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珠芽魔芋AbNCED5基因克隆及表达分析

分子植物育种 2024年

作者：王天喜张利娜谢雨琪王蕊嘉吴学尉李文涵赵青青云南大学农学院

ABA能够诱导和维持休眠，抑制植物生长，NCED是ABA合成过程中的限速酶基因，对ABA的合成进行调控。为了解析AbNCED5在珠芽魔芋球茎休眠解除过程中的功能，本研究用休眠初期的珠芽魔芋球茎为材料，克隆了该基因并分析了其在不同休眠时期... 详细信息

ABA能够诱导和维持休眠，抑制植物生长，NCED是ABA合成过程中的限速酶基因，对ABA的合成进行调控。为了解析AbNCED5在珠芽魔芋球茎休眠解除过程中的功能，本研究用休眠初期的珠芽魔芋球茎为材料，克隆了该基因并分析了其在不同休眠时期的表达模式。结果显示，珠芽魔芋AbNCED5基因的开放阅读框长度为1 893 bp，编码630个氨基酸，编码蛋白的分子式为C3089H4817N881O907S21，分子量为69.48 kD，等电点为7.29。总平均亲水性为-0.283，属于亲水性蛋白，且不存在跨膜结构域和信号肽序列。AbNCED5基因编码蛋白的二级结构中无规则卷曲占比最大(56.83%)。在进化关系上，珠芽魔芋AbNCED5与黄石斛的亲缘关系最近。表达模式分析发现，珠芽魔芋AbNCED5在休眠期表达量最高，萌芽期表达量最低，且休眠期的表达量是萌芽期的12.3倍。本研究为揭示珠芽魔芋AbNCED5基因在不同休眠时期球茎中的功能提供依据。

关键词： AbNCED5基因珠芽魔芋基因克隆生物信息学分析表达分析

不同休眠时期珠芽魔芋球茎转录组SSR和SNP位点信息分析

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分子植物育种 2024年第15期22卷 5007-5013页

作者：王天喜王蕊嘉张利娜谢雨琪吴学尉张达郑莉云南大学农学院昆明650504

为了解珠芽魔芋球茎转录组中SSR以及SNP的具体情况,对珠芽魔芋不同休眠时期(休眠期,萌动期,萌芽期)的球茎进行转录组测序,利用MISA和Varscan程序对测序得到的unigene进行分析,筛选并识别出SSR和SNP位点。结果显示,从珠芽魔芋292 086条un... 详细信息

为了解珠芽魔芋球茎转录组中SSR以及SNP的具体情况,对珠芽魔芋不同休眠时期(休眠期,萌动期,萌芽期)的球茎进行转录组测序,利用MISA和Varscan程序对测序得到的unigene进行分析,筛选并识别出SSR和SNP位点。结果显示,从珠芽魔芋292 086条unigene中发现52 324个SSR位点和807 836个SNP位点,SSR位点的出现频率为17.91%;单核苷酸(33.97%)、二核苷酸(47.83%)和三核苷酸(16.77%)重复占比较高,6~11次的重复占65.71%;重复基元共130种,其中二核苷酸重复基元AG/CT是优势重复基元类型,占总SSR的30.64%;基元长度在10~20 bp的SSR占80.33%;SNP变换类型中转换(523 617个)远高于颠换(284 219个)。本研究从珠芽魔芋球茎转录组测序结果中挖掘到大量的SSR和SNP位点,为珠芽魔芋的球茎休眠及解除、分子辅助育种等提供一定的科学数据。

关键词：珠芽魔芋休眠时期转录组 SSR SNP

铁炮百合‘萨莉’鳞茎各发育时期及不同组织qPCR内参基因筛选和验证

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分子植物育种 2024年第13期22卷 4297-4303页

作者：张达李莲莲吴学尉王天喜刘海英李缘王丽花云南大学农学院昆明650504 云南省农业科学院花卉研究所昆明650205

为筛选铁炮百合杂交系鳞茎不同发育阶段以及相同发育阶段不同组织中稳定表达的内参基因,本研究以铁炮百合观赏品种‘萨莉’为研究对象,采用实时荧光定量PCR (qPCR)分析百合的6个候选的内参基因(ACT, BHLH, EF1, EIF, GAPDH, lilyact)在... 详细信息

