雷公藤多苷对SD大鼠生殖系统毒性机制及配伍减毒研究
作者单位：广东省科学院广东省生物资源应用研究所非临床评价研究中心 广东莱恩医药研究院有限公司
会议名称：《2016年第六届全国药物毒理学年会》
会议日期：2016年
学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学]
摘 要：目的:研究雷公藤对SD大鼠生殖系统的毒性及作用机理,然后选用补肾填精中药枸杞子、菟丝子、淫羊藿进行配伍减毒研究。方法:①4周龄SD大鼠360只,随机分为阴性对照组、雷公藤多苷低剂量组(37.8mg/kg)、高剂量组(94.5 mg/kg),每组设D7、15、30、60、90、恢复期(D120)观察时间点,每个时间点20只动物,分组后每天给药1次,连续90天,每日上午进行阴道涂片观察动情周期。每个解剖时间点采用20%乌来糖皮下注射麻醉,腹主动脉采血,分离血清,雌性检测GnRH、FSH、LH、E2、PROG,雄性检测GnRH、FSH、LH、TTE。剖取下丘脑、垂体等脏器,其中雌性动物子宫、卵巢、雄性动物睾丸、附睾称重计算脏器指数,进行附睾涂片,计算未成熟精子和精子畸形率,常规固定脏器,H-E染色,光镜下观察组织病理学变化。分性别免疫组化检测下丘脑-垂体-性腺雌激素受体(ER-α)和雄激素受体(AR)的表达。②6周龄SD大鼠60只,随机分为阴性对照组、雷公藤多苷18.9mg/kg、37.8mg/kg剂量组,枸杞子、菟丝子、淫羊藿4倍剂量组(14.4g生药/kg),雷公藤多苷2倍配伍组,雷公藤多苷4倍配伍组,每组10只动物。每天给药1次,连续30天。雌性动物每日观察动情周期。末次处理取血清检测生殖激素、剖取雌雄动物生殖脏器称重计算脏器系数、取附睾检测畸形精子率、组织常规固定进行H-E染色病理学观察、免疫组化法检测雌激素受体(ER-α)和雄性激素受体(AR)表达。结果:①与阴性对照组相比,雷公藤多苷高剂量组雄性动物给药第33周体重显著降低(P0.05),恢复期恢复;低、高剂量组发情后期比率显著下降(P0.01),高剂量恢复期未恢复;高剂量组D15、90子宫脏体系数显著升高(P0.05),恢复期恢复,低剂量组雄性大鼠D60-120大鼠睾丸、附睾的脏体、脏脑系数均明显下降(P0.01),高剂量组D15-120大鼠睾丸、附睾脏体系数、脏脑系数明显下降(P0.05或0.01);低、高剂量组雄性大鼠D60、90、120未成熟精子率明显升高(P0.01)。D30、60、90畸形精子率明显升高(P0.05或0.01);睾丸、附睾、卵巢、子宫发生明显的病理变化,且在停药30天未见恢复;雌性大鼠FSH、LH、E2、PROG含量明显降低(P0.01)。雄性大鼠FSH、LH、TESTO含量明显降低(P0.01);D60、90,雷公藤多苷高剂量组雌性下丘脑中ER-α受体表达下降(P0.01),恢复期恢复,D60、90,高剂量组雄性下丘脑中AR受体表达下降(P0.05或0.01),睾丸、附睾中AR的表达D60、90、120下降(P0.01)。②雷公藤多苷单用使雌性大鼠GnRH含量升高,动情周期紊乱,雄性动物睾酮含量降低;与雷公藤多苷单用相比,枸杞子、菟丝子、淫羊萑配伍组雌性动物GnRH含量降低、动情周期改善,雄性动物睾酮含量升高,且与阴性对照组相比未见明显差异,显示与枸杞子、菟丝子、淫羊萑配伍后能改善上述激素的分泌。枸杞子、菟丝子、淫羊萑4倍等效剂量单用时可使雌雄动物的FSH含量均降低,使雌性动物E2、PROG含量均降低,与2倍等效剂量雷公藤多苷配伍后,可提高上述激素的含量,但与4倍等效剂量雷公藤多苷配伍后改善作用并不明显。结论:①雷公藤多苷影响雌性动物的动情周期并损害子宫,损害雄性动物的睾丸及精子,其机制与对雄性大鼠的生殖毒性机制与干扰FSH、LH分泌,使睾酮分泌降低,影响AR在下丘脑、睾丸及附睾中的表达,从而继发性引起睾丸、附睾、精子相关的萎缩性病变有关;对雌性大鼠的生殖毒性机制与干扰FSH、LH分泌,使E2和P降低,影响ER-α在下丘脑中的表达,从而继发性的引起性周期改变和子官、卵巢相关的萎缩性病变有关。②枸杞子、菟丝子、淫羊藿与雷公藤多苷配伍对雷公藤多苷所致雌性动情周期紊乱有一定的改善作用,其机制可能与配伍方的拟激素作用能增强垂体及卵巢的反应性有关,但长期使用可能会使内分泌失调加重;枸杞子、菟丝子、淫羊藿与雷公藤多苷配伍能提高睾丸雄激素AR受体的表达,改善雷公藤多苷所致睾丸萎缩、脏器系数减少,睾酮含量降低等雄性生殖系统损害。