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HIF-1α/BMAL1/ALDOC介导糖酵解降低结直肠癌奥沙利铂敏感性的机制研究

HIF-1α/BMAL1/ALDOC介导糖酵解降低结直肠癌奥沙利铂敏感性的机...

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作者：冉佳灵中国医科大学

学位级别：硕士

目的:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)在世界范围内的发病率与死亡率高居不下。治疗疗效较差是晚期CRC患者预后不良的关键因素。由于肿瘤细胞生长需要大量的血液供应,快速增殖的肿瘤组织内部常常供血不足,因此,恶性肿瘤的进展常常伴有... 详细信息

目的:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)在世界范围内的发病率与死亡率高居不下。治疗疗效较差是晚期CRC患者预后不良的关键因素。由于肿瘤细胞生长需要大量的血液供应,快速增殖的肿瘤组织内部常常供血不足,因此,恶性肿瘤的进展常常伴有肿瘤中心区域乏氧及肿瘤细胞代谢重编程的特征。已经有研究证实乏氧调节肿瘤细胞的糖酵解能力与其增殖、转移和化疗抵抗明显相关。奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)是晚期CRC患者化疗的一线用药,目前尚无研究揭示乏氧微环境调节的肿瘤细胞糖酵解与CRC细胞L-OHP治疗敏感性的关系。因此本研究拟深入探讨乏氧降低CRC细胞对L-OHP治疗敏感性的作用机制,以寻找新的预测治疗疗效标志物和提高药物治疗敏感性的新策略,为临床决策提供新的理论基础与依据。研究方法:1.采用蛋白免疫印迹技术鉴定乏氧相关蛋白标志物的表达以明确氯化钴(cobalt chloride,Co Cl)对乏氧状态的诱导作用;2.采用MTS细胞活力测定检测试剂盒、克隆形成实验、流式细胞术(Annexin V/PI双染法)和蛋白免疫印迹技术检测常氧及乏氧条件下肿瘤细胞的细胞活力及增殖、凋亡情况,以探究乏氧对肿瘤细胞的L-OHP敏感性的影响;3.采用乳酸生成实验、ATP生成实验检测L-OHP处理时,常氧及乏氧肿瘤细胞糖酵解水平的差异;4.采用实时荧光定量PCR实验、蛋白免疫印迹技术检测常氧与乏氧条件下,差异表达的糖酵解酶。小干扰RNA(si RNA)转染实验与生信网站预测蛋白结合位点,验证乏氧对差异表达的糖酵解酶的调控作用,以明确乏氧对糖酵解的具体调控机制;5.统计学分析:每个实验结果均进行3次重复验证,采用SPSS 19.0软件分析数据。P<0.05有统计学差异。结果:1.乏氧化学诱导剂Co Cl能够降低CRC细胞对L-OHP的敏感性以及增强肿瘤细胞的糖酵解能力。蛋白免疫印迹实验表明Co Cl处理后乏氧诱导因子HIF-1α的表达升高,证明了Co Cl对CRC细胞乏氧状态的诱导作用。MTS细胞增殖实验和克隆形成实验表明L-OHP刺激下的乏氧肿瘤细胞的细胞活力和集落形成数目均高于常氧肿瘤细胞(P<0.05)。使用流式细胞术(Annexin V/PI双染法)检测早期与晚期凋亡细胞发现L-OHP刺激的乏氧肿瘤细胞的凋亡百分比(DLD1细胞P<0.01、Lo Vo细胞P<0.05)明显低于常氧肿瘤细胞。使用蛋白免疫印迹技术实验检测凋亡相关标志物表达水平发现L-OHP刺激的乏氧肿瘤细胞内凋亡蛋白Bax的表达低于常氧肿瘤细胞、而抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-x L的表达明显高于常氧肿瘤细胞。以上实验结果均证明乏氧能够降低肿瘤细胞对L-OHP的敏感性。使用乳酸生成试剂盒及ATP生成试剂盒进行检测时发现L-OHP刺激的乏氧肿瘤细胞的乳酸生成和ATP生成均高于常氧细胞,证明乏氧增强了肿瘤细胞的糖酵解能力。2.乏氧通过增强肿瘤细胞的糖酵解能力降低L-OHP的敏感性。2-脱氧-D-葡萄糖(2-Deoxy-D-glucose,2-DG)是一种公认的糖酵解抑制剂。乳酸生成和ATP生成实验表明L-OHP刺激的乏氧肿瘤细胞在2-DG处理后,乳酸产量与ATP生成量下降。MTS实验和克隆形成实验表明2-DG能够使L-OHP刺激的乏氧肿瘤细胞细胞活力和集落形成数目明显降低。流式细胞术(Annexin V/PI双染法)表明2-DG能够使L-OHP刺激的乏氧肿瘤细胞凋亡细胞百分比明显增高。蛋白免疫印迹实验结果表明,2-DG能够使L-OHP刺激的乏氧肿瘤细胞的Bax表达升高、Bcl-2、Bcl-x L表达降低。综上所述,抑制乏氧肿瘤细胞的糖酵解能够明显降低肿瘤细胞增殖并且促进其凋亡,证明乏氧可能是通过介导肿瘤细胞糖酵解降低对L-OHP的敏感性。3.乏氧通过调控ALDOC表达增强肿瘤细胞的糖酵解从而降低L-OHP敏感性。使用PCR实验与蛋白免疫印迹实验筛选L-OHP刺激的乏氧肿瘤细胞与常氧细胞内糖酵解相关关键转运体和关键酶的表达差异,结果表明L-OHP刺激的乏氧肿瘤细胞内醛缩酶C(aldolase C,ALDOC)m RNA及ALDOC蛋白的表达上调。L-OHP刺激的乏氧肿瘤细胞接受si HIF-1α处理时,ALDOC m RNA及ALDOC蛋白表达下调,证明了乏氧对ALDOC的表达具有正向调控作用。乳酸生成和ATP生成实验表明,L-OHP刺激的乏氧肿瘤细胞接受si ALDOC转染处理时,乳酸及ATP的生成水平均显著降低。MTS实验和克隆形成实验表明,L-OHP刺激的乏氧肿瘤细胞接受si ALDOC转染处理时,细胞活力与集落形成数目显著下降。流式细胞术(Annexin V/PI双染法)、蛋白免疫印迹实验表明L-OHP刺激的乏氧肿瘤细胞接受si ALDOC转染处理时,凋亡细胞百

