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单核细胞增生李斯特氏菌LAMP试剂盒的研制及在食品检测中的应用

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中国食品学报 2013年第1期13卷 138-144页

作者：张体银曹以诚陈洵郑晶黄晓蓉李志勇邵碧英黄嫦娇吴谦福建出入境检验检疫局国家鳗鱼与食源性微生物检测重点实验室福建省检验检疫技术研究重点实验室福州350001 广州华峰生物科技有限公司广州510663 广东出入境检验检疫局广州510623

利用环介导等温扩增(1oop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立食品中单增李斯特氏菌的检测方法。通过对反应条件的优化,组装单增李斯特氏菌LAMP检测试剂盒,并对其特异性、敏感性和适用性进行验证。试验结果显示:该试剂盒... 详细信息

利用环介导等温扩增(1oop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立食品中单增李斯特氏菌的检测方法。通过对反应条件的优化,组装单增李斯特氏菌LAMP检测试剂盒,并对其特异性、敏感性和适用性进行验证。试验结果显示:该试剂盒适用于食品中单增李斯特氏菌的快速检测,用环介导等温扩增法在65℃条件下,1h内可检出单增李斯特氏菌,其灵敏度达17CFU/mL,特异性为100%,无假阳性和假阴性出现。用该方法与国标方法分别检测120种样品中的单增李斯特氏菌,两种方法的符合率达100%。该试剂盒具有高效、特异性强和敏感性高等特点,可满足大批量样品快速筛选的要求。

关键词：环介导等温扩增技术单增李斯特氏菌试剂盒

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动物产品的DNA提取方法

畜牧与兽医 2005年第9期37卷 47-49页

作者：邵碧英杨婕张体银福建出入境检验检疫局福建福州350003

采用以异硫氰酸胍法为基础的提取方法分别提取牛肉、山羊肉、鸡肉、猪肉干、鱼粉、牛奶粉、牛奶、鱼油以及牛油中的DNA,18S rDNA片段的PCR扩增结果表明各样品已提取到DNA,且DNA中不含抑制PCR的物质。牛肉、牛奶粉、牛奶、加入牛肉DNA的... 详细信息

采用以异硫氰酸胍法为基础的提取方法分别提取牛肉、山羊肉、鸡肉、猪肉干、鱼粉、牛奶粉、牛奶、鱼油以及牛油中的DNA,18S rDNA片段的PCR扩增结果表明各样品已提取到DNA,且DNA中不含抑制PCR的物质。牛肉、牛奶粉、牛奶、加入牛肉DNA的鱼油和牛油的牛源性成分PCR检测结果为阳性;山羊肉和加入山羊肉DNA的鱼油的羊源性成分PCR检测结果为阳性;牛、羊源性成分PCR产物经酶切鉴定为非假阳性。这些结果显示本研究建立的动物产品DNA提取方法是可行的。

关键词：动物产品 DNA提取 PCR

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全自动荧光酶联免疫方法检测食品中沙门氏菌

安徽农业科学 2010年第10期38卷 5320-5321,5323页

作者：黄嫦娇黄晓蓉郑晶张体银陈彬福建出入境检验检疫局福建福州350001

应用全自动荧光酶联免疫(VIDAS)方法和GB/T4789.4-2003对沙门氏菌进行检测,对其灵敏性和特异性进行比较。当样品中细菌含量只有3CFU/25g时,VIDAS方法的检出率达到90%,其中活菌的检测限为4CFU/25g;且用该方法检测沙门氏菌属和非沙门氏菌... 详细信息

应用全自动荧光酶联免疫(VIDAS)方法和GB/T4789.4-2003对沙门氏菌进行检测,对其灵敏性和特异性进行比较。当样品中细菌含量只有3CFU/25g时,VIDAS方法的检出率达到90%,其中活菌的检测限为4CFU/25g;且用该方法检测沙门氏菌属和非沙门氏菌属标准株的特异性为100%,无假阳性和假阴性出现。结果表明,该方法具有简单、快速、特异性好和敏感性高等特点,并可满足大批样品沙门氏菌筛选检测的要求,适用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等领域。

关键词：沙门氏菌 VIDAS GB/T4789.4-2003

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表达新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒的筛选

