级实验教学示范中心河南省食品原料工程技术研究中心河南洛阳471023 河南省农业科学院农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室河南郑州450002

四环素类抗生素一类广谱性抗生素,主要用于治疗各种感染性疾病,但长期的违规滥用,导致其在动物源性食品以及环境中大量残留,严重威胁人类健康。因此,急需建立简单、灵敏的快速检测方法。免疫分析技术因其特异性强、灵敏度高等优势已成... 详细信息

四环素类抗生素一类广谱性抗生素,主要用于治疗各种感染性疾病,但长期的违规滥用,导致其在动物源性食品以及环境中大量残留,严重威胁人类健康。因此,急需建立简单、灵敏的快速检测方法。免疫分析技术因其特异性强、灵敏度高等优势已成为快速检测方法研究的热点。本文主要综述了已在四环素类抗生素残留检测中应用的放射性免疫、酶联免疫、胶体金免疫层析以及电化学免疫传感器免疫分析方法,并对其发展方向进行展望。

关键词：四环素类抗生素残留免疫分析快速检测

6-苄基腺嘌呤人工抗原的合成及鼠源多克隆抗体的制备

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河南农业科学 2021年第5期50卷 157-164页

作者：孟继秋胡骁飞王耀邢云瑞曹金博陈琳琳孙亚宁张改平河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450002 河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471003 河南农业大学河南郑州450002

为制备6-苄基腺嘌呤(6-benzylaminopurine,6-BA)的抗体,利用高碘酸盐法将6-BA的代谢产物6-苄基腺苷(6-benzylaminopurine riboside,6-BAR)分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备出免疫抗原6-BAR-BSA和包被抗原6-BAR-OVA。采用紫外扫描(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)对人工抗原进行初步鉴定。用6-BAR-BSA以背部皮下多点注射的方式免疫4只BALB/c小鼠(编号1—4),免疫剂量50μg/只,间隔21 d,4免后10 d断尾采血制备鼠源多克隆抗体血清。间接ELISA测定血清效价,间接竞争ELISA测定血清敏感性及特异性。结果显示,6-BA人工抗原制备成功,免疫小鼠血清效价均达到1∶51200以上,2号小鼠血清效价最高为1∶204800,且其对6-BA的半数抑制浓度(IC50)为13.48μg/L,线性范围为0.26~701.45μg/L,与激动素、赤霉素、4-氯苯氧乙酸钠、腐霉利、呋喃苯烯酸钠、BSA、OVA交叉反应率均小于0.01%。综上,成功制备了6-BA人工抗原,并通过动物免疫得到高敏感性、高特异性鼠源多克隆抗体。

关键词： 6-苄基腺嘌呤 6-苄基腺苷人工抗原 ELISA 多克隆抗体

巴氯芬人工抗原的合成及其鼠源多克隆抗体的制备

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2021年第11期49卷 46-52页

作者：王耀曹金博胡骁飞段张秀庞杏豪孟继秋孙亚宁曹夕丹陈秀金李兆周河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471023 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450002 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 新乡市动物卫生监督所河南新乡453003

【目的】合成巴氯芬(baclofen,BA)人工抗原并制备其多克隆抗体,为巴氯芬免疫学快速检测方法的建立奠定基础。【方法】采用碳二亚胺(EDC)法将BA分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)偶联,合成免疫抗原BA-BSA和包被抗原BA-OVA,通... 详细信息

【目的】合成巴氯芬(baclofen,BA)人工抗原并制备其多克隆抗体,为巴氯芬免疫学快速检测方法的建立奠定基础。【方法】采用碳二亚胺(EDC)法将BA分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)偶联,合成免疫抗原BA-BSA和包被抗原BA-OVA,通过紫外扫描和SDS-PAGE凝胶电泳鉴定其偶联效果。将免疫抗原BA-BSA免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA、间接竞争ELISA及交叉反应试验分别对所获多克隆抗体的效价、敏感性、特异性等免疫学特性进行鉴定。【结果】紫外扫描和SDS-PAGE凝胶电泳结果表明人工抗原偶联效果良好。ELISA结果表明,多克隆抗体的效价达到1∶25600,半数抑制浓度(IC50)为22.33 ng/mL,且与巴氯芬结构类似物及其他瘦肉精类药物(γ-氨基丁酸、氯丙那林、可乐定、赛庚啶、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺)交叉反应率均小于0.3%,具有良好的敏感性和特异性。【结论】成功合成了巴氯芬人工抗原,并制备了免疫学特性良好的巴氯芬鼠源多克隆抗体。

关键词：巴氯芬人工抗原多克隆抗体 ELISA

大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备与鉴定

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食品与机械 2019年第8期35卷 59-63页

作者：王耀李燕虹曹金博孙亚宁邢云瑞陈秀金邓瑞广胡骁飞河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471023 河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450002

为制备免疫学特性良好的大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子(Kunitz trypsin inhibitor,KTI)单克隆抗体,以50μg/只的免疫剂量将KTI免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定多抗血清效价和敏感性,选择血清效价和敏感性较优的小鼠进行... 详细信息

为制备免疫学特性良好的大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子(Kunitz trypsin inhibitor,KTI)单克隆抗体,以50μg/只的免疫剂量将KTI免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定多抗血清效价和敏感性,选择血清效价和敏感性较优的小鼠进行细胞融合,多次筛选得到稳定分泌KTI单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb)的杂交瘤细胞株,采用体内诱生腹水法制备mAb并对其免疫学特性进行鉴定。结果表明,1号小鼠经免疫后效价最高且敏感性最好,半数抑制浓度(IC50)为157.33ng/mL,经细胞融合筛选得到4E6-E9阳性杂交瘤细胞株,所制备的抗体效价达到1:1 638 400,亚型为IgG1型,亲和常数为1.45×108 L/mol,IC50为28.39ng/mL,且特异性强。说明试验所制备的mAb免疫学特性良好,能够为建立灵敏、特异的KTI免疫学检测方法提供良好的抗体保障。

关键词： Kunitz胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体免疫学特性