关键词：结直肠癌乏氧微环境糖酵解 ALDOC 奥沙利铂

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PISA启示下的初中语文非连续性文本阅读教学研究

PISA启示下的初中语文非连续性文本阅读教学研究

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作者：冉佳鹭天津师范大学

学位级别：硕士

PISA是经济合作与发展组织在世界范围内开展的15岁学生阅读、数学、科学能力评价研究项目。2009年这一年测试考查的主要范畴是阅读,上海地区学生首次参加PISA测试。随后,《义务教育语文课程标准（2011年版）》中正式对五至六、七至九两... 详细信息

PISA是经济合作与发展组织在世界范围内开展的15岁学生阅读、数学、科学能力评价研究项目。2009年这一年测试考查的主要范畴是阅读,上海地区学生首次参加PISA测试。随后,《义务教育语文课程标准（2011年版）》中正式对五至六、七至九两个学年段的学生提出明确的要求,“非连续性文本”得以正式亮相。从此,非连续性文本开始正式进入中国,并受到众学者们的大量关注。但是,教材中并没有专门组织学习,对非连续性文本的概念也并没有一个明确的说明,所以,教师与学生对非连续性文本阅读的教学还处于探索阶段,缺乏条理性与针对性,对此仍存在很多困惑。基于此现状,本研究充分结合PISA测试内容,深入初中语文课堂,共分五个部分对初中语文非连续性文本阅读教学进行阐述。首先,对非连续性文本阅读教学的研究背景、研究目的与意义进行概括,并对已有研究进行系统分析,解释本研究的思路与方法。其次,对PISA的背景进行概述,结合自己的理解界定非连续性文本的概念与特征,并根据构成内容对非连续性文本进行分类。再次,结合初中语文教材实际,分析非连续性文本内容在教材中的分布情况及现状,归纳优势、说明问题,并阐释其对课程标准的体现。再次,实地调查天津市某中学初中阶段的老师及学生,对他们进行访谈和调查,分析非连续性文本阅读在实际教学中出现的问题及成因。最后,分别从教学意识、教学目标、教学方法、教学内容、评价体系五个方面提出可实施策略,以期为初中非连续性文本阅读教学注入一些活力。

关键词： PISA 初中语文非连续性文本阅读教学教学策略

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针对烈性呼吸道传染病疫情的中小型综合医院平战转换设计

针对烈性呼吸道传染病疫情的中小型综合医院平战转换设计

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作者：冉佳珞重庆大学

学位级别：硕士

新冠疫情爆发后,为应对大量患者的医疗救治工作。国内各省市将辖区内多所综合医院紧急改造为新冠定点收治医院。为满足收治新冠患者的医疗条件,综合医院采取了多种应急改造措施,使其达到收治此类烈性呼吸道传染病的标准。但在这种紧急... 详细信息