中国兽医学报 2006年第1期26卷 20-23页

作者：张体银孙蕾梁萍刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

将转移载体P11SF和PN11SF分别与282E4株鸡痘病毒(282E4strain fowlpox virus,282E4FPV)和大空斑株鸡痘病毒(large plaque strain fowlpox *** FPV)共转染鸡胚成纤维细胞,通过蓝斑筛选,得到4株重组鸡痘病毒rFPV282E4-SFA、rFPVLP-SFA、rFPV282E4-SFB和rFPVLP-SFB,通过PCR和间接免疫荧光鉴定均为阳性,另外将各重组病毒分别传20代,测其遗传稳定性,结果显示均具有良好的稳定性。对SPF鸡进行免疫效力试验,攻毒后均100%保护,而对于商品鸡,保护率分别为64%、60%、52%和88%。

关键词：新城疫病毒 F基因重组鸡痘病毒筛选免疫效力

应用DiversiLab分型系统对沙门氏菌进行同源性分析

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食品科技 2012年第10期37卷 291-295,303页

作者：郑晶唐中伟陈彬黄晓蓉林杰吴谦张体银福建出入境检验检疫局福州350001 福建农林大学福州350002

目的:为研究食品污染中沙门氏菌间的同源性关系,建立起沙门氏菌基于重复序列的分型技术。通过建立DiversiLab基因图谱数据库,以便对将来不同来源的沙门氏菌的基因图谱进行即时比较,确定其同源性,进而追溯污染来源,切断传播途径,为预测... 详细信息

目的:为研究食品污染中沙门氏菌间的同源性关系,建立起沙门氏菌基于重复序列的分型技术。通过建立DiversiLab基因图谱数据库,以便对将来不同来源的沙门氏菌的基因图谱进行即时比较,确定其同源性,进而追溯污染来源,切断传播途径,为预测预警保障食品安全提供科学依据,为防止食源性疾病的发生提供技术支持。同时进行血清分型,比较分析2种方法的优劣和之间的关系。方法:对2002～2010年福建省出入境检验检疫局从各类食品及饲料中分离出的沙门氏菌先进行血清分型,然后进行DiversiLab分型,其中包括:DNA提取,rep-PCR和微电泳芯片分离检测。rep-PCR条件:94℃预变性2min;94℃变性30s,50℃退火30s,70℃延伸90s,35个循环,最后70℃延伸3min。结果:23株沙门氏菌被分成6个血清型,DiversiLab分型能将相同血清型的菌株分为不同的亚型。同一企业来源的菌株具有同源性。结论:DiversiLab分型系统是一种快速、易于操作、高重复性、高分辨率的基因分型方法,可作为食源性疾病同源性分型工具。结论:DiversiLab分型的分辨率高于血清型,2种分型方法密切相关。

关键词： DiversiLab分型系统沙门氏菌同源性分析

副结核分枝杆菌MAP0862蛋白的重组表达及抗原性分析

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黑龙江畜牧兽医 2019年第5期 79-81页

作者：李丹丹张体银王绥家晁哲高慎阳海口海关检验检疫技术中心海口570311 福州海关检验检疫技术中心福州350001 海南省农业科学院畜牧兽医研究所海口571100 锦州医科大学畜牧兽医学院辽宁锦州121001

为了验证MAP0862蛋白在副结核分枝杆菌感染鉴别诊断中的作用,试验以从发病山羊消化道病料中提取的副结核分枝杆菌基因组DNA为模板,克隆MAP0862基因并构建重组表达载体pET28a-MAP0862,然后对其进行诱导表达及Western-blot分析。结果表明... 详细信息

为了验证MAP0862蛋白在副结核分枝杆菌感染鉴别诊断中的作用,试验以从发病山羊消化道病料中提取的副结核分枝杆菌基因组DNA为模板,克隆MAP0862基因并构建重组表达载体pET28a-MAP0862,然后对其进行诱导表达及Western-blot分析。结果表明:检测到的羊副结核分枝杆菌MAP0862基因与GenBank中K10菌株基因完全相同;重组表达载体pET28a-MAP0862经IPTG诱导表达出约40 ku的目标蛋白,与预期结果相符;Western-blot对比分析显示, MAP0862蛋白只与羊副结核阳性血清发生显色反应。说明MAP0862蛋白具有良好的免疫反应原性和特异性。