为筛选铁炮百合杂交系鳞茎不同发育阶段以及相同发育阶段不同组织中稳定表达的内参基因,本研究以铁炮百合观赏品种‘萨莉’为研究对象,采用实时荧光定量PCR (qPCR)分析百合的6个候选的内参基因(ACT, BHLH, EF1, EIF, GAPDH, lilyact)在‘萨莉’鳞片的不同发育时期以及不同组织中的扩增效率,再使用Normfinder、Bestkeeper、ge Norm、比较ΔCt法以及RefFinder 5种软件或方法对候选内参基因的表达稳定性进行评估。结果表明在所有样品中和在不同发育阶段的鳞茎中都是EIF和BHLH综合稳定性最佳,在不同组织中GAPDH和EIF的综合稳定性最佳,而在所有样品中及不同组织中,ACT的稳定性最差。本研究所得结果为‘萨莉’鳞茎的不同发育阶段以及不同组织的表达量分析提供了合适的内参基因组合,为其后续基因表达量的研究提供了基础。

关键词：铁炮百合杂交系内参基因 qPCR geNorm 百合

云南省蓝莓茎基腐病病原菌鉴定及其生物学特性分析

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植物保护学报 2022年第4期49卷 1085-1092页

作者：杨秀梅瞿素萍张艺萍吴学尉王丽花云南省农业科学院花卉研究所国家观赏园艺工程技术研究中心云南省花卉育种重点实验室昆明650205 云南大学农学院昆明650504

为明确云南省蓝莓茎基腐病的病原菌种类及其生物学特性,从玉溪市江川区蓝莓种苗种植基地采集具有茎基腐病典型症状的蓝莓病株进行病原菌分离、纯化和致病性测定,对病原菌形态学特征进行观察并基于Act、H3、EF-1α和β-tub基因序列分析... 详细信息

为明确云南省蓝莓茎基腐病的病原菌种类及其生物学特性,从玉溪市江川区蓝莓种苗种植基地采集具有茎基腐病典型症状的蓝莓病株进行病原菌分离、纯化和致病性测定,对病原菌形态学特征进行观察并基于Act、H3、EF-1α和β-tub基因序列分析进行分子生物学鉴定,同时对病原菌的生物学特性进行室内测定。结果表明,分离到的病原菌纯化菌落为深棕色,菌丝白色至红褐色;大型分生孢子梗无色透明,长150~400μm,分枝末端产生2~4个瓶梗;囊泡球形或近球形,大小为15~23μm×6~15μm;大型分生孢子无色透明,直圆柱形,一端稍窄,大小为45~80μm×4~8μm。基于Act、H3、EF-1α和β-tub基因构建系统发育树,菌株BC-1、BC-2与冬青丽赤壳Calonectria ilicicola均聚在同一分支,结合形态学特征与系统发育分析结果,将云南省蓝莓茎基腐病病原菌鉴定为冬青丽赤壳***。病原菌对可溶性淀粉的利用效果最好,菌丝生长的最适氮源为蛋白胨,最适生长温度为25℃,最适pH范围为4~7。

关键词：蓝莓茎基腐病冬青丽赤壳鉴定生物学特性

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不同温度处理对珠芽魔芋球茎休眠调控的影响

西北植物学报 2023年第12期43卷 2088-2099页

作者：王蕊嘉李文涵赵青青谢雨琪李缘吴学尉云南大学资源植物研究院昆明650091

为探究不同温度处理对珠芽魔芋球茎休眠调控的影响,以珠芽魔芋叶面球茎为材料,在球茎休眠期设置昼/夜变温(24℃/9℃、24℃/13℃、24℃/17℃)、恒温(9℃、13℃、17℃、21℃)及室温处理,萌发期设置26℃、33℃催芽处理,分析不同温度处理后... 详细信息