新冠疫情爆发后,为应对大量患者的医疗救治工作。国内各省市将辖区内多所综合医院紧急改造为新冠定点收治医院。为满足收治新冠患者的医疗条件,综合医院采取了多种应急改造措施,使其达到收治此类烈性呼吸道传染病的标准。但在这种紧急改造过程中,暴露出了许多问题。除此之外,疫情后各地为加强完善卫生公共防控能力,而大力新建综合医院,“平时”作为综合医院,“战时”作为烈性呼吸道传染病的定点收治医院。一时间针对突发烈性呼吸道传染病的综合医院“平战转换”设计成为医院设计的研究焦点。国内外对于综合医院“平战转换”设计缺乏系统性、全面性的研究。本文通过对中小型综合医院的基础研究和对疫情期间临时设立的各类定点收治医院的专题研究,探讨出中小型综合医院“平战转换”设计的基本思路和系统策略,最后通过对“黄石应急医院”项目的深化设计,对这类中小型综合医院的“平战转换”设计过程进行系统的呈现。本文对中小型综合医院“平战转换”设计策略从前期功能策划到医院总体规划再到医院建筑设计三个层面进行了系统分析。希望通过本设计研究工作,为此类中小型综合医院针对作为收治烈性呼吸道传染病的定点收治医院的“平战转换”设计提供设计参考。本研究型设计的框架思路如下:框架思路:本文研究思路分为“设计背景研究”、“设计基础研究”“专题设计研究”、“策略系统建构”、“设计实践应用”。第一章为设计背景研究——结合新冠期间定点收治医院改造情况,分析综合医院“平战转换”设计存在的问题。梳理研究对象中小型综合医院的定义、特征及其相关概念,并对设计目的与设计意义进行阐释。第二章为设计基础研究——对中小型综合医院的设计内容进行剖析,主要包括总体规划层面的功能流线组织、建筑布局模式研究和医院建筑内部门诊空间和护理单元空间的空间布局模式和功能流线组织等要就内容。作为定点收治医院“平时”状态的设计基础。第三章为设计专题研究——本章首先对现有定点收治医院进行分类总结。再从定点收治医院功能需求出发,分析定点收治医院在总体规划、筛查门诊、住院治疗用房三方面的设计要点。内容包括总体规划层面的功能流线组织、建筑布局模式;筛查门诊的空间布局模式和流线组织;住院治疗用房,永久和应急两部分各自的空间布局和流线组织。作为定点收治医院“战时”状态的设计基础。第四章为策略系统建构——根据前两章的基础研究和专题研究,对比分析出中小型综合医院“平战转换”在总体规划、门诊空间、护理单元空间三个方面的设计重点及难点。再主要针对这些设计重难点进行系统的“平战转换”设计策略建构。内容主要包括前期功能策划、预留储备方案设置、场地功能流线组织以及“平战转换”策略、建筑内部功能空间的功能流线组织以及“平战转换”策略。第五章为设计解答——通过对黄石应急医院进行详细设计,完成最终设计成果展示,并对设计各环节进行思路与过程解析。

关键词：中小型综合医院 “平战”转换设计 “小汤山”模式应急医院设计策略

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核心力量训练对初中生足球基本技术的影响研究

核心力量训练对初中生足球基本技术的影响研究

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作者：冉佳朋辽宁师范大学

学位级别：硕士

目的:近年来,校园足球已经在各级各地的中小学进行大范围推广,并取得了积极进展。但是,我国初中足球训练与世界高水平足球国家之间仍旧存在很大的差距,特别是在核心力量训练上,重视程度相较于国外还有待提高。因此,本研究旨在揭示核心... 详细信息

目的:近年来,校园足球已经在各级各地的中小学进行大范围推广,并取得了积极进展。但是,我国初中足球训练与世界高水平足球国家之间仍旧存在很大的差距,特别是在核心力量训练上,重视程度相较于国外还有待提高。因此,本研究旨在揭示核心力量训练与足球基本技术之间的关系,验证核心力量训练对初中生足球基本技术具有积极影响。并且,基于这一实验结果针对初中生这一群体特征,提出切实可行的足球训练策略,将核心力量训练更好地融入初中生足球体能训练中,提升初中生足球基本技术训练的效率。方法:本研究选取了大连市知行中学初一年级的60名初中生,年龄介于12-14岁。分成对照班与实验班,每组各30人。两组训练时间相等,其中实验班每次素质练习中插入10到15分钟核心力量训练,对照组按照日常训练正常进行。受试者在实验前后进行足球基本技术、核心肌肉力量的测试,以及足球基本技术兴趣的调查。结果:1.实验班的受试者核心肌肉力量提升情况比对照班更为明显(p<0.01);2.实验班的受试者足球基本技术提升情况比对照班更为明显(p<0.01);3.实验班相对于对照班来说,受试者们在训练之后对足球基本技术更感兴趣(p<0.01)。结论:1.核心力量训练相较于常规力量训练对初中生核心肌肉力量的提升效果更加理想;2.核心力量训练相较于常规力量训练对初中生足球基本技术的提升效果更加理想;3.提升初中生对足球基本技术的兴趣程度,对于初中生足球基本技术水平的提升具有积极作用。

