安格洛苷C对压力超负荷大鼠心肌纤维化及心肌组织TGF-β1基因表达的影响
作者单位：上海中医药大学药理教研室
会议名称：《中华中医药学会中药实验药理分会2014年学术年会》
会议日期：2014年
学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床]
关 键 词：安格洛苷C 心室重构 心肌纤维化 转化生长因子β1 基因表达
摘 要：目的:心肌纤维化(肝)主要表现为间质中胶原沉积增多,各型胶原比率失调和排列紊乱,可增加心肌的僵硬度,影响心肌的舒缩功能,成为心室重构(VR)持续发展和难于逆转的重要原因。安格洛苷C是一种从玄参中提取分离的苯丙素苷类成分,纯度95%,提取得率为1‰。本实验采用腹主动脉缩窄致大鼠VR模型,探讨安格洛苷C防治VR的作用及其机制。方法:体重220g左右的雄性SD大鼠,戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉,分离腹主动脉,用内径为0.6 mm的银夹不完全结扎左右肾动脉之间的腹主动脉,使之外径狭窄至0.6衄,制备压力超负荷性VR模型,同时设立假手术对照组,术后三天肌注青霉素防感染。造模后3天,手术组大鼠随机分组,每组10只。安格洛苷C三个剂量组分别灌胃给予7.5,15和30mg·kg安格洛苷C水溶液。阳性对照组灌胃给予卡托普利水溶液40mg/kg。假手术组和模型组大鼠灌胃给予等量蒸馏水,每天给药或对照液1次,容量均为20ml/kg/d,连续给药4周。4周后动物处理,检测如下指标:①血压、心率:麻醉大鼠后分离颈总动脉,插入聚苯乙烯导管至主动脉,连接八导生理记录仪记录动脉收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、心率(HR)等;②心脏质量指数:取心脏,分离左、右心室,准确称重并计算其与体重比,分别记为左心室肥厚指数(LVWI)和全心肥厚指数(HWI);③心肌组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和羟脯氨酸(Hyp)含量测定:取大鼠的左室心肌组织加入生理盐水在冰浴环境中快速匀浆,离心取上清,制成2%匀浆测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ),10%匀浆测羟脯氨酸(Hyp),同时进行蛋白测定,结果以每毫克蛋白中的AngⅡ和Hyp含量表示;④心肌组织病理测定:取左心室中段,10%福尔马林固定,石蜡包埋,切片,HE染色观察心肌细胞横断面面积;0.1%sirius红(溶于饱和苦味酸液中)染色观察左室心肌胶原纤维含量,用图像分析仪分析;⑤转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达水平测定:取左心室部分心肌,提取总RNA,反向转录复制cDNA,扩增TGF-β1基因片段,取GAPDH作内标看家基因进行常规PCR反应,比较各组基因表达强度差异。结果:腹主动脉缩窄4周后,模型组动物动脉血压均显著高于假手术组,心率加快并不显著,心脏质量指数明显增加、AngⅡ和Hyp含量显著增加,心肌细胞横断面面积明显变大,心室肌间隙有大量胶原纤维堆积以及Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量明显增高,心肌组织TGF-β1基因表达增高。说明成功制备了压力超负荷性VR模型。阳性对照药卡托普利对各项指标均显示良好的防治作用。安格洛苷C组与模型组动物相比:①血压下降:收缩压:安格洛苷C高剂量组(H)162.1±18.0mmHg,vs对照组(C)181.5±21.6mmHg,P0.05;舒张压:H116.8±15.2mmHg,vs C 131.9±13.1mmHg,P0.05),HR变化不明显;②心脏质量指数:安格洛苷C中(M)、高(H)剂量组LVWI和HWI显著降低(M:2.86±0.40,3.55±0.46;H:2.74±0.28,3.46±0.31 vs C 3.20±0.23,3.94±0.31 mg/g,P0.05);③AngⅡ、Hyp含量:安格洛苷C M、H组AngⅡ显著降低(M:729.±172,H:754.±147 vs C 887.±109pg/mg·prot,P0.05),Hyp含量也明显下降(M:0.406±0.061,H:0.381±0.042 vs C0.481±0.077μg/mg·prot,P0.05);④心肌细胞横断面面积和心肌组织胶原纤维含量:各治疗组心肌细胞横断面面积较模型组均减小,中、高剂量组差异有显著意义(M:3006±725;H:2634±589 vs C 4263±1282,P0.01)。心肌血管周围(PVCA)和左室肌间隙(CVF%)胶原沉积明显减少(M:3.17±1.52,1.16±0.48;H:2.69±1.25,1.06±0.65 vs C 5.13±1.95,2.22±1.04,P0.05),Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维含量(‰)较模型组为轻(L:2.54±0.65,0.41±0.19;M:2.52±0.61,0.35±0.13;H:2.49±0.85,0.34±0.10 vs C 4.43±2.13,0.62±0.09,P0.05);⑤TGF-β3 1 mRNA表达水平:安格洛苷C各剂量组TGF-β1 mRNA表达显著降低,(L:5.56±2.91;M:5.38±2.67;H:5.45±1.78 vs C 19.38±4.85,P0.01)。结论:本研究表明,安格洛苷C能显著降低腹主动脉缩窄大鼠心脏质量指数,降低血压,心肌AngⅡ、Hyp含量,减小左室心肌细胞的横断面面积,并降低PVCA、CVF以及Ⅰ、Ⅲ型胶原含量,减轻心肌间质胶原沉积、防止纤维化,并下调MF相关基因TGF-β1 mRNA的表达水平。安格洛苷C的较早介入治疗能明显改善MF和VR,此作用可能与影响TGF-β1表达有关。