内质网应激在维生素E琥珀酸酯诱导的胃癌细胞凋亡和自噬中作用的研究
作者单位：华北理工大学公共卫生学院
会议名称：《中国营养学会特殊营养分会第十三次学术会议》
会议日期：2023年
学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学]
摘 要：目的:明确内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate, VES)激活人胃癌MKN28细胞自噬和凋亡中发挥的作用。方法:体外培养人胃癌MKN28细胞,不同剂量(5,10,15,20μg/mL)VES处理细胞24小时后,Western blot检测ERS标志物葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78, GRP78),自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein1 light chain 3, LC3)、Beclin-1,凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和ERS凋亡通路关键信号分子C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein, CHOP)的表达情况。3 mmol/L 4-苯基丁酸(4-phenylbutyricacid,4-PBA)抑制ERS,设置对照组、4-PBA组、衣霉素(Tunicamycin,TM)组、VES组、VES+4-PBA组,Western blot检测GRP78、LC3、Beclin-1、Caspase-3和CHOP的表达情况,同时流式细胞仪检测各组的细胞凋亡率。结果:随着VES作用剂量的上升,ERS、自噬、凋亡相关蛋白和ERS凋亡通路关键蛋白表达均有所增加,且在20μg/mL VES组达到峰值。20μg/m L VES组GRP78(1.15±0.01)的表达较对照组(0.32±0.05)显著增加(P0.001);20μg/mL VES组Beclin-1(1.04±0.09)的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ(1.15±0.17)的比值较对照组Beclin-1(0.25±0.01)的表达、LC3Ⅱ/LC3I的比值(0.48±0.09)显著增加(均P0.001);20μg/mL VES组C-Caspase-3/Pro Caspase-3(1.55±0.42)的比值较对照组(0.65±0.36)显著增加(P0.01);20μg/m L VES组CHOP(0.98±0.01)的表达较对照组(0.31±0.07)显著增加(P0.001);抑制ERS后,VES+4-PBA组的GRP78(0.57±0.07),Beclin-1(0.49±0.16)的表达及LC3Ⅱ/LC3I(0.95±0.23),C-Caspase-3/Pro Caspase-3(0.70±0.16)的比值, CHOP(0.71±0.29)的表达较VES组明显降低(P0.05)。凋亡率检测结果显示,与对照组(2.03±0.95)%相比,TM组(39.40±4.77)%、VES组(38.10±0.66)%凋亡率显著升高(均P0.05);与VES组(38.10±0.66)%相比,VES+4-PBA组(21.57±3.16)%的细胞凋亡率显著降低(P0.05)。结论:VES可激活人胃癌MKN28细胞发生ERS,诱导胃癌细胞发生自噬和凋亡,ERS能促细胞自噬的发生且可能通过激活CHOP凋亡途径促进VES诱导的细胞凋亡发生。