基于突变酶Endo-M-N175的糖链相对定量
作者单位：延边大学药学院
会议名称：《中国化学会第十三届全国分析化学年会》
会议日期：2018年
学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 081704[工学-应用化学] 07[理学] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 070302[理学-分析化学] 0703[理学-化学]
关 键 词：糖链相对定量 Endo-M-N175Q 稳定同位素 LC-MS/MS
摘 要：基于LC-MS检测的化学标记是进行糖链定量分析的主要手段。这些方法可以在一定程度上能提高糖链分析的选择性和灵敏度,但在衍生化过程中会产生额外的副反应,不仅影响标记效果和样品的纯化,而且难以保持糖链原有结构。鉴于此,本研究以N-糖链为分析对象,借助糖苷合成酶（Endo-M-N175Q）转糖基反应[1],建立了既能一步完成糖链的酶切和标记,又能保持糖链原有结构的靶标N-糖链相对定量分析方法。利用新合成的d0（d8）-受体,利用SGP为模型糖肽考察了同位素标记糖链产物面积比相对定量方法的线性关系、动态范围、重现性和准确性,验证了相对定量方法的有效性。并应用于实际糖蛋白样品Ribonuclease B,Ovalbumin,Fetuin中进行了相对定量分析,结果验证到5种、21种、7种糖链的相对定量。另外,又在人血浆中识别到了15种糖链[2]。本方法简便、既能一步完成糖链的酶切和标记,又能保持糖链原有的结构。为开发糖组学相对定量分析方法提供了新的思路和理论依据,为差异性糖组学的发展提供了新的分析方法。