为探究不同温度处理对珠芽魔芋球茎休眠调控的影响,以珠芽魔芋叶面球茎为材料,在球茎休眠期设置昼/夜变温(24℃/9℃、24℃/13℃、24℃/17℃)、恒温(9℃、13℃、17℃、21℃)及室温处理,萌发期设置26℃、33℃催芽处理,分析不同温度处理后珠芽魔芋球茎在休眠Ⅰ期、休眠Ⅱ期以及萌发前期、中期、后期、末期的生物表型变化、内源生理变化规律及其休眠调控相关基因的变化情况。结果表明,(1)休眠期恒温处理有利于提高珠芽魔芋球茎的出芽比,其中13℃恒温打破休眠和萌发期33℃催芽处理球茎的发芽率最先达到峰值,且其出芽比最高。(2)休眠Ⅱ期的球茎淀粉含量低于休眠Ⅰ期,而其可溶性糖含量高于休眠Ⅰ期,13℃恒温处理球茎淀粉含量下降最快,其可溶性糖含量最高;前期恒温处理球茎淀粉、可溶性糖含量在萌发前期和萌发后期之间均存在显著性差异,而前期昼夜变温处理球茎仅可溶性糖含量在萌发前期和萌发后期间差异显著。(3)珠芽魔芋球茎ABA含量在休眠Ⅰ期和休眠Ⅱ期逐渐增多,而其GA_(3)含量逐渐减少,萌发期ABA含量均先升后降,同期GA_(3)含量在26℃催芽处理下先升后降,在33℃催芽处理下整体上升。(4)珠芽魔芋NCED基因表达量随着休眠程度的加深逐渐增加,而在萌发期逐渐减少,CYP707A基因表达量随着休眠的加深逐渐减少,而在萌发期增加。研究发现,珠芽魔芋打破休眠的最佳温度为恒温13℃,促进萌发的最佳温度为33℃;随着珠芽魔芋打破休眠,球茎中的淀粉含量降低,可溶性糖含量升高,ABA含量先升后降,GA_(3)含量先降后升;NCED和CYP707A基因可能是珠芽魔芋休眠调控中的关键基因。

关键词：珠芽魔芋温度休眠 NCED CYP707A

龙牙百合多糖的超声辅助提取及其抗氧化、降血脂活性分析

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食品工业科技 2023年第18期44卷 251-257页

作者：王威振杨盼盼遆永瑞唐玉超徐雷锋吴学尉宋子涵明军云南大学农学院云南昆明650091 中国农业科学院蔬菜花卉研究所蔬菜生物育种全国重点实验室北京100081

龙牙百合(Lilium brownii ***)是我国主要传统食用药用百合之一,本试验拟探究龙牙百合多糖提取工艺及其理化性质和功能活性,以龙牙百合鳞茎为原料,以多糖得率为指标,料液比、浸提时间和浸提温度为因素,对龙牙百合多糖提取工艺进行优化,... 详细信息

龙牙百合(Lilium brownii ***)是我国主要传统食用药用百合之一,本试验拟探究龙牙百合多糖提取工艺及其理化性质和功能活性,以龙牙百合鳞茎为原料,以多糖得率为指标,料液比、浸提时间和浸提温度为因素,对龙牙百合多糖提取工艺进行优化,再进一步去蛋白纯化多糖,分析其理化性质,测定其体外抗氧化和降血脂能力。结果显示:龙牙百合粗多糖最佳提取工艺为料液比1:20 g/mL,浸提时间20 min,浸提温度75℃,粗多糖得率为11.98%。粗多糖总糖、糖醛酸和蛋白质含量分别为58.46%、8.06%和10.85%,经过去蛋白后多糖的总糖和糖醛酸含量分别提高到84.78%和15.41%,蛋白质含量降低至4.73%。龙牙百合去蛋白多糖在10 mg/mL时对DPPH和ABTS+自由基清除率为8.75%和38.59%,低于对照VC;对胰脂肪酶的抑制率为85.78%,高于对照奥利司他,有较好的体外抑制胰脂肪酶效果。实验结果将为进一步研究龙牙百合多糖的构效关系和开发具有潜力的功能性食品提供依据,并为百合的应用提供理论参考。