关键词：副结核分枝杆菌 MAP0862基因克隆表达免疫反应原性特异性

鸡痘病毒通用高效表达载体的构建及其初步应用

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中国兽医学报 2004年第5期24卷 429-432页

作者：孙蕾吴艳涛张体银陈素娟刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

利用分子克隆技术对本室构建的高效鸡痘病毒表达载体 p1 1 S进行改造 ,在其人工合成禽痘病毒 ( FPV)强启动子 Ps的下游引入含 7个单一酶切位点的多克隆位点 ( MCS) ,构建了便于外源基因插入的通用性更强的高效单表达载体 p N1 1 S。然后... 详细信息

利用分子克隆技术对本室构建的高效鸡痘病毒表达载体 p1 1 S进行改造 ,在其人工合成禽痘病毒 ( FPV)强启动子 Ps的下游引入含 7个单一酶切位点的多克隆位点 ( MCS) ,构建了便于外源基因插入的通用性更强的高效单表达载体 p N1 1 S。然后将 FPV早晚期启动子 PE/ L 及其启动的鹅源新城疫病毒 NDV ZJ1株的 F基因一并插入 p N1 1 S中 ,使PE/ L 与 Ps反向串联 ,从而构建出 1个含 NDV ZJ1株 F基因的重组 FPV高效双表达载体 p N1 1 SEF,其 MCS可以用于插入其他外源基因。在此基础上 ,将 NDV ZJ1株的 HN基因插入 p N1 1 SEF的 Ps启动子下游的 MCS中 ,构建了共表达 NDV ZJ1株 F和 HN基因的重组 FPV双表达载体 p N1 1 SEFHN。将 p H1 1 SEFHN质粒 DNA与 FPV2 82 E4株共转染 CEF,得到共表达 NDV ZJ1株和 HN基因的重组 FPV,间接免疫荧光实验初步证明外源基因得到了较好的表达。表明所构建的通用高效 FPV表达载体有利于高效基因工程活载体疫苗的研制。

关键词：鸡痘病毒表达载体新城疫病毒 F基因 HN基因疫苗

应用间接ELISA检测鸡痘病毒抗体方法的建立

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中国预防兽医学报 2005年第6期27卷 540-543,548页

作者：张体银孙蕾孙学辉刘秀梵扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室江苏扬州225009

应用鸡胚成纤维细胞(CEF)扩增鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)并提纯后作为抗原建立了具有较高特异性和灵敏性的间接ELISA方法.通过方阵滴定法来确定抗原最佳包被浓度为2.7μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1:100,其阳性临界值为OD≥0.113.将... 详细信息

应用鸡胚成纤维细胞(CEF)扩增鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)并提纯后作为抗原建立了具有较高特异性和灵敏性的间接ELISA方法.通过方阵滴定法来确定抗原最佳包被浓度为2.7μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1:100,其阳性临界值为OD≥0.113.将400份FPV免疫实验鸡血清用本方法进行检测,其阳性检出率为81.25%(325/400).此外,将该方法与琼脂扩散试验进行比较检测血清样品,结果显示本方法的灵敏度比琼脂扩散试验灵敏400～800倍,而且还有特异性强,操作简便、快速等优点.

关键词：间接ELISA 鸡痘病毒抗体

生物安全隔离区在福建出口肉禽产业中的实践和应用

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畜牧与兽医 2014年第12期46卷 120-122页

作者：张体银张伯强詹开瑞李文迹吴中海徐兴进福建出入境检验检疫局/福建省检验检疫技术研究重点实验室福建福州350001 福建圣农发展股份有限公司福建光泽354100

动物疫病已成为影响动物和动物产品国际贸易的关键因素,阻碍了我国肉类产品的出口。OIE推行新的动物疫病区域管理措施,即生物安全隔离区,目前已成为控制动物疫病、促进国际贸易的一种重要措施。本文结合出口肉禽贸易的需求,应用国际规... 详细信息

动物疫病已成为影响动物和动物产品国际贸易的关键因素,阻碍了我国肉类产品的出口。OIE推行新的动物疫病区域管理措施,即生物安全隔离区,目前已成为控制动物疫病、促进国际贸易的一种重要措施。本文结合出口肉禽贸易的需求,应用国际规则探索在出口肉禽产业链实行生物安全隔离区管理,福建地区初步建立了运行有效的生物安全体系,在开拓国际市场、促进肉类产品出口取得一定成效,可为我国建立切实可行的非疫区和稳定出口肉类基地提供借鉴。

关键词：生物安全隔离区生物安全实践和应用