BCG通过TLRs上调RAW264.7细胞中TRIM59蛋白表达的研究
作者单位：吉林大学基础医学院免疫学系
会议名称：《第十一届全国免疫学学术大会》
会议日期：2016年
学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学]
关 键 词：巨噬细胞 BCG TLRs TRIM59 表达 机制
摘 要：背景:TRIM59蛋白是TRIM家族中的一员,该家族与炎症、感染、肿瘤等密切相关。本实验室前期结果发现,BCG刺激小鼠后,腹腔巨噬细胞中TRIM59表达上调,但这种作用是否是直接作用以及其机制并不十分清楚。研究发现,TLRs在BCG的诱导下能介导免疫反应,因此,我们推测TLRs可能在BCG引起巨噬细胞中TRIM59表达上调的过程中起关键作用。目的:探究BCG刺激巨噬细胞RAW264.7后TRIM59表达上调的机制。方法:将巨噬细胞RAW264.7以1×105个/孔接种于12孔板,待细胞贴壁后,加入BCG(浓度分别为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml)刺激24h,用Trizol提取总RNA,将RNA逆转录成cDNA,通过RT-PCR检测基因水平上TRIM59的表达;并用RIPA提取总蛋白,通过Western Blot检测蛋白水平上TRIM59的表达。在RAW264.7细胞中分别加入TLR2(10ug/ml、20ug/ml)、TLR4(10ug/ml、20ug/ml)抗体封闭30min,再以0.3mg/ml的BCG刺激24h,同上述方法,通过RT-PCR和Western Blot检测TRIM59的表达。结果:BCG刺激RAW264.7后,TRIM59在基因水平和蛋白水平的表达均高于对照组,其中,0.3mg/ml BCG刺激组TRIM59的表达量升高最为显著,为对照组的2-3倍;抗体封闭RAW264.7表面TLR2、TLR4后,TRIM59表达下降,其中TLR2封闭组TRIM59表达下降更为显著,此外,TRIM59的表达与TLR2、TLR4呈浓度非依赖性。结论:BCG通过TLR2、TLR4引起RAW264.7细胞上TRIM59高表达,尤其以TLR2为主。