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现代免疫学 2017年第2期37卷 146-151页

作者：王可王芳余红秀复旦大学生物医学研究院上海200032

免疫细胞代谢机制研究是免疫代谢研究的一个重要方向。免疫细胞在增殖、分化以及效应功能的执行等过程中会发生代谢重编程现象。本文综述了不同类型的免疫细胞静息或激活状态下的代谢通路。

关键词：免疫细胞免疫代谢代谢重编程

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肿瘤微环境的代谢重编程

现代免疫学 2017年第2期37卷 152-156页

作者：王可王芳余红秀复旦大学生物医学研究院上海200032

肿瘤细胞独特的有氧糖酵解代谢为其增殖生长提供能量,消耗了肿瘤微环境中的大量营养。肿瘤微环境中也存在大量的免疫细胞,免疫细胞活化、执行效应功能会发生与肿瘤细胞类似的代谢重编程现象,亦需要大量能量。因此免疫细胞与肿瘤细胞之... 详细信息

肿瘤细胞独特的有氧糖酵解代谢为其增殖生长提供能量,消耗了肿瘤微环境中的大量营养。肿瘤微环境中也存在大量的免疫细胞,免疫细胞活化、执行效应功能会发生与肿瘤细胞类似的代谢重编程现象,亦需要大量能量。因此免疫细胞与肿瘤细胞之间会存在激烈的代谢竞争,同时也存在密切的代谢调控。通过调整肿瘤代谢和免疫代谢的平衡,人为地抑制肿瘤代谢、增强免疫代谢,提高肿瘤内的免疫功能可能为肿瘤免疫治疗开辟一个新的方向。

关键词：肿瘤微环境免疫细胞代谢重编程

皖南尖吻蝮蛇中11个C型凝集素类似蛋白亚单位的cDNA克隆和序列分析

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第1期19卷 64-70页

作者：余红秀向开军汪玉洁刘兢中国科学技术大学生命科学学院合肥230027

通过放射性标记DNA探针筛选和PCR克隆筛选 ,从皖南尖吻蝮蛇毒腺的λgt11cDNA文库中 ,克隆得到了 11个编码C型凝集素类似蛋白亚单位的cDNA .其中 2个克隆分别含有编码an tithrombinA的A链和B链的序列 .另外 6个则含有编码如下肽链的序列 ... 详细信息

通过放射性标记DNA探针筛选和PCR克隆筛选 ,从皖南尖吻蝮蛇毒腺的λgt11cDNA文库中 ,克隆得到了 11个编码C型凝集素类似蛋白亚单位的cDNA .其中 2个克隆分别含有编码an tithrombinA的A链和B链的序列 .另外 6个则含有编码如下肽链的序列 :antithrombinC的A链和B链、agkisacutacin的A链和B链、抗凝血因素的A链和B链 ,其它 3个克隆含有编码未知蛋白质的序列 .有趣的是 ,在编码AntithrombinC的序列中 ,每条链中除了含有 7个与所有C型凝集素类似蛋白位置一致的Cys外 ,在B链上还含有一个额外的Cys3;2条B链上的Cys3可能形成一对新的链间二硫键 .氨基酸序列的比较及进化分析显示 ,C型凝集素类似蛋白B链起源于一个单系类群 ,A链至少有

关键词：尖吻蝮蛇 C型凝集素类似蛋白克隆序列分析

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质谱流式技术扩宽临床研究广度

中华检验医学杂志 2021年第4期44卷 358-362页

作者：潘紫月冯莉余红秀赵燕萍复旦大学附属闵行医院内镜中心上海201100 复旦大学生物医学研究院上海200032

质谱流式技术是近来年发明的一门新兴技术,它利用金属同位素标签替代荧光标签,并利用质谱对标签进行定量,通过结合质谱和流式细胞技术,可以同时对单细胞进行超多参数、无需补偿的测量,大大增强了评估复杂细胞系统和过程的能力,弥补了荧... 详细信息

质谱流式技术是近来年发明的一门新兴技术,它利用金属同位素标签替代荧光标签,并利用质谱对标签进行定量,通过结合质谱和流式细胞技术,可以同时对单细胞进行超多参数、无需补偿的测量,大大增强了评估复杂细胞系统和过程的能力,弥补了荧光流式的不足。其高通量、高灵敏度和高稳定性的特点尤其适合于免疫、肿瘤、血液、药物和遗传学等学科的研究中。