关键词：龙牙百合多糖正交试验抗氧化活性胰脂肪酶

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蓝莓叶斑病病原菌鉴定及其生物学特性

西南大学学报（自然科学版） 2022年第10期44卷 48-55页

作者：杨秀梅王丽花张艺萍吴学尉周旭红云南省农业科学院花卉研究所/国家观赏园艺工程技术研究中心/云南省花卉育种重点实验室昆明650205 云南大学农学院昆明650504 云南中医药大学科技处科技实验中心昆明650500

为明确蓝莓叶斑病病原菌种类及其生物学特性,采用组织分离法和单孢分离法对病原菌进行分离纯化,通过形态学特征和多基因联合序列分析进行病原鉴定,采用叶片涂抹接种法测定其致病性,并于室内对其生物学特性进行研究.结果表明,从发病蓝莓... 详细信息

为明确蓝莓叶斑病病原菌种类及其生物学特性,采用组织分离法和单孢分离法对病原菌进行分离纯化,通过形态学特征和多基因联合序列分析进行病原鉴定,采用叶片涂抹接种法测定其致病性,并于室内对其生物学特性进行研究.结果表明,从发病蓝莓叶片分离得到3株形态特征一致的菌株,代表菌株LC-1菌落呈深棕色,菌丝白色至浅红棕色;大型分生孢子梗无色透明,长303~410μm,分枝末端产生2~4个瓶梗;囊泡棒状,大小为(12~30)μm×(2~5)μm;大分生孢子无色透明,圆柱形,两端半圆形,大小为(48~82)μm×(4~7)μm.采用Act,H3,EF-1α和β-tub 4段基因联合构建系统发育树,供试菌株LC-1与柯氏丽赤壳菌(Calonectria colhounii)聚在同一分支.蓝莓叶片接种菌株LC-1后出现典型的叶斑症状.根据形态学特征和系统发育分析,将该病原菌鉴定为柯氏丽赤壳菌.生物学特性研究结果表明,菌丝最适生长温度为25℃,最适pH值为7,该菌对可溶性淀粉的利用最好,菌丝生长的最适氮源为甘氨酸.

关键词：蓝莓叶斑病柯氏丽赤壳菌生物学特性

亚洲百合及东方百合AGPase酶活性及表达量与淀粉含量的相关性

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西南农业学报 2023年第1期36卷 137-143页

作者：张达李莲莲莫江玲李缘张超超吴学尉王丽花云南大学农学院昆明650504 云南省农业科学院花卉研究所昆明650205

【目的】探明两类百合不同发育时期的腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)活性、AGPase基因表达量与淀粉含量的相关性。【方法】使用qPCR、连续监测法、蒽酮法分别测定材料AGPase基因的表达量、酶活性及淀粉含量,再对比两类百合的异同,... 详细信息

【目的】探明两类百合不同发育时期的腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase)活性、AGPase基因表达量与淀粉含量的相关性。【方法】使用qPCR、连续监测法、蒽酮法分别测定材料AGPase基因的表达量、酶活性及淀粉含量,再对比两类百合的异同,以得到两类百合AGPase基因的表达量、酶活性与淀粉含量各自的特点及各因素间的相关性。【结果】所有克隆到的AGPase基因都具有PLN02241家族蛋白结构特征;定量结果表明,两类百合AGPase大亚基基因表达模式相同,总体趋势类似。小亚基基因表达模式存在差异,且小亚基基因的表达量低于大亚基基因;淀粉及酶活性测定结果表明,两类百合总体趋势一致。相关性分析表明,AGPase小亚基基因的表达量、AGPase酶活性与淀粉含量在鳞片中高度线性相关,且叶片中的酶活性与鳞片中的淀粉含量也高度线性正相关。【结论】两类百合不同时期的淀粉含量及酶活性变化趋势相同,但同一发育时期不同类型百合的淀粉含量及酶活性存在差异。两类百合大小亚基基因的表达量在鳞茎不同时期的表达模式相似,但同一发育时期不同类型百合的基因表达量存在差异。AGPase小亚基基因的表达量与淀粉含量正相关。

关键词：百合 AGPase 淀粉相关性分析

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香石竹DcSKP1基因克隆及表达分析