关键词：核心力量训练初中生足球基本技术核心肌肉力量

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乔纳森·休斯对历史唯物主义的生态化阐释及启示研究

乔纳森·休斯对历史唯物主义的生态化阐释及启示研究

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作者：冉佳瑜西安电子科技大学

学位级别：硕士

20世纪六七十年代,资本主义的继续发展和生态环境问题的现实使马克思主义遭受到环保主义者的质疑和挑战,生态马克思主义在此背景之下应运而生,并在北美、欧洲等地逐渐发展成为当代马克思主义发展的重要理论形态。休斯作为英国生态马克... 详细信息

20世纪六七十年代,资本主义的继续发展和生态环境问题的现实使马克思主义遭受到环保主义者的质疑和挑战,生态马克思主义在此背景之下应运而生,并在北美、欧洲等地逐渐发展成为当代马克思主义发展的重要理论形态。休斯作为英国生态马克思主义的代表人物,面对环保主义对历史唯物主义的质疑,通过深挖历史唯物主义自然观、生产力发展理论和需要理论三大核心主题的生态性,不仅对环保主义做出了有力的回应,也深刻阐释了历史唯物主义的生态内涵。本篇论文围绕“自然观”、“生产力发展理论”和“需要理论”三大核心主题,从环保主义的质疑和历史唯物主义出发,旨在呈现休斯对历史唯物主义生态化阐释的过程。论文总共从五个方面展开论述。第一方面,首先介绍了休斯对历史唯物主义生态化阐释的背景,主要从现实背景和理论背景展开,其中理论背景的描述将休斯置于马克思主义及整个生态马克思主义和英国生态马克思主义当中,不仅明晰了休斯思想的理论渊源,也勾勒出休斯在生态马克思主义和英国生态马克思主义中的地位。第二个方面是休斯对自然观的生态化阐释,首先阐述了历史唯物主义视域下如何看待自然以及人与自然之间的关系,休斯在此基础上通过挖掘历史唯物主义的“相对自然极限”、自然在历史唯物主义中的重要性和连续性完成了对自然观的生态化阐释。第三个方面是休斯对生产力发展理论的生态化阐释,同样是在阐明历史唯物唯物主义如何看待生产力发展的社会作用的基础上,休斯通过解读生产力发展的生态良好性,并进一步剖析生产力发展的“革命效应”与生态问题的关系,展现了生产力发展理论内含的生态性。第四个方面是休斯对需要理论的生态化阐释,在历史唯物主义需要理论的基础上,休斯通过揭示需要不同于欲求的生态可持续性,在区分真假需要中揭示“按需分配”原则的生态可持续性,人的需要的本质和生态的良性互动关系三方面展现了需要理论的生态内涵。最后,第五个方面落脚到现实,首先对休斯对历史唯物主义的生态化阐释做出了总体性评价,然后在此基础上指出其对我们更好理解和发展历史唯物主义以及生态文明建设的启示意义。总之,深入研究休斯对历史唯物主义的生态化阐释,不仅能让我们更清晰地认知历史唯物主义的生态内涵,而且对我们今后的历史唯物主义创新研究和生态文明建设都有重要的理论和现实价值。

关键词：乔纳森·休斯历史唯物主义自然的限制生产力发展需要理论

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快充型TiO2(B)的电化学储锂机制及性能优化研究

快充型TiO2(B)的电化学储锂机制及性能优化研究

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作者：冉佳淼湖南大学

学位级别：硕士

快充型锂离子负极材料TiO(B)具有高安全性、高倍率特性、零应变、无毒性和成本低等优点,且具有与商用石墨电极相当的理论容量,是一种极具应用前景的锂离子电池负极材料。但当前TiO(B)的实用化仍主要受制于以下几个瓶颈问题:1)TiO(B)的... 详细信息