关键词：质谱流式细胞技术荧光流式细胞术临床应用

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中国3个主栽烟草品种的差异蛋白质组学研究

中国农业科学 2016年第16期49卷 3084-3097页

作者：徐莹晏国全张扬余红秀复旦大学生物医学研究院

【目的】从全蛋白质组学水平研究烟草,筛选具有重要特性的蛋白质,阐明其相关代谢通路,使得烟草的基础科学研究和品种培育工作有所突破。【方法】利用苯酚法提取中国3个主栽烟草品种红花大金元、K326和云烟87叶片的蛋白质,酶解后采用串... 详细信息

【目的】从全蛋白质组学水平研究烟草,筛选具有重要特性的蛋白质,阐明其相关代谢通路,使得烟草的基础科学研究和品种培育工作有所突破。【方法】利用苯酚法提取中国3个主栽烟草品种红花大金元、K326和云烟87叶片的蛋白质,酶解后采用串联质量标签技术(tandem mass tag,TMT)标记,结合二维液相色谱串联质谱技术(2D LC-MS/MS)对3个烟草品种叶片的蛋白质组成进行分析,运用Proteome Discoverer软件提取谱图后在MASCOT搜索引擎上鉴定蛋白质和肽段,并对鉴定的蛋白质进行系统的生物信息学分析,包括数据相关性分析、分层聚类分析和主成分分析,同时按照2倍上下调的原则采用火山图筛选不同品种烟草中表达差异显著的蛋白质,最后利用KEGG通路分析烟草中重要蛋白质的分布及功能。【结果】鉴定红花大金元、K326和云烟87烟草样品的蛋白质Group总数为3 079,蛋白质ID数为10 343。从分层聚类分析和主成分分析中蛋白质的整体表达情况可见,K326和云烟87蛋白质表达情况较相似,而红花大金元与前两者相差较大。后续的差异蛋白质筛选也验证了该结果,表现为云烟87和K326之间仅存在29个差异表达的蛋白质,其中13个蛋白质覆盖8条代谢通路,包括类黄酮生物合成,参与类黄酮合成路径的查尔酮合成酶在K326中的相对含量显著高于云烟87。红花大金元和云烟87之间有160个蛋白质差异表达,其中103个蛋白质覆盖42条代谢通路,包括谷胱甘肽代谢,相对定量结果显示谷胱甘肽代谢途径相关的3种酶,谷胱甘肽过氧化物酶、磷脂过氧化氢物谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽S-转移酶在红花大金元中的含量均显著低于云烟87。红花大金元和K326之间存在119个差异蛋白质,其中89个蛋白质覆盖41条代谢通路,包括外源物质细胞色素P450代谢。筛选获得的重要差异蛋白质的相对定量结果显示一些与抗性相关的蛋白质,如蛋白酶抑制剂,在云烟87中的表达量远低于K326和红花大金元,同时结果表明红花大金元中的超氧化物歧化酶含量处于较低水平。【结论】TMT技术结合2D LC-MS/MS可对不同品种烟草的叶片蛋白质进行有效地分离和鉴定,鉴定出的蛋白质大部分是参与光合作用、物质代谢或者与抗逆性相关。

关键词：烟草差异蛋白质组学串联质量标签二维液相色谱串联质谱

皖南尖吻蝮蛇毒I型金属蛋白酶Acutolysin A的表达、重折叠及其生物学活性

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生物化学与生物物理学报 2002年第5期34卷 675-679页

作者：向开军余红秀邹春森袁培华刘兢中国科学技术大学生命科学学院中国科学技术大学生命科学学院合肥230027

将皖南尖吻蝮蛇毒I型金属蛋白酶acutolysinA基因克隆进原核表达载体pBAD/gIIIA后得到重组表达质粒 pDS。在 0 .0 2 %的L (+) 阿拉伯糖的诱导下 ,质粒pDS在E .coliTOP1 0中表达了重组acutolysinA。与其天然形式相比 ,重组蛋白质在N端和C... 详细信息

将皖南尖吻蝮蛇毒I型金属蛋白酶acutolysinA基因克隆进原核表达载体pBAD/gIIIA后得到重组表达质粒 pDS。在 0 .0 2 %的L (+) 阿拉伯糖的诱导下 ,质粒pDS在E .coliTOP1 0中表达了重组acutolysinA。与其天然形式相比 ,重组蛋白质在N端和C端各增加了 2 2个和 8个氨基酸残基 (均源于载体序列 ) ,并以包含体的形式存在于胞质中 ,表达量约占菌体总蛋白质的 5 %～ 1 0 %。在经 8mol/L尿素或 6mol/L盐酸胍变性及体外复性后 ,重组蛋白质获得了良好的免疫学及生物学活性。Western印迹及ELISA实验表明 ,天然金属蛋白酶acutolysinA与重组蛋白质具有良好的免疫反应相关性。动物实验表明 ,复性的重组蛋白质能明显引起皮下出血 ,其最低出血剂量约为 2 0 μg左右。1mmol/LEDTA、1mmol/LEGTA及 3mmol/L咪唑均能不同程度的抑制天然及重组金属蛋白酶的出血活性。PMSF没有明显的抑制效果。并对出血毒金属蛋白酶的出血机制进行了探讨

