6-苄基腺嘌呤人工抗原的合成及鼠源多克隆抗体的制备

作     者：孟继秋 胡骁飞 王耀 邢云瑞 曹金博 陈琳琳 孙亚宁 张改平 MENG Jiqiu;HU Xiaofei;WANG Yao;XING Yunrui;CAO Jinbo;CHEN Linlin;SUN Yaning;ZHANG Gaiping

作者机构：河南省农业科学院动物免疫学重点实验室河南郑州450002 河南科技大学食品与生物工程学院河南洛阳471003 河南农业大学河南郑州450002 

出 版 物：《河南农业科学》 (Journal of Henan Agricultural Sciences)

年 卷 期：2021年第50卷第5期

页      面：157-164页

学科分类：0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 090601[农学-基础兽医学] 08[工学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 083201[工学-食品科学] 

基　　金：“十三五”国家重点研发计划项目(2018YFC1602903) 国家科技支撑计划项目(2014BAD13B05) 河南省农业科学院科技创新创意项目(2020CX20) 

主　　题：6-苄基腺嘌呤 6-苄基腺苷 人工抗原 ELISA 多克隆抗体 

摘      要：为制备6-苄基腺嘌呤(6-benzylaminopurine,6-BA)的抗体,利用高碘酸盐法将6-BA的代谢产物6-苄基腺苷(6-benzylaminopurine riboside,6-BAR)分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备出免疫抗原6-BAR-BSA和包被抗原6-BAR-OVA。采用紫外扫描(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)对人工抗原进行初步鉴定。用6-BAR-BSA以背部皮下多点注射的方式免疫4只BALB/c小鼠(编号1—4),免疫剂量50μg/只,间隔21 d,4免后10 d断尾采血制备鼠源多克隆抗体血清。间接ELISA测定血清效价,间接竞争ELISA测定血清敏感性及特异性。结果显示,6-BA人工抗原制备成功,免疫小鼠血清效价均达到1∶51200以上,2号小鼠血清效价最高为1∶204800,且其对6-BA的半数抑制浓度(IC50)为13.48μg/L,线性范围为0.26~701.45μg/L,与激动素、赤霉素、4-氯苯氧乙酸钠、腐霉利、呋喃苯烯酸钠、BSA、OVA交叉反应率均小于0.01%。综上,成功制备了6-BA人工抗原,并通过动物免疫得到高敏感性、高特异性鼠源多克隆抗体。