快充型锂离子负极材料TiO(B)具有高安全性、高倍率特性、零应变、无毒性和成本低等优点,且具有与商用石墨电极相当的理论容量,是一种极具应用前景的锂离子电池负极材料。但当前TiO(B)的实用化仍主要受制于以下几个瓶颈问题:1)TiO(B)的电化学储锂机理仍不清晰。已报道的TiO(B)储锂机理仍有争议,且实验型研究还很有限,阻碍了高性能材料优化设计。2)高纯TiO(B)材料合成困难。TiO(B)是一种亚稳材料,传统液相制备工艺不可避免会引入少量锐钛矿相杂相,降低电化学性能。发展高纯TiO(B)材料制备新工艺和高精度纯度检测新方法尤为重要。3)电子电导率低(～10 S cm)。离子掺杂策略可以从根本上改善材料的本征电导率,在众多的掺杂离子中,N因能够有效降低TiO(B)的禁带宽度、降低Li的扩散能垒而具竞争力,然而关于N掺杂TiO(B)材料的研究工作还较少,掺杂机理也有待进一步的研究。针对上述瓶颈问题,本论文采用多种原位谱学表征和理论计算相结合揭示了TiO(B)的储锂机理和动力学特性,发展了基于拉曼光谱快速检测TiO(B)纯度的新方法,并对材料进行掺杂改性,进一步提升了TiO(B)的电化学特性。本文的主要结论如下:(1)多原位谱学表征、电化学分析与理论计算相结合,揭示了TiO(B)的“C→A1→A2”储锂机理、界面形成机制、动力学特性及其关键影响因素。1)原位拉曼光谱表明:Li嵌入时,首先进入C位点,再进入A1位点,最后进入A2位点。Li脱出时正好相反,具有极高的可逆性。2)利用原位红外光谱和XPS深剖表征表明TiO(B)电极的SEI膜随着充放电过程展现出动态的变化,主要由ROCOLi、ROLi、LiCO、Li F、LiPFO几种物质组成,并且含量依次减小。3)利用原位电化学阻抗谱(EIS)、恒电流间歇滴定技术(GITT)深入分析了Li进入/脱出TiO(B)4个阶段的动力学特性:(i)溶剂化锂离子在电解液中的扩散。溶剂化的锂离子在电解液中的扩散电阻较小且保持稳定;(ii)脱溶剂化的锂离子穿过SEI膜。此过程的动力学特性与SEI膜的形成过程有关,分析表明SEI膜对扩散不利,特别是有机盐组分ROCOLi;(iii)锂离子进入/脱出各个储锂位点。此过程的动力学特性与储锂位点有关。Li迁移到C位点和A2位点有利,迁移A1位点受阻。锂离子脱出时正好相反,从C位点和A2位点脱出受阻,从A1位点脱出较容易;(iv)锂离子在晶格中的扩散。嵌入时的平均扩散系数为1.46978E-11 cm·S,脱出时的平均扩散系数为1.36414E-11 cm·S,嵌脱锂过程中的平均扩散系数相差不大,表现出优异的可逆动力学特性。(2)将拉曼光谱和电化学表征与同步辐射XRD联合使用,发展了精确测定TiO(B)纯度的方法。借由同步辐射XRD数据校准,建立了TiO(B)相纯度与两相拉曼光谱/电化学特征值(I/(I+I)与Q/(Q+Q))之间的函数关系实现对TiO(B)纯度的精准和快速检测。(3)提出通过间隙型N掺杂提升TiO(B)电子电导的新思路,显著提升其高倍率特性。通过将HTO前驱体在氨气下煅烧制备出N掺杂的TiO(B)材料。光谱和XPS表征表明本方法中N掺杂的类型为间隙型,与相邻Ti、O原子构成O-Ti-N键接。拉曼光谱表明,N掺入后Ti-O键的振动不受影响,由此推断出N的掺入位置位于最稳定的A2储锂位点附近。间隙N的掺入使TiO(B)的能隙变窄,载流子浓度增加,材料的本征电导率提高,具体表现为TiO(B)/Li电池的阻抗降低、比容量增加、展现出更加优异的倍率性能。

关键词：青铜相二氧化钛锂离子电池储锂机理纯度测定氮掺杂

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数字经济发展对商业银行不良贷款率的影响研究

数字经济发展对商业银行不良贷款率的影响研究

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作者：冉佳璐西南财经大学

学位级别：硕士

银行业是典型的亲周期行业,近些年来随着我国经济增长速度的放缓,银行业不仅对我国甚至世界的经济运行波动具有一定的放大作用,更是负担着经济周期不同时期变化所蕴含的风险。其中,不良贷款率作为直接反映银行资产质量的重要指标,更能... 详细信息

银行业是典型的亲周期行业,近些年来随着我国经济增长速度的放缓,银行业不仅对我国甚至世界的经济运行波动具有一定的放大作用,更是负担着经济周期不同时期变化所蕴含的风险。其中,不良贷款率作为直接反映银行资产质量的重要指标,更能间接表明一个地区乃至一个国家经济发展是否稳定。当前我国经济社会面临的压力较为复杂,在这种环境下务必要进一步监测不良贷款率的持续上升。而随着以互联网+、AI科技、大数据等技术为代表的现代数字科技的产生、发展、兴盛,全世界正在逐渐步入数字经济时代。数字经济相较于原始经济它更先进、更具有科技性也更加可持续,其在全世界范围内发展迅速,不仅对经济社会发展起到了促进作用,还能够进一步推动数字技术、科技创新的发展应用,加快各项数字经济产业结构升级。本文首先根据可查阅的相关文献对数字经济的整体概念进行了分析,之后阐明了当前社会数字经济和商业银行不良贷款率的发展现状。实证方面,本文通过参考过往文献对数字经济的概念界定选取我国2008―2019年30个省市12个基础指标的面板数据,由数字基础、数字产业发展、数字科技创新、政府干预等四个方面综合构建数字经济总指数,从理论和实证两个方面运用面板回归模型研究数字经济及其四个子层面对不良贷款率的影响;其次,通过无条件分位数模型方法在解释变量的不同分位点上分析数字经济对不良贷款率的影响。本文通过研究发现:第一,数字经济与不良贷款率存在正U型的关系,数字经济在发展初级阶段提高了数字科学技术在银行的使用宽度和广度,也促进了各方信息交互融通,促进不良贷款率的下降,而随着不良贷款的逐步下降和数字经济的大力发展,却反过来提高了不良贷款率。第二,数字基础建设在发展初级阶段对不良贷款率是负向的作用,当数字基础建设水平上升时,却反而提高了不良贷款率;数字科技创新是数字基础建设运用到实际工作生活中并进行创新实践的具体表征,它对不良贷款率产生负向影响;数字产业发展也对不良贷款率产生负向影响。