关键词：蛇毒金属蛋白酶表达重折叠出血活性

靶向干扰CXCR7基因表达对肝癌(HCC)细胞增殖及凋亡的影响

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复旦学报（医学版） 2014年第2期41卷 161-167,178页

作者：林灵韩梅梅王芳申华莉余红秀杨芃原复旦大学生物医学研究院上海200032 复旦大学化学系上海200433 复旦大学生命科学学院上海200433

目的探讨CXCR7基因在不同肝癌细胞系及肝癌组织中的表达情况,并研究靶向抑制CXCR7基因表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响。方法应用Western blot检测不同肝癌细胞系及10例肝癌组织中CXCR7蛋白的表达水平。采用短发夹状RNA(short hairpin R... 详细信息

目的探讨CXCR7基因在不同肝癌细胞系及肝癌组织中的表达情况,并研究靶向抑制CXCR7基因表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响。方法应用Western blot检测不同肝癌细胞系及10例肝癌组织中CXCR7蛋白的表达水平。采用短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默HCCLM3与MHCC97L细胞中CXCR7基因的表达,分别采用Western Blot和qRT-PCR检测shRNA的靶向沉默效果。通过CCK-8增殖实验与Annexin V-FITC/PI细胞双染色研究CXCR7抑制对HCCLM3与MHCC97L增殖及凋亡的影响。结果CXCR7表达水平与肝癌细胞的恶性程度呈正相关,肝癌组织中CXCR7表达水平较癌旁显著升高。实验成功构建了9个慢病毒表达载体,其中CXCR7shRNA-566序列干扰效率最高。增殖实验显示干扰表达组细胞生长速度受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪分析显示干扰CXCR7表达可诱导细胞凋亡的发生。结论 CXCR7表达水平与肝癌恶性程度呈正相关,靶向干扰CXCR7表达可抑制细胞的增殖能力,诱导细胞发生凋亡。

关键词：肝细胞肝癌(HCC) CXCR7基因短发夹状RNA(shRNA) 增殖能力细胞凋亡

RNA干扰CXCR7基因对人肝癌MHCC97H细胞生物学特性的影响

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化学世界 2013年第10期54卷 597-600,633页

作者：林灵韩梅梅王芳申华莉余红秀杨芃原生物医学研究院复旦大学上海医学院上海200032 复旦大学化学系上海200433 复旦大学生命科学研究院上海200433

通过构建针对CXCR7的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰表达质粒,转染人肝癌细胞系MHCC97H,嘌呤霉素筛选建立低表达CXCR7基因的稳转株,分别采用qRT-PCR和Western Blot检测shRNA靶向沉默效果。通过CCK-8增殖实验与流式细胞术研究... 详细信息

通过构建针对CXCR7的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰表达质粒,转染人肝癌细胞系MHCC97H,嘌呤霉素筛选建立低表达CXCR7基因的稳转株,分别采用qRT-PCR和Western Blot检测shRNA靶向沉默效果。通过CCK-8增殖实验与流式细胞术研究CXCR7抑制对细胞增殖及凋亡的影响;通过划痕愈合实验研究CXCR7抑制对MHCC97H细胞迁移能力的影响。结果表明:成功构建了慢病毒表达载体pLKO.1-CXCR7shRNA,显著下调MHCC97H细胞中CXCR7mRNA及蛋白的表达。增殖实验显示,与阴性对照组相比,干扰表达组细胞生长速度受到明显抑制(p<0.001);干扰CXCR7表达可诱导细胞凋亡,尤以早期凋亡率上调为著;划痕实验显示抑制CXCR7表达延长细胞的伤痕愈合时间。

关键词：肝细胞肝癌 CXCR7 增殖能力细胞凋亡细胞迁移

皖南尖吻腹蛇毒腺中C型凝集素类似蛋白基因的筛选和结构测定

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皖南尖吻腹蛇毒腺中C型凝集素类似蛋白基因的筛选和结构测定