关键词：数字经济商业银行不良贷款率分位数回归

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真菌高氧化度三环倍半萜的组合生物合成

真菌高氧化度三环倍半萜的组合生物合成

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作者：冉佳灵西南大学

学位级别：硕士

倍半萜类化合物是由三个异戊烯单元组成的含有15个碳原子的天然产物,其结构多样,种类丰富,具有良好的生物活性和重要的生理功能,极具药物开发价值。在自然界中,倍半萜类化合物的生物合成是由倍半萜环化酶(STC)催化法尼基二磷酸(FPP)生... 详细信息

倍半萜类化合物是由三个异戊烯单元组成的含有15个碳原子的天然产物,其结构多样,种类丰富,具有良好的生物活性和重要的生理功能,极具药物开发价值。在自然界中,倍半萜类化合物的生物合成是由倍半萜环化酶(STC)催化法尼基二磷酸(FPP)生成倍半萜核心骨架,随后再经一系列后修饰酶催化,如氧化酶、酰基转移酶和糖基转移酶等,形成结构复杂多样的倍半萜类天然产物。在这些后修饰酶中,氧化酶在倍半萜类化合物的结构和生物活性多样性形成过程中发挥着重要作用。其中,细胞色素P450氧化酶(CYP450)可以高选择性地催化倍半萜骨架发生不同类型的氧化反应,如C-H羟基化,C=C环氧化及重排等,极大地拓宽了萜类天然产物的结构复杂性,同时为其它后修饰酶如酰基转移酶、糖基转移酶等提供了可修饰基团。由于生物酶催化具有反应条件温和,立体选择性高的优点,CYP450作为生物催化剂可以实现惰性碳骨架的氧化而极具开发潜力。然而,大多数的CYP450具有底物专一性,只能识别特异的底物,限制了它在生物酶催化上的应用。因此,如何通过挖掘具有底物宽泛性的CYP450来获得高氧化度、结构多样的倍半萜类化合物,是该研究领域面临的一个主要问题。本研究应用组合生物合成策略,将异源的STC与CYP450组合在酿酒酵母系统中表达,发现具有底物宽泛性的CYP450,并获得一系列高氧化的“非天然”倍半萜类化合物。本课题组前期报道了来源于真菌的聚奎烷silphinene(74)的合成酶Peni A,以及一个多功能的CYP450-PeniB,其能在silphinene骨架上催化一系列连续的氧化反应构建γ-内酯-[5.***.5.5]氧化窗烷环,该步骤是合成具有显著杀虫活性的penifulvin A的关键步骤。另外,文献报道来源于真菌的Bc BOT2为聚奎烷(-)-presilphiperfolan-8β-ol(67)的合成酶,CYP450-Bc BOT4为其特异性羟化酶,为合成植物毒素Botrydial的关键步骤。此外,研究表明,三环骨架67在非酶催化条件下转化为三环骨架103-105。因此,我们推测PeniB和Bc BOT4可能具有底物宽泛性(PeniB可以识别67和非天然底物103-105,Bc BOT4可以识别非天然底物74)。基于此猜想,我们利用组合生物合成结合基因挖掘策略,研究了PeniB和Bc BOT4对三环倍半萜的催化能力,力图发现具有底物宽泛性的CYP450,从而获得结构新颖的高氧化三环倍半萜化合物,本研究完成的主要工作如下:(1)基因bcbot4和peni A,peniB和bcbot2的组合生物合成研究。分别将peniB和bcbot2,bcbot4和peni A进行组合,在工程化的酵母平台(Saccharomyces cerevisiae RC01)中异源表达,代谢产物分析结果表明:Bc BOT4只能识别天然底物67,具有底物特异性;CYP450-peniB不仅能识别天然底物74,还可以催化底物103-105发生氧化反应,显示出很强的底物宽泛性。对基因peniB和bcbot2组合的共表达菌株进行大规模发酵,分离得到7个倍半萜新化合物106-112。(2)基因clade1TC分别和peniB、bcbot4的组合生物合成研究。clade1TC来源于真菌厚垣镰刀菌(Fusarium chlamydosporum),是线性三环倍半萜骨架koraiol合成酶Ffsc4的同源基因。将基因clade1TC分别和peniB、bcbot4在在酵母中异源表达,代谢产物的分析结果表明:Bc BOT4不能识别线性三环倍半萜骨架koraiol;PeniB可以催化底物koraiol发生氧化反应,通过大规模发酵和目标化合物分离,一共鉴定了3个新颖的线性三环倍半萜化合物114-116。结果表明PeniB具有较大底物宽泛性能够识别线性三环倍半萜骨架。(3)基因coll34TC分别和peniB、bcbot4的组合生物合成研究。通过序列网络相似性分析并结合化学结构指导下的基因组挖掘方法,发现并验证了一个全新的源于真菌果生炭疽菌(Colletotrichum fructicola)的STC合成酶Coll34TC,产生三环倍半萜骨架(-)-presilphiperfolan-1β-ol和presilphiperfol-1-ene。通过化合物结构鉴定,我们推导了Coll34TC的环化机理。利用组合生物合成策略,将基因coll34TC分别和peniB及bcbot4在酵母中异源表达。代谢产物分析结果表明:Bc BOT4不能识别三环倍半萜骨架117和118,而PeniB可以选择性的催化三环倍半萜底物117和118发生氧化反应,一共鉴定了3个结构新颖的三环倍半萜氧化产物119-121。综上所述,本研究利用组合生物合成结合基因挖掘策略,

关键词：倍半萜组合生物合成倍半萜环化酶细胞色素P450氧化酶

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思辨性阅读教学在高中论述类文本教学中的应用

思辨性阅读教学在高中论述类文本教学中的应用

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作者：冉佳鑫辽宁师范大学

学位级别：硕士

思辨性阅读教学是我国目前正在探索并且逐渐应用的一种阅读教学方式。思维发展与提升作为语文核心素养之一被明确提出来,是在2017年版普通高中语文课程标准中,该课程标准要求学生在学习的过程之中,通过对语言文字的运用,直觉思维、形象... 详细信息

思辨性阅读教学是我国目前正在探索并且逐渐应用的一种阅读教学方式。思维发展与提升作为语文核心素养之一被明确提出来,是在2017年版普通高中语文课程标准中,该课程标准要求学生在学习的过程之中,通过对语言文字的运用,直觉思维、形象思维、逻辑思维和创造思维得到发展,思维品质如深刻性、敏捷性、灵活性、批判性和独创性的得到促进与提升。新课标提出了18个学习任务群,学习任务群6为思辨性阅读与表达,目的在于通过引导学生进行思辨性阅读与表达,以此来提高学生的理性思维水平。由此可以看出,思维的发展对于学生的成长意义重大,教师必须提高对学生思辨能力的培养的重视。本文主要探究思辨性阅读教学在高中论述类文本教学中的应用,根据高中学生的思维发展特点和学情特点,以现行的部编版高中语文教材选取的论述类文本为依照,既关注高中生的学情特点,也探讨了一些关于“思辨”、“思辨性阅读教学”的相关理论与实践。本文除绪论和结语外,共分为四大部分。绪论部分主要介绍研究背景、研究目的和意义、研究思路和方法、研究综述这四个方面的内容,主要阐述选题的缘起、选题的价值、意义和思辨性阅读教学对学生思维发展的意义。第一大部分主要是对“思辨性阅读”和“论述类文本教学”进行相关概述,阐述思辨性阅读教学在高中论述类文本教学之中的可行性,这是基于基础层面的介绍,为后文提出的思辨性阅读教学在高中论述类文本教学中的策略和方法提供支撑依据。第二大部分通过对思辨性阅读教学在高中论述类文本教学中的应用现状进行问卷调查,分析如今高中论述类文本教学存在的问题、思辨性阅读在论述类文本教学中的应用情况,对思辨性阅读教学在论述类文本教学过程中出现问题的原因进行探究。第三大部分主要谈论思辨性阅读在高中论述类文本教学中的应用和策略。首先对现行部编版高中语文教材中的论述类文本进行了简单的梳理,从教材中获得关于思辨性阅读在论述类文本教学中应用策略的启发,依据教材中论述类文本的思辨导向提出了五个行之有效的策略。第四大部分通过对教材中的一篇论述文章——《六国论》进行教学策略和教学重点分析,为了更好地了解与实施思辨性阅读在高中论述类文本教材中的应用,笔者从教学案例出发,结合教学策略,证实本文的研究意义所在。结语部分是对思辨性阅读在高中论述类文本教学中的应用进行总结。

关键词：思辨性阅读教学论述类文本思维能力

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云南个旧重金属污染农田土壤生态修复的田间实验研究

云南个旧重金属污染农田土壤生态修复的田间实验研究

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作者：冉佳康昆明理工大学

学位级别：硕士

我国农田土壤重金属超标严重,目前已知污染土壤的修复方式虽有很多,但大多是室内盆栽实验,野外大田实地修复的研究较少。本研究首先对云南省个旧市大屯镇试验农田土壤重金属污染状况和土壤基本理化性质进行调查,根据内梅罗综合污染指数... 详细信息

我国农田土壤重金属超标严重,目前已知污染土壤的修复方式虽有很多,但大多是室内盆栽实验,野外大田实地修复的研究较少。本研究首先对云南省个旧市大屯镇试验农田土壤重金属污染状况和土壤基本理化性质进行调查,根据内梅罗综合污染指数将实验地划分为3个不同污染程度的区域,对重度污染区采用钝化修复、中度污染区采用玉米间种超富集植物修复、低污染区采用低积累蔬菜种植3种修复方式。对高污染区的钝化修复采取1%硫酸亚铁（1%FS）、2%石灰（2%LM）、2%海泡石（2%SP）单施及其复合施加,考察土壤重金属生物有效态含量和基本理化性质的变化,以及钝化剂对玉米生物量和重金属吸收的影响;对中污染区采用镉富集植物紫茉莉（Mirabilis jalapa L.）、铅富集植物土荆芥（Chenopodium ambrosioides L.）、砷超富集植物蜈蚣草（Pteris vittata L.）和与玉米（Zea mays）间种的修复方式,测定重金属超富集植物和玉米生物量和各部位重金属含量,分析植物修复效率以及间种对玉米的影响;在低污染区直接种植重金属低积累蔬菜品种,测定蔬菜生物量和可食部重金属含量,分析低污染土壤对蔬菜生长指标和食品安全的影响。最后,对3种修复方式的修复效益进行对比分析,综合分析得出复合重金属污染农田土壤实地修复较理想的修复方案。结果表明:1.研究区域农田土壤重金属镉（Cd）、铅（Pb）和砷（As）含量均超出《土壤环境质量农用地土壤污染风险管控标准》（试行,GB15618-2018）筛选值标准。各污染区Cd、Pb和As的多因子潜在生态风险指数（RI）值均在150以上,属于高风险,其风险程度由强到弱依次为Cd＞As＞Pb。土壤Cd、Pb有效态含量占总量的50%和30%。土壤p H值呈弱酸性,土壤总氮和速效氮含量较低,整体土壤肥力属于中下等。2.高污染区3种钝化剂的单施与复合施加对玉米生长均无显著影响;玉米籽粒中Cd、As含量在2%LM+2%SP复合施加处理下显著降低,且满足《食品安全国家标准食品中污染物限量》（GB2762-2017）Cd、As限值（Cd:0.1 mg/kg,As:0.5 mg/kg）。单施2%LM能显著降低土壤中Cd、Pb生物有效态含量,降幅分别为6.4%和21.6%;2%LM+2%SP复合施加对Cd、Pb生物有效态的降幅分别为10.9%和9.6%;单施1%FS对As的钝化效果最好,As有效态含量下降28.9%。施加钝化剂后,高污染区土壤p H值上升到7.0以上,土壤呈中性。3.中污染区3种超富集植物与玉米间种处理下,对玉米生长和产量均无显著影响,且籽粒重金属Cd、Pb和As含量均满足《饲料卫生标准》Cd、Pb和As限值（Cd:1 mg/kg,Pb:10 mg/kg,As:2 mg/kg）。但需注意的是,玉米在分别与紫茉莉、土荆芥和蜈蚣草间种时,其叶片和根中对应的Cd、Pb和As含量均显著增加,这可能是超富集植物的根将土壤中的重金属活化成利于玉米容易吸收的形态,增加了玉米对重金属的吸收,但并未向籽粒转移。4.低污染区种植的4种不同蔬菜可食部分的Pb和除萝卜外的Cd含量均超出食品安全标准,存在食品安全风险;As含量和萝卜中Cd含量均达标。5.将修复成本分为人工成本、材料成本和维护成本三类,分别核算了三种修复方式的成本。初步测算结果表明,钝化修复、套作修复和低积累蔬菜种植每亩所需的总费用分别为3472、5324和2315元/亩。因此,针对该区域Cd、Pb和As复合污染且生物有效态含量较高的农田土壤,钝化修复能在短时间内达到修复效果且成本相对较低,适宜大面积污染农田土壤的修复。综上所述,试验大田土壤已受到Cd、Pb、As复合污染并具有较高的Cd、Pb生物有效态含量,生态风险指数高。单施2%LM和复合施加2%LM和2%SP能显著降低Cd、Pb生物有效态,而单施1%FS对As的钝化效果最好。与此同时,2%LM+2%SP能使玉米籽粒中Cd、As含量显著降低。因此,对该类重金属污染农田的修复,钝化修复是较为理想的修复方式。需要注意的是,由于该类农田Cd、Pb生物有效态较高,即使重金属总量低也不宜采用直接种植低积累作物的方式,建议采用钝化修复和低累积作物种植相结合。

关键词：重金属污染农田钝化植物修复低积累作物修复效益

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